植株生理生長指標(biāo)的測定-文庫吧資料
2025-04-13 23:15本頁面
【正文】 中硝酸還原酶活性μg/g?h=xVSVTWtx—反應(yīng)液酶催化產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量（μg）； VT—提取酶時加入的緩沖液體積，mL；VS—酶反應(yīng)時加入的粗酶液體積，mL； W—樣品鮮重，g；t —反應(yīng)時間，h。終止反應(yīng)和比色測定 保溫結(jié)束后立即加入1mL磺胺溶液終止酶反應(yīng)，再加1mL萘基乙烯胺溶液，顯色15min后于4000r/min下離心5min，取上清液在540nm下比色測定吸光度。表1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時各物質(zhì)加入量試劑/mL管 號1234567亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液0蒸餾水1%磺胺4444444%萘基乙烯胺4444444每管含亞硝態(tài)氮/μg0（二）樣品中硝酸還原酶活力測定 酶的提取，剪碎于研缽中置于低溫冰箱冰凍30min，取出置冰浴中加少量石英砂及4mL提取緩沖液，研磨勻漿，轉(zhuǎn)移于離心管中在4℃、4000r/min下離心15min，上清液即為粗酶提取液。搖勻后在25℃下保溫30min，然后在540nm下比色測定。 （三）儀器設(shè)備 冷凍離心機(jī)，分光光度計，天平（感量 mg ），冰箱，恒溫水浴，研缽，剪刀，離心管，具塞試管，移液管，洗耳球。 提取緩沖液：、 EDTA溶于100mL mol/L 。12H2O， K2HPO4 mol/L KNO3溶液： mol/L 。 1％磺胺溶液：（25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/L HCl）。12H2O （二）試劑 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取分析純NaNO2 ，然后再吸取5mL定容至1000mL，即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液?；铙w法步驟簡單，適合快速、多組測定；離體法復(fù)雜，但重復(fù)性較好。h）為單位。硝酸還原酶活性可由產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮的量表示。產(chǎn)生的亞硝酸鹽與對–氨基苯磺酸（或?qū)ΘC氨基苯磺酰胺）及α萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。四、結(jié)果計算單位質(zhì)量鮮根的四氮唑還原強(qiáng)度mg/g?h=CWtC—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的四氮唑還原量（mg）；W—樣品質(zhì)量（g）；t —反應(yīng)時間（h）。（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研缽內(nèi)磨碎，以提出甲月替。、用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標(biāo)準(zhǔn)比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。定量測定（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作％，加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產(chǎn)生紅色的甲腙。（2
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