【正文】 保留時(shí)間 =相對(duì)保留值 *內(nèi)參考峰的實(shí)際范圍 由此公式算出的共有峰保留時(shí)間如表 25 所示。 表 24 共有峰在 10 種樣品中的對(duì)應(yīng)峰號(hào)關(guān)系圖 共有峰 Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 Y7 Y8 Y9 Y10 A（ ） 2 1 1 1 1 1 1 1 1 2 B（ ） 9 8 9 3 8 12 9 6 8 6 C（ ） 10 9 10 4 9 13 10 7 9 7 D（ ） 12 11 12 5 11 15 13 9 10 9 E（ ） 16 13 18 6 13 22 15 10 13 12 F（ ） 17 14 19 7 14 24 16 11 14 13 G（ ） 18 15 20 8 15 25 17 12 15 15 H（ ） 20 17 21 9 18 26 18 13 16 16 I（ ） 23 20 27 10 21 31 22 14 20 19 J（ ） 24 22 31 11 24 37 24 15 21 21 共有峰的保留時(shí)間結(jié)果 在相同的實(shí)驗(yàn)條件下（包括頂空固相微萃取實(shí)驗(yàn)和氣相色譜實(shí)驗(yàn)），共有峰的保留時(shí)間 可 以 有 相 對(duì) 保 留 值 得 出 。為了方便共有峰的尋找獲得，相對(duì)保留值的數(shù)值保留兩位小數(shù)顯示在下面的 10 張表格中。 表 4 樣品 Y1 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 11 21 2 12 22 3 13 23 4 14 24 5 15 25 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 10 6 16 26 7 17 27 8 18 9 19 10 20 表 5 樣品 Y2 中揮發(fā)性成分 的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 11 21 2 12 22 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 表 6 樣品 Y3 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 12 23 2 13 24 3 14 25 4 15 26 5 16 27 6 17 28 7 18 29 8 19 30 9 20 31 10 21 11 22 表 7 樣品 Y4 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 5 9 2 6 10 3 7 11 4 8 表 8 樣品 Y5 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 23 8 16 24 表 9 樣品 Y6 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 17 33 2 18 34 3 19 35 4 20 36 5 21 37 6 22 38 7 23 39 8 24 40 9 25 41 10 26 42 11 27 43 12 28 44 13 29 45 14 30 46 15 31 47 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 12 16 32 48 表 10 樣品 Y7 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 23 8 16 24 表 11 樣品 Y8 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 6 11 2 7 12 3 8 13 4 9 14 5 10 15 表 12 樣品 Y9 中揮發(fā)性成分的 保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 13 表 13 樣品 Y10 中揮發(fā)性成分的保留時(shí)間 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 峰號(hào) 保留時(shí)間（ min） 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 內(nèi)參考峰的挑選必須要滿足前面所述的 4 個(gè)要求，經(jīng)過(guò)分析比較，參考峰的保留時(shí)間（ min）在 之間，每個(gè)樣品的內(nèi)參考峰已在表格中加粗加下劃線標(biāo)出，分別是 Y1 的 16 號(hào)峰、 Y2 的 13 號(hào)峰、 Y3 的 18 號(hào)峰、 Y4 的 6 號(hào)峰、 Y5 的 13 號(hào)峰、 Y6 的 22號(hào)峰、 Y7 的 15 號(hào)峰、 Y8 的 10 號(hào)峰、 Y9 的 13 號(hào)峰、 Y10 的 12 號(hào)峰。