【正文】 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 16 7 15 23 8 16 24 表 21 樣品 Y8 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 6 11 2 7 12 3 8 13 4 9 14 5 10 15 表 22 樣品 Y9 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 表 23 樣品 Y10 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 不同油菜花蜂蜜樣品的圖譜共有峰的分析 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 17 將表 14表 23 中的相對保留值和峰號數(shù)據(jù)對應(yīng)錄入到 Excel 表格軟件中，找出 10 中油菜花蜂蜜樣品中揮發(fā)性成分的氣相色譜分析圖譜的共有的相對保留值，查找結(jié)果在表 14表 23 中用字體加粗表示出來了，那么得到的共有峰有 10 個（ AJ 包括了內(nèi)參考峰），分別如表 24 所示。為了能確定參考峰，本研究中選出了下面（表 4表 13）的數(shù)字信息供于分析。此時，在10 組油菜蜂蜜揮發(fā)性成分色譜圖統(tǒng)一選擇一個適當(dāng)?shù)姆澹鳛閮?nèi)參考峰，將保留值轉(zhuǎn)換 為相對保留值 [18]。 圖 3（ a） 萃取氯化鈉量對峰數(shù)的影響 圖 3（ b） 萃取氯化鈉量對最大峰強(qiáng)度的影響 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 9 由圖 3 可知當(dāng)氯化鈉的添加量為 時，峰個數(shù)最多，最大峰 強(qiáng)度 最大，則說明 為最佳添加量，與文獻(xiàn) [17]結(jié)果相同。由此可以看出，要將色譜特征圖譜數(shù)字化而得到可以進(jìn)行比較的數(shù)字化色譜特征譜的關(guān)鍵是在色譜圖中如何選擇或者插入一個合適的參考峰 [18]。 本論文研究中為了解決色譜保留值易受到很多因素的影響而發(fā)生波動，無法進(jìn)行比較的缺陷，查閱文獻(xiàn)借鑒并引入了“相對保留值 （ relative retention volume） ”的概念 [18]。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 7 3 結(jié)果和討論 本論文研究中將保留值和峰強(qiáng)度進(jìn)行數(shù)字化的最簡單的方法，就是直接用氣相色譜的保留時間的數(shù)值來表示保留值，用峰高或峰面積來表示峰強(qiáng)度 [18]。所以就必須將這些色譜圖進(jìn)行數(shù)字化，由此得到每個樣品圖譜的數(shù)字化信息數(shù)據(jù)， 得到的數(shù)字化信息就能夠用計算機(jī)進(jìn)行分析比較，并將比較的結(jié)果進(jìn)行量化表述，這樣來獲得不同蜂蜜樣品的共有峰，從而獲得油菜花蜂蜜的特征圖譜 [18]。 進(jìn)樣口的溫度設(shè)定為 250℃ ，檢測器的溫度為 260℃ ，載氣為 % 高純度氮氣，載氣流速是 ，采樣時間為 5min。 氣相色譜條件 氣 相色譜儀（日本島津 GC2022C） ，配有 FID 氫火焰離子檢測器、美國 Restek 毛細(xì)管柱 (30m ， m) ， 進(jìn)樣口為雙填充 INJ+ ，以及 TCD 熱導(dǎo)檢測器 [15]。 ? 點 擊 SYSTEM，關(guān)閉 GC。工作站點擊“采集參數(shù)”，“單次分析”，“樣品記錄”，設(shè)置數(shù)據(jù)存儲路徑。 頂空固相微萃取提取油菜花蜜揮發(fā)性成分方法 準(zhǔn)確稱取 蜂蜜樣品，加入容量瓶中；加入 1ml 的蒸餾水；加入氯化鈉，加入轉(zhuǎn)子，旋緊蓋子；用 250ml 的燒杯加入適量的水，放在磁力攪拌器上加熱，作為恒溫水浴；用溫度計測量水溫，待水浴溫度恒定后，將 PDMS 萃取頭插入容量瓶至適當(dāng)位置，再將容量瓶放入恒溫水浴中，并用試管架固定好萃取器；調(diào)試磁力攪拌器的轉(zhuǎn)動速度，使得轉(zhuǎn)子穩(wěn)定轉(zhuǎn)動即可，伸出萃取頭，開始揮發(fā)性成分的采集，并記時；采集完成后，收起萃取頭，最后將提取好的萃取器插入氣相色譜儀中進(jìn)行分析。萃取溫度為 30℃， 40℃， 50℃，60℃。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 3 2 實驗部分 實驗樣品 樣品均為 淘寶、京東 銷售的產(chǎn)自 全國 的不同品牌的 油菜花蜜。