原生質(zhì)體培養(yǎng)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-20 10:44本頁(yè)面
【正文】 /總原生質(zhì)體數(shù) 100 （二）測(cè)定原生質(zhì)體的密度 原生質(zhì)體的密度（個(gè) /ml） =（原生質(zhì)體數(shù) /1區(qū)域） 104 稀釋倍數(shù) （三）原生質(zhì)體產(chǎn)量的測(cè)定 Y=DV / FW Y（個(gè) /g） —— 原生質(zhì)體產(chǎn)量 D（個(gè) /ml） —— 存活原生質(zhì)體密度 V（ ml） —— 制備所得原生質(zhì)體懸液的總體積 FW（ g） —— 制備原生質(zhì)體所用材料的鮮重 四、影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素 原生質(zhì)體活力 選擇生長(zhǎng)健康植株上的外植體，或分裂旺盛的愈傷組織或懸浮細(xì)胞，在酶解處理時(shí)酶制劑濃度不要過(guò)高。 特點(diǎn)：以一種植物細(xì)胞制成的平板，支持另一種植物原生質(zhì)體的生長(zhǎng)。原生質(zhì)體易受熱傷害，易破碎。需更換新鮮液體培養(yǎng)基。 雙層培養(yǎng)法 固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)淺層培養(yǎng)相結(jié)合的方法，效果最佳。 懸滴法培養(yǎng) 將含一定密度原生質(zhì)體的懸浮液，滴在 6cm培養(yǎng)皿蓋內(nèi)側(cè)上，皿底加入培養(yǎng)液和滲透劑等液體保濕，此時(shí)培養(yǎng)小滴懸掛在皿蓋內(nèi)。 平板法培養(yǎng) 原生質(zhì)體（密度為 4 105/ml）與等量體積瓊脂糖培養(yǎng)基均勻混合 — 置于 6cm培養(yǎng)皿（ 23mm） ,暗培養(yǎng) — 57天原生質(zhì)體開(kāi)始分裂 特點(diǎn)：原生質(zhì)體分布均勻，利于分裂，容易獲得單胞株系，可定位觀察。操作簡(jiǎn)單，可微量培養(yǎng)，細(xì)胞植板率高。 滲透壓：高滲溶液，培養(yǎng)時(shí)一般逐步過(guò)渡，通常的滲透劑是甘露醇和山梨醇。 四、影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素 PH 酶液的 PH對(duì)原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力影響很大，因植物材料不同要求也不同，一般為 。 四、影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素 質(zhì)膜穩(wěn)定劑 為了提高質(zhì)膜的穩(wěn)定性和增加原生質(zhì)體的產(chǎn)量，可在酶液中添加多聚陽(yáng)離子和無(wú)機(jī)鈣離子作為質(zhì)膜穩(wěn)定劑。一類(lèi)是無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，由氯化鈣、硫酸鎂、氯化鉀或培養(yǎng)基中的無(wú)機(jī)鹽組成。木本植物細(xì)胞壁成分堅(jiān)厚，半纖維素較多，適當(dāng)添加半纖維素。 酶的種類(lèi)、組合和酶解時(shí)間 選擇純度高的酶類(lèi)，根據(jù)酶解材料細(xì)胞壁的特性及酶活性大小確定適宜的酶液組合。 形態(tài)識(shí)別 形態(tài)上完整，含有飽滿(mǎn)的細(xì)胞質(zhì)，顏色新鮮的原生質(zhì)體即為存活的。 不連續(xù)梯度離心法：在離心管中首先放入不同濃度的 Ficoll溶液，構(gòu)成不同梯
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