論文中將篩選條件定為如下的條件：半峰寬為 3 秒，斜略為 V/min，漂移為 0μ V/min，參變時(shí)間為 1000min，最 小峰面積為 1000，最大切片數(shù)為 0[18]。內(nèi)參考峰必須符合以下條件 [18]： ① 內(nèi)參考峰必須與相鄰的的色譜峰分離較為良好，達(dá)到基線分離； ② 內(nèi)參考峰的峰位置應(yīng)位于所有色譜峰的中間，位于居中； ③ 內(nèi)參考峰應(yīng)是一個(gè)較強(qiáng)的色譜峰； ④ 內(nèi)參考峰應(yīng)在 10 種不同樣品的色譜圖中都存在。 在本論文中，通過(guò)觀察萃取條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)色譜圖和油菜蜂蜜揮發(fā)性成分氣相色譜圖，可以簡(jiǎn)單的分析出峰的數(shù)量一般在 30 多個(gè)，而且峰較多集中在前 30 分鐘，這樣的色譜圖峰較為密集，幾乎無(wú)縫可插，這時(shí)想在其中插入一個(gè)外參考峰幾乎是不可能的。 共有內(nèi)參考峰的確定 參考峰的選擇：參考峰的選擇時(shí)要根據(jù)復(fù)雜樣品的實(shí)際分離情況和實(shí)驗(yàn)條件的可能性來(lái)決定是采用外插參考峰還是內(nèi)參考峰 [18]。 圖 2（ a） 萃取溫度對(duì)峰數(shù)的影響 圖 2（ b） 萃取溫度對(duì)最大峰強(qiáng)度的影響 由圖 2 可知道在萃取溫度為 40℃時(shí)峰個(gè)數(shù)最多和最大峰 強(qiáng)度 最大，則表明 40℃的萃取溫度為最適合的，與文獻(xiàn) [17]結(jié)果相同。 萃取條件的優(yōu)化 本研究對(duì)萃取溫度、萃取時(shí) 間、氯化鈉的添加量這三個(gè)條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)：萃取溫度的選擇分為四個(gè)梯度，分別為 30℃、 40℃、 50℃、和 60℃；萃取時(shí)間的選擇分為四個(gè)梯度，分別為 20min、 25min、 30min 和 40min；萃取氯化鈉的添加量分為下面四種 0g、 、 、。因此，用相對(duì)保留值的數(shù)值對(duì)色譜圖進(jìn)行數(shù)字化得到的不同樣品色譜特征譜之間就可以相互比較了，以便于取尋找共有峰。文獻(xiàn)中對(duì)“相對(duì)保留值”的定義：組分圖參與組分的調(diào)整保留值之比。所以直接用保留值進(jìn)行比較，將會(huì)產(chǎn)生很多錯(cuò)誤，直接用保留值的數(shù)值進(jìn)行數(shù)字化得到的色譜特征圖也是無(wú)法使用的。但是，用這種數(shù)字化方法得到的數(shù)字化色譜特征譜，由于色譜本身存在著很大的缺陷而無(wú)法使用，這一缺陷就是色譜的保留值受到很多因素的影響。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 6 數(shù)據(jù)處理方法 采用 進(jìn)行 萃取條件優(yōu)化試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析， 采用 Excel 2022 軟件對(duì) 10 種油菜花蜂蜜樣品的 內(nèi)參考峰的獲取、相對(duì)保留值、共有峰保留時(shí)間等數(shù)據(jù)進(jìn)行處理 [18]。 從一張色譜圖中可以的獲得三個(gè)主要信息：一是保留值（即為氣相色譜圖的保留時(shí)間）；二是峰強(qiáng)度（即是色譜圖的峰面積或峰高）；三是半峰寬，由此可以判斷色譜分離時(shí)的柱效 [18]。 色譜圖的數(shù)字化 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的數(shù)據(jù)分析過(guò)程，是為了對(duì)蜂蜜樣品色譜圖進(jìn)行比較，然而單純的通過(guò)肉眼來(lái)觀察分析，是很難精確的分析出共有峰以及得到準(zhǔn)確的特征圖譜的 [18]。 較適條件下?lián)]發(fā)性成分的提取和氣相色譜圖的獲得 在萃取頭已經(jīng)提取 了揮發(fā)性成分之后，將萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口中，開(kāi)始進(jìn)樣，萃取頭在采集 30min 之后取出，取出后的萃取頭繼續(xù)進(jìn)行下一樣品揮發(fā)性成分的提取。兼顧分離效果和色譜峰形，選擇的最佳升溫梯度為：初始化溫度為 50℃ 保持 3min；第一階段以 5℃ /min 的升溫速度升至 200℃ ，并保持 5min；第二階段以 8℃ /min 的速度升溫至 240℃ ，并保持 15min，平衡時(shí)間為 3min[16]。 對(duì)色譜分析中的分離溫度進(jìn)行了優(yōu)化。