根據(jù)國際食品法典委員會蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)、歐盟蜂蜜指令及其他相關(guān)規(guī)定，蜂蜜種類 依據(jù)來源、生產(chǎn)方式或外觀劃分 [1516]。 Bianchi F 等用動態(tài)頂空萃取樣品， GCMS 法測定分離出草莓蜜中的 28 個芳香化合物，其中 α 異佛爾酮， β 異佛爾酮和酮代異佛爾酮被認(rèn)為是草莓蜜的特征標(biāo)記 [8]。測定多種蜂蜜中的芳香性成分并進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)每種蜂蜜有各自的色譜圖以及特征化合物，因此，利用色譜圖確定蜂蜜的蜜源種類似乎可行。色氨酸和谷氨酸則有助于分類甘露蜜和花蜜 [4]。該方法適用于判定蜂蜜是否發(fā)酵、異味或含有不純物質(zhì)，但是感官分析辨別蜂蜜品種帶有一定的主觀性、經(jīng)驗性和不確定性。我國油菜分布廣，尤其是 南方地區(qū) 種植面積很大 [1]。 油菜蜜呈淺琥珀色，略混濁、有油菜花的香氣，稍有辛辣味，貯放日久辣味減輕，味道甜潤，極易結(jié)晶，結(jié)晶后呈乳白色， 晶體呈細(xì)粒或油脂狀。 關(guān)鍵詞： 油菜花蜂蜜 頂空固相微萃取 氣相色譜 特征圖譜 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） II Extraction and the Characteristic Map of Volatile Composition of Rape Honey Abstract In this paper, headspace solid phase micro extraction rape honey extraction of volatile ponents by gas chromatography for 10 kinds of rape honey volatile pounds were analyzed to establish the characteristic chromatogram rape honey volatile ponents. Headspace solid phase microextraction side processing rape honey, screening extraction time, extraction temperature, NaCl amount, which is divided into four choices extraction temperature gradient, respectively 30 ℃ , 40 ℃ , 50 ℃ and 60 ℃ , extraction time Select four gradient, respectively 20min 25min 30min and 40min, the amount of sodium chloride and extracted into 0g, , and , determine the optimal operating conditions by a gas chromatograph 10 brands the rape honey volatile ponents resolved to give chromatograms, and then digitize the chromatogram to identify internal reference peak, calculate retention, and follow certain standards to identify mon peak establish rape honey characteristic spectrum data analysis . Finalize headspace solid phase micro extraction optimum conditions are: extraction temperature is 40 ℃ , extraction time was 30 minutes, sodium chloride was added , get honey under conditions characterized by a total of 10 peaks. Keywords:Rape Honey。 