【正文】 相（例如：磷酸鹽） 要求使用霧化氣源（典型的是氮?dú)猓? 不同的色譜條件下霧化及除溶劑的參數(shù)需要重新優(yōu)化 破壞性技術(shù) 蒸發(fā)出的溶劑要因到戶外或通風(fēng)櫥里 對揮發(fā)性化合物的檢測不理想 一般得到的是非線性校正曲線 某些化合物的檢測靈敏度不如其他檢測器 光電二極管矩陣（ Photo Diode Array） Photo Diode Array 簡稱： PDA或 DAD PDA檢測器 － 特點(diǎn) 三維水平的吸光度檢測器 AUnm 2 8 3 . 52 4 0 . 92 4 5 . 6AU0 . 0 0 00 . 0 0 50 . 0 1 00 . 0 1 5M in u t e s2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 02.1934.3106.448二極管矩陣檢測器是在 1982年首度出現(xiàn)的 在整個(gè) UVVis帶寬上檢測吸光度 都需要相應(yīng)的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析 PDA檢測器的用途及要求 光電二極管檢測器可以提供許多又用的功能 光譜信息 色譜峰純度 譜庫擬合 像其他所有的 UV/Vis檢測器一樣，需要： 高的信噪比；好的線性 另外；還需要： 光學(xué)分辨率 光譜靈敏度及光譜分析軟件 光學(xué)分辨率（帶寬） 好的光譜分辨率可得到高質(zhì)量的光譜信息 nm Benzene vs 損失分辨率， UV最大波長移動(dòng) nm nm 190 nm nm 分辨率與色譜性能 高分辨率給出更多數(shù)據(jù)點(diǎn)（同樣波長范圍） 高分辨率有更好的線性 低分辨率的數(shù)據(jù)文件尺寸較小 寬的光學(xué)帶寬可以得到更高的光通量（靈敏度） AU0 . 0 0 00 . 0 0 10 . 0 0 2nm2 5 0 . 0 0 3 0 0 . 0 02 6 6 . 2AU0 . 0 0 00 . 0 0 10 . 0 0 20 . 0 0 3nm2 5 0 . 0 0 3 0 0 . 0 02 7 1 . 53 1 2 . 1 nm nm PDA的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn) 通用的 UV/Vis檢測 好的選擇性、線性 提供色譜峰的 UV/Vis光譜圖（峰確認(rèn)） 可提供純度估計(jì) 缺點(diǎn) 低光學(xué)通量（較窄的帶寬通量） 與普通 UV/Vis相比更復(fù)雜，容易漂移 燈輸出能量隨時(shí)間降低 質(zhì)譜（ Mass Spec.）作為 HPLC檢測器 m/z +/ MS： 質(zhì)譜（ Mass Spectrometry）是一種按照分子量及其電荷分離物質(zhì)的技術(shù)，經(jīng)過多年的不斷開發(fā)及改進(jìn)，已經(jīng)使質(zhì)譜成為一種多功能、高靈敏度，并被愈來愈廣泛使用的分析技術(shù)。 有的儀器信號(hào)及噪音大于另一臺(tái) 2～ 3倍，光電倍增管的特征是導(dǎo)致這個(gè)現(xiàn)象的原因。 2. 電子失去過剩的能量成為振動(dòng)能，并達(dá)到最低的激發(fā)單重態(tài)。在不好的色譜系統(tǒng)中，第一個(gè)峰則消失在基線噪音中。 C. 流動(dòng)相 ： A: % TFA in Water. B: % TFA in Acetonitrile. 梯度 ： 5 40% B in 35 min. 流速 ： mL/min. 樣品 ： 水（ 10 181。C MV 2600 2400 2200 2022 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 200 400 Minutes 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 0% B 25 % B Chromatography Forum: Is RI with a Reverse Phase gradient possible? By XXXXXXXXX: I have a good separation of a multisubstituted, cyclohexane that fully resolves ~12 different oligomers. I can detect the ponents by MS, but I would like to use a standard LC detector instead. There is virtually no adsorption above 230nm and below 230nm picks up solvent interference. I’m considering using RI detection and afterward subtracting a blank run. Is there any hope of this working or would I be wasting my time? 