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 5 色譜柱凈化：再較長(zhǎng)時(shí)間不使用氣相色譜儀之后，下一次使用需進(jìn)行 260 度凈化 15 分鐘（基線不平則繼續(xù)升溫凈化）。等進(jìn)樣口、色譜柱、檢測(cè)器 3 個(gè)地方溫度低于 100 度時(shí)，關(guān)儀器電源，關(guān)氮?dú)忾y門。 關(guān)機(jī)： ? 先關(guān)尾吹 氫氣和 空氣旋紐，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)。 ? 等進(jìn)樣口、色譜柱、檢測(cè)器 3 個(gè)地方溫度升到設(shè)定溫度，打開(kāi) 氫氣和 空氣鋼瓶閥門，控制面板上 DET，按“點(diǎn)火”鍵。點(diǎn)擊 System, 打開(kāi) GC。 氣相色譜儀的操作流程 開(kāi)機(jī)： ? 先開(kāi)氮?dú)忾y門，開(kāi)電腦，打開(kāi)工作站，打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，打開(kāi)信號(hào)采集器，順時(shí)針打開(kāi)尾吹 氫氣和 空氣旋紐。第三階段是整合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，最后得到在不同條件下以及不同品牌蜂蜜下油菜花蜜的氣相色譜圖，并由此建立油菜花蜜中的揮發(fā)性成分特征圖譜 [17]。萃取的時(shí)間為 20min， 25min， 30min， 40min?？偣矞y(cè)定 10個(gè)樣品的特征性圖譜，分 3階段經(jīng)行，第一階段是優(yōu)化 條件，以一種蜂蜜為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用頂空固相微萃取技術(shù)，改變萃取條件已達(dá)到最優(yōu)數(shù)據(jù)，其中萃取條件主要是 NaCl的量，萃取溫度，萃取時(shí)間 3個(gè)因素，其中 NaCl為 0g， ， ， 。 表 1 不同品牌蜂蜜樣品 實(shí)驗(yàn)試劑 蒸餾水（實(shí)驗(yàn)室自制）， NaCl（分析純）。 研究?jī)?nèi)容 以康思農(nóng)油菜花蜜為實(shí)驗(yàn)對(duì)象分別固定氯化鈉的量、萃取時(shí)間、萃取溫度，采取平行實(shí)驗(yàn)，得出最優(yōu)的萃取條件，再以最優(yōu)條件對(duì)其他九種樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，得到在不同條件下的 9種氣相色譜圖以及不同品牌油菜花蜂蜜下的 9種氣相色譜圖，并由此建立油菜花蜂蜜中揮發(fā)性成分的特征圖譜。最常見(jiàn)的劃分是 依據(jù) 蜜蜂所采集的蜜源植物種類而分的，主要蜜源是單一植物的稱作單花種蜂蜜，采自多種植物的為雜花蜜或百花蜜。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)能被蜜蜂利用的蜜源植物約 5000種以上，能取到商品蜜的蜜源植物有 100多種 [6]。動(dòng)態(tài)頂空萃取法是花粉分析的有效替代方法，尤其用于處理如草莓蜜這種花粉含量少的蜂蜜樣品。通過(guò)溶劑萃取，改良的 “ LikensNickerson” 蒸汽蒸餾法和溶劑萃取，動(dòng)態(tài)頂空萃取 (DHS)，固相微萃取以及氣體傳感器等萃取方法研究單花蜜中的揮發(fā)性物質(zhì)成分 ，將揮發(fā)性物質(zhì)作為分類單花蜂蜜的特征標(biāo)記，是目前研究的熱門課題之一 [7]。迄今為止，約有 600 種揮發(fā)性化合物在許多蜂蜜類型中被鑒定出。 氣相色譜技術(shù) 氣相色譜在蜂蜜品種鑒定中主要用于蜂蜜揮發(fā)性成分的分離、鑒別。 高效液相色譜 高效液相色譜 (HPLC)特征 圖譜技術(shù)與化學(xué)計(jì)量學(xué)相結(jié)合 的方法，由此可以 建立了洋槐蜜、油菜蜜和荊條蜜的 HPLC 特征 圖譜 ,確定了這三種單花蜜的花源酚酸標(biāo)識(shí)物 ,并結(jié)合化常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 2 學(xué)計(jì)量學(xué)的方法對(duì)蜂蜜的植物源及摻假進(jìn)行了分析鑒定 [5]。蜂蜜中所含的多酚和氨基酸有 強(qiáng)烈的熒光團(tuán)，用熒光光譜有助于鑒定蜂蜜的植物來(lái)源，如柑桔蜜的橙皮素 [2]，熏衣草蜂蜜所含的特征氨基酸 — 苯基丙氨酸和酪氨酸，可與桉樹蜜區(qū)分開(kāi) [3]。 熒光光譜 熒光光譜屬于發(fā)射光譜，提供了有關(guān)熒光分子信息。 蜂蜜鑒定方法的研究進(jìn)展 感官分析 蜂蜜的感官辨別主要是由有經(jīng)驗(yàn)的專家根據(jù)不同品種蜂蜜的色澤、狀態(tài)、氣味、滋味等感