【正文】 有細(xì)胞毒作用的 6甲氧嘌呤阿糖苷腺苷三磷酸（ araMTP）而殺傷轉(zhuǎn)染 VZVTK基因的細(xì)胞。 ① HSVTK/GCV系統(tǒng) TKGCV系統(tǒng)中的 TK基因多為單純皰疹病毒（ HSV）和水痘皰疹病毒（ VZV）中的胸苷激酶基因。每種自殺基因系統(tǒng)都包含特定的酶和前體藥物。 2．目前常用的腫瘤基因治療方法 （一） 自殺基因治療（ suicide gene herapy） 自殺基因?qū)嶋H上是一種前體藥物轉(zhuǎn)化酶基因，這些基因不存在于哺乳動物細(xì)胞中。 ③ 將目的基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞 將目的基因裝載到載體內(nèi)，再根據(jù)所采用的載體決定使用不同的轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染方式將載體導(dǎo)入體細(xì)胞內(nèi)。載體還分瞬時表達(dá)和永久表達(dá)系統(tǒng)。 ② 載體的選擇 目的基因的轉(zhuǎn)入后必須能有效在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，這就要求選擇合適的載體系統(tǒng)。確定了目的基因后就可以通過傳統(tǒng)的方法獲取目的基因片段，如采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR法）進(jìn)行體外擴增。對于體內(nèi)途徑而言，轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式還要有較高的特異性，使載體主要轉(zhuǎn)染到目的的靶細(xì)胞內(nèi)。 ② 體內(nèi)途徑 將外源基因裝配到特定的真核細(xì)胞表達(dá)載體中，直接導(dǎo)入體內(nèi)的細(xì)胞。 （三）基因治療的途徑 ①體外途徑 將含有外源基因的載體在體外導(dǎo)入到人體自體、異體或異種細(xì)胞中，經(jīng)過體外的擴增后再回輸入體內(nèi)。如向腫瘤細(xì)胞中導(dǎo)入單純皰疹病毒（ HSV）胸苷激酶基因，然后給予病人無毒性 GCV藥物，由于只有含 HSVTK基因的細(xì)胞才能將GCV轉(zhuǎn)化成有毒的藥物。此技術(shù)還可以封閉腫瘤細(xì)胞的耐藥基因的表達(dá)，增加化療效果。利用反義核酸技術(shù)能特異地封閉基因表達(dá)特性，抑制特定的基因表達(dá)，達(dá)到治療疾病的目的。常用的細(xì)胞因子有 IL TNF、 GCSF、 IL4共刺激分子等，激活體內(nèi)抗腫瘤免疫反應(yīng)，達(dá)到預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和控制腫瘤生長的目的。因此，通過單個抑癌基因的導(dǎo)入可以控制腫瘤細(xì)胞的生長。目前腫瘤基因治療的直接應(yīng)用方案中，超過半數(shù)采用抑癌基因。目前，基因治療多采用這種方式。 ①基因增補 （ gene augmentation）又稱基因修飾。目前，基因治療的概念擴展為凡是采用分子生物學(xué)的方法和原理，在核取水平上開展的疾病治療方法都可稱為基因治療。 三、基因治療 1．基因治療的概念、策略和途徑 （一）概念 探索利用遺傳物質(zhì)，來糾正人自身基因結(jié)構(gòu)或功能上的異常，或抑制外源病原體遺傳物質(zhì)的復(fù)制，從而達(dá)到治病的目的，這既是基因治療的構(gòu)想。 如果能通過 DCs疫苗的推廣應(yīng)用，首先達(dá)到預(yù)防手術(shù)后復(fù)發(fā)的目的，可以使 1/3的病人得到根治。 就目前的研究結(jié)果看，以 DCs為基礎(chǔ)的疫苗是所有方案中比較理想的疫苗， DCs疫苗的缺點是分離和體外培養(yǎng)需要很高的技術(shù)要求，離大規(guī)模推廣應(yīng)用還有一段距離。因此， DCs疫苗的治療療效尚需提高。 在其它腫瘤中的應(yīng)用療效略低，有效率在 10%~30%。 另一項臨床試驗表明， 11個 Ⅳ 期的惡性黑色素瘤病人，給予 MAGE3A1多肽致敏的成熟的單個核細(xì)胞來源的 DCs，結(jié)果在 8個病人中發(fā)現(xiàn) MAGE3A1特異性的 CTL的增殖，并可喜的發(fā)現(xiàn)有 6人出現(xiàn)個別轉(zhuǎn)移灶的消退，顯示了 DCs介導(dǎo)的免疫反應(yīng)即使在晚期惡性黑色素瘤病人中也有治療效果。