本科畢業(yè)設(shè)計 （論文） 題 目 油菜花蜂蜜中揮發(fā)性成分的提取與特征 圖譜的建立 院 系 生物與食品工程學(xué)院 年 級 2022 專 業(yè) 食品 質(zhì)量與安全 班 級 學(xué) 號 學(xué)生姓名 指導(dǎo)教師 職 稱 副 教授 論文提交日期 2022 年 5 月 20 日 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） I 油菜花蜂蜜中揮發(fā)性成分的提取與特征圖譜的建立 摘要 本論文采用頂空固相微萃取技術(shù)萃取油菜花蜂蜜中的揮發(fā)性成分，利用氣相色譜技術(shù)對 10 種油菜花蜂蜜的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，建立起油菜花蜂蜜揮發(fā)性成分的特征圖譜。 Headspace solid phase micro extraction。白菜型油菜花期早，蜂群越冬后正處于恢復(fù)、發(fā)展階段，氣候比較寒冷產(chǎn)量不高；甘藍(lán)型和芥菜型花期較晚且氣候比較穩(wěn)定，溫度高 是油菜蜜的主產(chǎn)期。 油菜花產(chǎn)蜜量大，蜜呈淺琥珀色，比紫云英蜜略深，有混濁，具有油菜花香味，味道甜潤，容易結(jié)晶，結(jié)晶的油菜蜜白色細(xì)膩 ,屬二等蜜 [1]。 熒光光譜 熒光光譜屬于發(fā)射光譜，提供了有關(guān)熒光分子信息。 高效液相色譜 高效液相色譜 (HPLC)特征 圖譜技術(shù)與化學(xué)計量學(xué)相結(jié)合 的方法，由此可以 建立了洋槐蜜、油菜蜜和荊條蜜的 HPLC 特征 圖譜 ,確定了這三種單花蜜的花源酚酸標(biāo)識物 ,并結(jié)合化常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 2 學(xué)計量學(xué)的方法對蜂蜜的植物源及摻假進(jìn)行了分析鑒定 [5]。迄今為止，約有 600 種揮發(fā)性化合物在許多蜂蜜類型中被鑒定出。動態(tài)頂空萃取法是花粉分析的有效替代方法，尤其用于處理如草莓蜜這種花粉含量少的蜂蜜樣品。最常見的劃分是 依據(jù) 蜜蜂所采集的蜜源植物種類而分的，主要蜜源是單一植物的稱作單花種蜂蜜，采自多種植物的為雜花蜜或百花蜜。 表 1 不同品牌蜂蜜樣品 實驗試劑 蒸餾水（實驗室自制）， NaCl（分析純）。萃取的時間為 20min， 25min， 30min， 40min。 氣相色譜儀的操作流程 開機(jī)： ? 先開氮氣閥門，開電腦，打開工作站，打開儀器開關(guān)，打開信號采集器，順時針打開尾吹 氫氣和 空氣旋紐。 ? 等進(jìn)樣口、色譜柱、檢測器 3 個地方溫度升到設(shè)定溫度，打開 氫氣和 空氣鋼瓶閥門，控制面板上 DET，按“點火”鍵。等進(jìn)樣口、色譜柱、檢測器 3 個地方溫度低于 100 度時，關(guān)儀器電源，關(guān)氮氣閥門。 對色譜分析中的分離溫度進(jìn)行了優(yōu)化。 較適條件下?lián)]發(fā)性成分的提取和氣相色譜圖的獲得 在萃取頭已經(jīng)提取 了揮發(fā)性成分之后，將萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口中，開始進(jìn)樣，萃取頭在采集 30min 之后取出，取出后的萃取頭繼續(xù)進(jìn)行下一樣品揮發(fā)性成分的提取。 從一張色譜圖中可以的獲得三個主要信息：一是保留值（即為氣相色譜圖的保留時間）；二是峰強(qiáng)度（即是色譜圖的峰面積或峰高）；三是半峰寬，由此可以判斷色譜分離時的柱效 [18]。但是，用這種數(shù)字化方法得到的數(shù)字化色譜特征譜，由于色譜本身存在著很大的缺陷而無法使用，這一缺陷就是色譜的保留值受到很多因素的影響。文獻(xiàn)中對“相對保留值”的定義：組分圖參與組分的調(diào)整保留值之比。 萃取條件的優(yōu)化 本研究對萃取溫度、萃取時 間、氯化鈉的添加量這三個條件進(jìn)行了實驗：萃取溫度的選擇分為四個梯度，分別為 30℃、 40℃、 50℃、和 60℃；萃取時間的選擇分為四個梯度，分別為 20min、 25min、 30min 和 40min；萃取氯化鈉的添加量分為下面四種 0g、 、 、。 共有內(nèi)參考峰的確定 參考峰的選擇：參考峰的選擇時要根據(jù)復(fù)雜樣品的實際分離情況和實驗條件的可能性來決定是采用外插參考峰還是內(nèi)參考峰 [18]。內(nèi)參考峰必須符合以下條件 [18]： ① 內(nèi)參考峰必須與相鄰的的色譜峰分離較為良好，達(dá)到基線分離； ② 內(nèi)參考峰的峰位置應(yīng)位于所有色譜峰的中間，位于居中； ③ 內(nèi)參考峰應(yīng)是一個較強(qiáng)的色譜峰； ④ 內(nèi)參考峰應(yīng)在 10 種不同樣品的色譜圖中都存在。