化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-20 09:28本頁(yè)面
【正文】 33●*基態(tài) 電極 將已包被了抗體的乳膠微 粒和待測(cè)標(biāo)本加入反應(yīng)杯中，經(jīng)溫育一定時(shí)間 后 ,再加入 AP標(biāo)記抗體，溫育 ,形成固相包被抗 體 抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物 技術(shù)要點(diǎn) 將復(fù)合物轉(zhuǎn)移到玻璃纖維上，用緩 沖液洗滌，沒結(jié)合的抗原被洗脫，酶標(biāo)抗體 抗 原 膠乳微?？贵w復(fù)合物則被保留在纖維膜上。 二、技術(shù)類型 根據(jù)酶促反應(yīng)底物不同可分為： 根據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)模式分 ： 熒光酶免疫測(cè)定技術(shù)反應(yīng)原理圖 EEEEE 洗滌 棄上清 EE堿性磷酸酶 標(biāo)記抗體抗體包被塑料微珠樣本抗原 4 M U激發(fā)熒光E 是利用理想的酶熒光底物，生成的產(chǎn)物穩(wěn)定并有 強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，通過測(cè)定熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。 特點(diǎn)： ①反應(yīng)在電極進(jìn)行； ②電子供體為：三丙胺（ TPA） ③化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕 返回 三聯(lián)毗啶釕 分子結(jié)構(gòu)圖 NNNN NNR uOONOO第二節(jié) 發(fā)光酶免疫測(cè)定 （ CLEIA） 一、原理 屬于酶免疫測(cè)定的一種。反應(yīng)迅速、背景低、 信比高，發(fā)光量與 AE濃度呈線性關(guān)系。 光 AP /OH — HPO4 2— O OO C H 3O AMPPD 4MUP ? 發(fā)出 448nm的熒光 4MUP被 AP催化生成 4甲基傘形酮，在360nm的 激發(fā)光的作用下， ，可用熒 光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。 ? CLEIA中常用的酶有 HRP和 AP ? HRP的發(fā)光底物有魯米諾、對(duì) 羥基苯乙酸 ? AP的發(fā)光底物有 AMPPD、 4MUP（熒光底物） ? 特點(diǎn)：可作標(biāo)記物、也可作過氧化物酶的底物 魯米諾 H2O2 /OH — HRP +N2 + H2O +光 對(duì) 羥基苯乙酸（ HPA） ? HPA在 H2O2存在下被 HRP氧化成氧化二聚體（熒光 物質(zhì)），在 350nm激發(fā)光作用下，發(fā)出 450n
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