基因診斷ppt課件(2)-文庫吧資料
2025-05-04 22:35本頁面
【正文】 擴增該基因外顯子 （ 全長 、 外顯子起來全長 c14kb、 用多對引物 ） 可檢出：外顯子拼接異常 。 （ 3） 多重 PCR法 如有人設(shè)計多對引物進行多重 PCR擴增該基因的 9個易發(fā)缺失 “ 熱點區(qū) ” DNA片段 ， 可檢出 80%有基因缺失的DMD患者 。 （ 2）非基因缺失型部分重復(fù)（病例的 5%） （ 1）基因組探針法 用 XP21區(qū)分離得到的不同探針如（ P20）來進行相應(yīng)內(nèi)切酶酶譜分析、檢出率取決于探針數(shù)和酶切位點數(shù)目。 （ 1） DNA片段缺失（ 60%的病例 →導(dǎo)致閱讀框移碼 →移碼實變 →致 DMD，整碼缺失 →BMD）。 （一） DMD分子基礎(chǔ)： 抗肌萎縮蛋白基因長約 2900kb，含 79個外顯子。 （二） β 地中海貧血的基因診斷 PCR/ASO斑點雜交法 合成 2對 PCR引物（擴增區(qū)段 700bp和580bp，分別包含 14種和 1種可能突變） →合成等位特異寡核苷酸 (ASO)探針（ 4～ 6對，分別標(biāo)記） → 制備 DNA樣品 → PCR擴增 → 斑點印跡雜交 RFLP分析法 三 α地中海貧血的基因診斷 a c 左側(cè)缺失 右側(cè)缺失 b b b a α2 α1 α1 α2N端 α1C端 正常基因序列 ?PCR擴增法 —— 定性分析 左側(cè)缺失型基因序列 右側(cè)缺失型基因序列 ac擴增 ab無擴增片段 ab擴增 + ﹣ 正常人 右側(cè)缺 失患者 地中海貧血患者基因組的 PCR分析 左側(cè)缺失患者 四、杜氏肌營養(yǎng)不良癥（ DMD） 1. DMD是常見的性連鎖隱性遺傳病， 2. 主要特征是進行性肌萎縮和腸肌假性肥大， — 因突變形式不同。 （一） β 地貧病的分子基礎(chǔ) β珠蛋白基因全長 2053bp，含 2個內(nèi)含子（ IVS－ I和 IVSII）， 3個外顯子。 高危人群地中海人、中東人、印度人、中國人；中國人群中又一廣東、廣西、四川、貴州等省發(fā)病率最高。 3180。 3180。 二、鐮狀細(xì)胞貧血 血紅蛋白?。ó惓Ｑt蛋白?。? 紅細(xì)胞呈鐮刀狀，壽命短，引起溶血性貧血。 二 基因診斷的特點 高特異性 高靈敏度 獲得穩(wěn)定的結(jié)果 早期快速 適用性強，應(yīng)用范圍廣 第二節(jié) 遺傳病的基因診斷 一、概述 人類的遺傳病達數(shù)千種 地中海貧血在意大利等國家發(fā)病率達 10％ 鐮狀細(xì)胞貧血在美國黑人中發(fā)病率達 14％ 我國常見的遺傳性疾病有地中海貧血、異常血紅蛋白病和血友病。 （二）利用 PCR及結(jié)合其他技術(shù)進行基因診斷 直接采用 PCR進行基因診斷 采用 PCR產(chǎn)物的限制性片段長度多態(tài)性分析（ PCRRFLPs）進行基因診斷 采用 PCR結(jié)合等位基因特異性寡核苷酸探針（ ASO）斑點雜交進行基因診斷 * 通過 PCR產(chǎn)物的反相點雜交 (RBD)進行基因診斷 采用 PCR產(chǎn)物的單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (SSCP)分析進行基因診斷 采用 PCR技術(shù)對靶核酸進行定量分析 寡核苷酸雜交分析SNP和等位基因特異寡核苷酸雜交 （ ASO） （三） DNA序列測定 DNA序列
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