【正文】 種多糖。 ? HPLC色譜柱： ZORBAX氨基柱， 250x46mm；示差檢測器：流動相為 v（乙腈 )： v(水 )=70： 30；流速 1ml/min；柱溫 30℃ ；進樣量 20μ L HPLC法 離子色譜法圖譜 離子色譜測定糖類 ? 離子色譜法 (IC)是一種十分有用的技術，它可以進行痕量無機陰離子、無機陽離子和有機酸的測定。 4. HPLC法特別是離子色譜法（ IC法） —— 用高性能陰離子交換柱。 2. GC法 —— 糖不易揮發(fā)。這里所講的總糖不包括淀粉，因為在測定條件下，淀粉的水解作用很微弱。如用轉化糖表示，應該用標準轉化糖溶液標定堿性酒石酸銅溶液，如用葡萄糖表示，則應該用標準葡萄糖溶液標定。 1. 直接滴定法－原理 樣品經(jīng)處理除去蛋白質等雜質后，加入鹽酸，在加熱條件下使蔗糖水解為還原性單糖，以直接滴定法測定水解后樣品中的還原糖總量。 總糖是麥乳精、糕點、果蔬罐頭、飲料等許多食品的重要質量指標。 總糖是食品生產(chǎn)中常規(guī)分析項目。 按直接滴定法或高錳酸鉀滴定法測定還原糖含量。 3．測定方法 取一定量樣品，按直接滴定法或高錳酸鉀滴定法中的樣品處理方法處理，吸取處理后的樣液 2份各50mL，分別放入 l00mL容量瓶中，一份加入 5mL 6mol／ L鹽酸溶液，置 68— 70℃ 水浴中加熱 15分鐘，取出迅速冷卻至室溫，加 2滴甲基紅指示劑，用 NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。在 20～ 25℃ 下放置三天或在 25℃ 保溫 24h，然后用水定容（此為酸化的 1％轉化糖液，可保存 3～ 4個月）。 2. 注意 用 ％轉化糖標準溶液標定斐林試劑。 1．原理 樣品脫脂后，用水或乙醇提取，提取液經(jīng)澄清處理以除去蛋白質等雜質，再用鹽酸進行水解，使蔗糖轉化為還原糖。對于純度較高的蔗糖溶液，其相對密度、折光率、旋光度等物理常數(shù)與蔗糖濃度都有一定關系，故也可用物理檢驗法測定。 三、蔗糖的測定 蔗糖是葡萄糖和果糖組成的雙糖，沒有還原性，不能用堿性銅鹽試劑直接測定，但在一定條件下，蔗糖可水解為具有還原性的葡萄糖和果糖（轉化糖）。 迅速稱取果糖300mg,用水定容至 100mL,貯于冰箱內(nèi)。用比色法測定 ,選擇合理的比色波長（ 波長 560nm ） ,可以減少其它糖的干擾。 ? 蒽酮試劑：取 2g蒽酮溶解到 80%H2SO4中，以 80%H2SO4定容到 1000mL，當日配制使用 3， 5二硝基水楊酸（ DNS） ? 在 堿性條件 下還原糖與 DNS試劑反應，還原糖被氧化成糖酸及其他物質， DNS被還原為棕紅色的 3氨基 5硝基水楊酸。 ? 蒽酮比色法 是一個快速而簡便的定糖方法。 適于 %的還原糖含量 GB/T — 2022《 食品中還原糖的測定 》 1. 直接滴定法（先標定再測定） 2. 高錳酸鉀法 (二 )蒽酮比色法 1．原理 單糖類遇濃硫酸時，脫水生成糠醛衍生物，后者可與蒽酮縮合成藍綠色的化合物，在 620nm處有最大吸收。適用于各類食品，如硬糖、異構糖、果汁等樣品中葡萄糖的測定。 各步反應式如下： Cu2+ + 還原糖 Cu+ 2Cu+ + I2 = 2Cu2+ + 2 I I2 + 2 Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2 NaI Na2S2O3濃度需標定 (四 )其他方法簡介 1. 碘量法 (1) 原理 樣品經(jīng)處理后，取一定量樣液于碘量瓶中，加入一定量過量的碘液和過量的氫氧化鈉溶液，樣液中的醛糖在堿性條件下被碘氧化為醛糖酸鈉， 由于反應液中碘和氫氧化鈉都是過量的，兩者作用生成次碘酸鈉殘留在反應液中，當加入鹽酸使反應液呈酸性時，析出碘，用硫代硫酸鈉標準溶液滴定析出的碘，則可計算出氧化醛糖消耗的碘量，從而計算出樣液中醛糖的含量。 (三 )薩氏 (Somogyi)法 原理 將一定量的樣液與過量的堿性銅鹽溶液共熱，樣液中的還原糖定量地將二價銅還原為氧化亞銅，生成的氧化亞銅在酸性條件下溶解為一價銅離子，并能定量地消耗游離碘，碘被還原為碘化物，而一價銅被氧化為二價銅。方法的準確度高，重現(xiàn)性好，準確度和重現(xiàn)性都優(yōu)于直接滴定法。 (二 )高錳酸鉀滴定法 1．原理 將一定量的樣液與一定量過量的堿性酒石酸銅溶液反應，還原糖將二價銅還原為氧化亞銅，經(jīng)過濾，得到氧化亞銅沉淀，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標準溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據(jù)高錳酸鉀溶液消耗量可計算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出與氧化亞銅量相當?shù)倪€原糖量，即可計算出樣品中還原糖含量。因此，測定時應嚴格控制上述實驗條件，應力求一致。 沸騰時間和滴定速度對結果影響也較大 ,一般沸騰時間短，消耗糖液多。 熱源一般采用 800 w 電爐，電爐溫度恒定后才能加熱，熱源強度應控制在使反應液在兩分鐘內(nèi)沸騰，且應保持一致。 在一定范圍內(nèi)，溶液堿度愈高，二價銅的還原愈快。 ⑧影響測定結果的主要操作因素是反應液堿度、熱源強度、煮沸時間和滴定速度。 ⑤ 滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中氧所氧化。 ③ 堿性酒石酸銅甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。 m 1 m2 m2 m 1 6．說明與討論 ① 此法測得的是總還原糖量。 記錄消耗樣品溶液的總體積。記錄樣品溶液消耗的體積。 樣品溶液預測 吸取堿性灑石酸銅甲液及乙液各 ，置于250mL錐形瓶中，加水 10 mL．加玻璃珠 3粒，加熱使其在 2分鐘內(nèi)至沸，準確沸騰 30秒鐘， 趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時要始終保持溶液呈沸騰狀態(tài)。 ρ —— 葡萄糖標準溶液的濃度 , mg／ mL； V—— 標定時消耗葡萄糖標準溶液的總體積， mL。平行操作 3次，取其平均值。從滴定管滴加約 9mL葡萄糖標準溶液，加熱使其在 2分鐘內(nèi)沸騰，準確沸騰 30秒鐘，趁熱以每 2秒 1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