從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明-文庫吧資料
2025-04-28 22:41本頁面
【正文】 鏡檢：油鏡觀察染色結(jié)果。脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約15－20秒，后立即用流水沖洗。革蘭氏染色步驟：涂片、干燥及固定初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。否則繼續(xù)進行劃線分離，培養(yǎng)后再經(jīng)革蘭氏染色鏡檢直至得到純種桿菌后進行芽孢染色。實驗室里，四個平板均加入碘液，立即觀察記錄陽性和陰性菌落所在位置，并可同時記錄透明圈的大小。獲得產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌純種：上述劃線接種后的菌落中各挑取形態(tài)特征不一致的點接于倒好的淀粉牛肉膏培養(yǎng)基中，一個土樣取8個平板兩兩標記同一位置同序號標記，一平板分5個區(qū)域，點接重復(fù)兩次，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。再繼續(xù)分區(qū)劃線23次，以獲得較純的菌種。劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于28~29176。復(fù)篩方法【1】劃線接種（分區(qū)劃線法）：在上述不同稀釋度培養(yǎng)基中挑取不同形態(tài)的單菌落進行分區(qū)劃線，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第1次平行劃線3~4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約60176。每個濃度做3個平板（重復(fù)）。在土壤稀釋過程中，用相同的移液槍頭由濃到稀來稀釋。取已稀釋成101土壤液，用無菌的移液器吸取1mL土壤懸液加入102的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成102土壤稀釋液。每個環(huán)境的土樣裝1個錐形瓶，共2個，同時將其分為4組，編號AB。 香柏油、二甲苯吲哚試驗：乙醚、吲哚試劑：40％NaOH溶液、α奈酚，淀粉酶活力測定：1%3, 5 二硝基水楊酸試劑 儀器或其它用具無菌玻璃涂棒 無菌吸管 接種環(huán) 無菌培養(yǎng)皿 土樣 三角瓶 燒杯 洗瓶 玻棒 試管 酒精燈 擦鏡紙 接種環(huán) 酒精燈 載玻片 吸水紙等。 溶液或試劑染料革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇。 配制營養(yǎng)明膠培養(yǎng)基（%）：蛋白胨 、調(diào)pH ~（%）：①蛋白胨1 氯化鈉2 ～ 蒸餾水 ②蛋白胨1 氯化鈉10 ～ 蒸餾水 ③蛋白胨1 氯化鈉20 ～ 蒸餾水 ④蛋白胨1 氯化鈉25 ～ 蒸餾水 加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，～。 淀粉牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(%)： ～ ～ 發(fā)酵培養(yǎng)基(%)：玉米粉 2 黃豆餅粉 CaCl MgSO4 NaCl K2HPO4 檸檬酸鈉 (溶解后加) 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（）（%）： K2HPO4 校正pH ～ 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗用）（%）：蛋白胨1% % 校正pH ～ 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（%）： 硫酸鎂(MgSO4四、實驗材料和用具 土樣采集：采集廣大植物園內(nèi)的有機土壤，和生化樓下花壇的有機土壤 營養(yǎng)瓊脂(%)：蛋白胨1 ～ 蒸餾水 將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，～。2. 生命力強:無濕狀態(tài)可耐低溫60℃、耐高溫+280℃，耐強酸、耐強堿、抗菌消毒、耐高氧(嗜氧繁殖)、耐低
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