體外大量產(chǎn)生的 DCs用腫瘤抗原進(jìn)行沖擊制備的疫苗在國外已經(jīng)進(jìn)入 Ⅲ 期臨床試驗；采用腫瘤細(xì)胞裂解物，腫瘤抗原蛋白，腫瘤抗原多肽等沖擊的 DCs疫苗的臨床研究獲得了比較理想的效果。這些成熟的DCs表面還高表達(dá)共刺激分子和黏附分子，具有強大的激活 T淋巴細(xì)胞的功能。 被捕獲的抗原在 DCs內(nèi)經(jīng)過處理、剪切成短肽，然后與MHC結(jié)合并被有效地呈遞至細(xì)胞表面。 DCs是到目前為止發(fā)現(xiàn)的人體最有效的抗原呈遞細(xì)胞之一。腫瘤細(xì)胞表面缺乏MHC分子和共刺激分子，無法激活 T淋巴細(xì)胞免疫。重組的抗原疫苗主要用病毒載體（病毒疫苗）或載體DNA（核酸疫苗）來表達(dá)。 腫瘤弱抗原與細(xì)菌或病毒抗原、生物毒素，如白喉毒素、假單胞菌毒素等的重組可以明顯提高腫瘤抗原的抗原性，促進(jìn)抗原遞呈細(xì)胞對腫瘤抗原的吞噬遞呈。許多免疫佐劑都有一定的毒性而不能應(yīng)用于臨床，所以抗原蛋白疫苗大多是以重組形式出現(xiàn)的。 靈長類動物實驗研究證實最佳的免疫效果需要將腫瘤蛋白與強免疫原性蛋白相交聯(lián)。 但到目前為止，還沒有證據(jù)證明其在臨床上的有效性。 （二）分子疫苗 人體的免疫 T淋巴細(xì)胞對抗原的識別是 8~10個氨基酸的短肽，因此，有人設(shè)計了抗原多肽與免疫佐劑混合的多肽疫苗。 近年來，轉(zhuǎn)基因腫瘤瘤苗研究較多的是轉(zhuǎn)導(dǎo) IL集落刺激因子（ CSF）的方式制備瘤苗。 盡管如此，細(xì)胞瘤苗也有其優(yōu)越性，就是因為腫瘤細(xì)胞內(nèi)包含了許多目前尚未發(fā)現(xiàn)的腫瘤抗原，特別適合那些尚未發(fā)現(xiàn)特異腫瘤抗原或相關(guān)抗原的腫瘤類型的病人的治療。這種瘤苗的應(yīng)用還必須配合免疫佐劑（如卡介苗）以提高治療效果。 在小鼠腫瘤模型中，通常使用照射或藥物滅活的腫瘤細(xì)胞免疫動物，以保護(hù)小鼠免受接種的腫瘤的侵襲。腫瘤疫苗是以激活機體主動免疫功能為基礎(chǔ)的免疫治療，特異性強，療效高，是當(dāng)今腫瘤免疫治療的發(fā)展方向。 4．腫瘤疫苗 腫瘤疫苗主要有全細(xì)胞疫苗、蛋白分子疫苗、多肽疫苗、重組分子疫苗和樹突狀細(xì)胞（ DCs）疫苗等。 其后， CD3激活的殺傷細(xì)胞（ CD3AK）和細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（ CIK）的問世也沒有能扭轉(zhuǎn)這一趨勢。 其后，他的研究室又推出腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（ TIL）過繼免疫治療，采用從手術(shù)切除的腫瘤標(biāo)本或其引流淋巴結(jié)分離的淋巴細(xì)胞經(jīng)體外激活制作成抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞，效果在LAK細(xì)胞的基礎(chǔ)上得到進(jìn)一步提高。Rosenberg教授首先采用 LAK細(xì)胞治療腫瘤，成為當(dāng)時免疫治療研究的熱點。據(jù)報道其效果均優(yōu)于普通的單克隆抗體。 近幾年來，通過基因工程技術(shù)將單抗 與細(xì)胞因子或生物毒素進(jìn)行交聯(lián)，形成融合蛋白的產(chǎn)品不斷問世。為了提高其抗腫瘤效能，另外一種方法就是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合的特性，利用抗體的導(dǎo)向作用，將攜帶的具有殺傷腫瘤的物質(zhì)遞送到腫瘤部位，并特異性結(jié)合到表達(dá)相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞或腫瘤區(qū)域血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而獲得抗腫瘤效果。這兩種單抗均已被美國 FDA批準(zhǔn)用于大腸癌的治療。但是曲妥珠單抗增加了蒽環(huán)類藥物（如多柔比星、表柔比星）的心臟毒性，在治療中應(yīng)加以注意。