示差檢測器的缺點(diǎn) － 對溫度敏感 流動(dòng)相 － 甲醇 / minute 檢測器溫度 － 35?C；沒有使用柱溫箱 Temp.(Deg C) MV Minutes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 室溫變化 RI 基線 吸光度（ Absorbance UV/Vis）檢測 目前實(shí)驗(yàn)室中最流行的選擇 多數(shù)公司約 75%的檢測器是吸光度檢測器（其中 50%是多波長， 25%是 PDA） 測量通過溶液后的紫外或可見光光強(qiáng)度的損失 吸光度與樣品濃度呈線性關(guān)系 在被測物的最大吸收波長處檢測時(shí)靈敏度最大 吸光度檢測器（ UV/Vis）－ 優(yōu)點(diǎn) 這種檢測器簡單、可靠 多數(shù)人熟悉并喜歡這種技術(shù) 可以作梯度實(shí)驗(yàn)并且是非破壞性的 大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度 一般來說靈敏度還可以 AU Minutes Parabens at 254 nm 吸光度檢測器（ UV/Vis）－ 缺點(diǎn) 由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用檢測器 對某些化合物的檢測靈敏度不及其他檢測器 樣品中不同化合物的最大吸收波長不同時(shí)，需要使用多波長檢測，或使用折衷的波長 受流動(dòng)相組成的影響： 用截止波長以上至少 5～ 10nm作為工作波長 緩沖鹽、離子對試劑、胺改性劑也會(huì)有影響 背景吸收的影響 背景吸收降低了線性范圍 多數(shù)流動(dòng)相有紫外吸收 實(shí)際 濃度 理想 1 0 吸光度 2 1 0 背景吸收 背景吸收對紫外檢測器噪音的影響 UV Spectrum of Eluents with % TFA Against HPLC Grade H2O Blank AU nm H20 with % TFA 50% ACN with % TFA 溶劑混合的基線噪音 色譜條件 色譜柱 ： C18, 5 181。C 樣品： Paraben Mixture 示差檢測器的缺點(diǎn) － 不適宜作梯度 流動(dòng)相： A= CH3CN/H2O 75:25 B= CH3CN 流速： mL/min 色譜柱： NH2 色譜柱溫： 30 186。 Practical HPLC Method Development 2nd Ed., WileyInterscience, New York, 1997, p. 2 1. 得到樣品信息，確定分離目標(biāo) 2. 確定特定 HPLC過程、樣品預(yù)處理等的需求 3. 選擇檢測器及其條件 4. 選擇 HPLC方法；初步分離；建立最佳分離條件 5. 優(yōu)化分離條件 6. 檢查特定過程的問題及需要 7. 定量校正 8. 日常使用的確認(rèn) 選擇液相色譜的檢測器 要考慮的因素： 你要分離的化合物 /樣品的化學(xué)特性 化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子量及紫外光譜等等 流動(dòng)相的影響（溶劑、緩沖鹽改性劑等） 梯度還是等度 靈敏度需求 是否有雙檢測的需求 選擇液相色譜的檢測器 通用檢測器 RI ELSD MS 靈敏度 mg ng pg 線性范圍 104 否 103 流速敏感 是 否 是 溫度敏感 是 否 否 破壞性 否 是 是 選擇性檢測器 ABS FL EC Cond MS 靈敏度 ng pg fg pg pg 線性范圍 105 103 106 105 103 流速敏感 否 否 是 是 是 溫度敏感 否 否 是 是 是 破壞性 否 否 是 否 是 可供選擇的液相色譜檢測器 Absorbance (UV/Vis) Chemiluminescence Circular D