【正文】 [54] Huang YH (黃燕華 ), Wang GX (王國(guó)霞 ), Liu XH (劉襄河 ), Zhou Y (周曄 ), Huang WQ(黃文慶 ). Effects of xylooligosaccharide on growth and activity of digestive enzyme in 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 20 Litopenaeus vannamei. J S China Agric Univ (華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ), 2020, 33(3), 6164. [55] Kang J (康潔 ). 大腸桿菌脂多糖對(duì)草魚的免疫調(diào)節(jié)作用 . Jiangsu Agric Sci (江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) ), 2020, 39 (3), 295297. [56] Wang XH (王秀華 ), Huang J (黃倢 ), Song XL (宋曉玲 ). The application of immunostimulantsPeptidoglycan to the culture of shrimp. Marin Fish Res (海洋水產(chǎn)研究 ), 2020, 24 (1), 6974. [57] Song XL (宋曉玲 ), Yang XT (楊緒彤 ), Cai HW (偲瀚文 ), Wang XH (王秀華 ), Zhou J(周進(jìn) ), Chen GF (陳國(guó)福 ). Peptidoglycan isolation from Bifidobacterium thermophilum and its effect on immunoenzymetic activity of Penaeus japonicus and Paralichthys olivaceus. J Fish China(水產(chǎn)學(xué)報(bào) ), 2020, 29 (3), 350355. [58] Xiao SJ (肖世玖 ), Chen YN (陳雁南 ), Sun YN (孫亞楠 ), Wang K(王恬 ), Liu WB (劉文斌 ), Zhou YM (周巖民 ). Effects of dietary synbiotics on performance, serum antioxidation , intestinal microflora and morphology of Megalobrama amblycephala. J Chin Cereals amp。陳老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在思想、生活上給我以無(wú)微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向陳老師致以誠(chéng)摯的謝意和崇高的敬意。 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 16 致 謝 本研究及學(xué)位論文是在我的導(dǎo)師陳營(yíng)老師的親切關(guān)懷和悉心指導(dǎo)下完成的。 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 15 產(chǎn)業(yè)規(guī)?；a(chǎn)工藝的完善 目前微生態(tài)制劑產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)上規(guī)模化不夠，應(yīng)加快規(guī)?；a(chǎn)條件下生產(chǎn)工藝流程方面的研究，制定統(tǒng)一的產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)微生態(tài) 制劑產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。 工程菌領(lǐng)域方向 發(fā)揮分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)構(gòu)造更易于黏附、定植、繁殖、生產(chǎn)和具有耐熱、耐酸等特殊功能的工程菌制劑，如 抗病毒工程菌既是在腸道內(nèi)微生態(tài)制劑可做為免疫蛋白定植于腸道內(nèi)保護(hù)機(jī)體，使宿主免除某種病原的侵害，這將成為解決水產(chǎn)動(dòng)物病毒性或流行性疾病問(wèn)題的重要解決方式之一 [60]。 深入研究微生態(tài)菌種的耐藥機(jī)制 研究發(fā)現(xiàn)菌株耐藥因子不僅可以將耐藥性遺傳給后代同種菌體，還可轉(zhuǎn)移到不同種、不同屬的菌體中。另外，包被技術(shù)可增加制劑的作用周期，從而提高養(yǎng)殖經(jīng) 濟(jì)效益。因此應(yīng)先搞清養(yǎng)殖動(dòng)物機(jī)體內(nèi)缺乏的微生物，然后加入一些針對(duì)性強(qiáng)的微生態(tài)制劑，提高制劑的專一性、高效性。 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 14 4 水產(chǎn)動(dòng)物微生態(tài)制劑的發(fā)展趨勢(shì)及展望 向?qū)Ｒ恍灾苿┓较虬l(fā)展 一種菌株不可能適用于所有的水產(chǎn)動(dòng)物，只有一類的菌種也難以達(dá)到不同水產(chǎn)動(dòng)物和水體環(huán)境的要求，應(yīng)利用多菌株多功能的微生態(tài)制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物的各種需求。 ⑦行業(yè)不夠規(guī)范，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)還有待完善，相關(guān)法律法規(guī)的設(shè)定及實(shí)施細(xì)則仍需逐步建立。在水產(chǎn)動(dòng)物的不同生長(zhǎng)階段，腸道正常菌群也存在差異。 ⑥產(chǎn)品大多缺乏針對(duì)性，產(chǎn)品種類單一，難以滿足不同水產(chǎn)動(dòng)物的需求，如魚類、貝類、蝦蟹類等其 消化系統(tǒng)都有自身的特殊之處，對(duì)菌劑有不同的要求。由于各養(yǎng)殖條件和相關(guān)因素存在差異，對(duì)制劑的需求種類、數(shù)量也不盡相同，在實(shí)際應(yīng)用中不一定能夠取得應(yīng)有的效果。生產(chǎn)技術(shù)有待提高，不同制劑需要不同的生產(chǎn)條件，需研究新的制作方式，加大生產(chǎn)流程和生產(chǎn)工藝的研究力度，以提高菌體的質(zhì)量、存活率、有效時(shí)長(zhǎng)及應(yīng)用效果。目前很多微生態(tài)制劑都緣于對(duì)陸生養(yǎng)殖動(dòng)物的設(shè)計(jì)，應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物的時(shí)間較短，有的菌株對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)特性和水體環(huán)境適應(yīng)性較差 [59]。 ②對(duì)微生態(tài)制劑的作用機(jī)制研究不夠深入透徹，雖然已經(jīng)逐漸發(fā)展成為相對(duì)獨(dú)立的體系，但缺乏系統(tǒng)總結(jié)，理論基礎(chǔ)知識(shí)的建設(shè)仍有待完善。 ①目前已確認(rèn)的可用于微生態(tài)制劑的種類較少，難以滿足不同水產(chǎn)動(dòng)物和不同養(yǎng)殖環(huán)境的需求，需要開(kāi)發(fā)新品種。雖然市場(chǎng)上已有大量產(chǎn)品，但大都是單一菌種制劑，其應(yīng)用效果也比較單一，穩(wěn)定性和重復(fù)性差，還難以取代抗生素的使用，產(chǎn)品的質(zhì)量、效果等也都良莠不齊。 主要合生素及其在水 產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用 合生素（ Synbiotics）又稱合生元，是指益生菌（ Probiotics）與益生元（ Prebiotics）結(jié)合的混合制劑，具備同時(shí)發(fā)揮益生菌和益生元作用的特點(diǎn) .肖世玖等用三種合生元飼養(yǎng)團(tuán)頭魴的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，由低聚木糖和芽孢桿菌混合的合生素可以將團(tuán)頭魴的生長(zhǎng)性能提升大約 %，同時(shí)增強(qiáng)血清抗氧化能力，還可以改進(jìn)腸道形態(tài)和腸道內(nèi)菌群的平衡 [58]。此外，很多試驗(yàn)都證明殼聚糖能顯著增強(qiáng)養(yǎng)殖動(dòng)物腸道中的溶菌酶活力并且增加它們的存活率，增強(qiáng)養(yǎng)殖對(duì)象的免疫及抗病能力。王秀華等在對(duì)蝦養(yǎng) 殖池的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明肽聚糖可以增強(qiáng)蝦體的抗病能力，投喂組對(duì)蝦的發(fā)病率為 040%，而未投喂肽聚糖的對(duì)蝦發(fā)病率高達(dá) 80%100%[56]。 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 12 多糖 多糖是由許多單糖脫水縮合而來(lái)，是一種構(gòu)造繁雜并且巨大的糖類。 另外，木寡糖和甘露寡糖也可以顯著促進(jìn)魚蝦生長(zhǎng)特性，完善腸道功能，增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)成分吸收率和宿主非特異性免疫能力。菌群組成不僅與水體環(huán)境相關(guān)，而且與寡糖的多少相關(guān)，并且抗感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，殼寡糖可以提升虹鱒幼魚抗嗜水氣單胞菌侵染的活力。據(jù)報(bào)道，實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)雙歧桿菌微生態(tài)制劑中增添低聚糖后，其作用比對(duì)照組提升 10100 倍 .王艷等經(jīng)過(guò)試驗(yàn)證明，在基本餌料中果寡糖的加入濃度為 1g/kg 時(shí)能夠顯著提升銀鯽的免疫特性及抵御病菌能力，具體體現(xiàn)在白細(xì)胞吞噬活性和補(bǔ)體 C3 等的含量明顯高于對(duì)照組，而且果寡糖只有在適宜的用量范圍內(nèi)才能產(chǎn)生良好的效果 [51]。其中，功能性低聚糖難以直接被宿主吸收，但能夠特異性地增殖優(yōu)勢(shì)種群微生物，同時(shí)也可以抑制致病菌，提高機(jī)體的免疫能力。張玲華等 [50]用由芽孢桿菌 、硝化細(xì)菌和假單胞菌混合而成的 EM 菌處理池塘 ,發(fā)現(xiàn)其可明顯分解池塘水中殘余飼料 ,還對(duì)藻類的生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生積極的影響 ,從而提高水中的溶氧量，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。王平等 [48]用 EM 菌制劑對(duì) 3 種常見(jiàn)藻類進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示 EM 菌可顯著妨礙盤星藻、衣藻及四尾柵裂藻的發(fā)育和繁殖，其數(shù)目平均下降率分別為 46． 80%， 97． 17%和 99． 07%。同時(shí) EM 菌在腸道內(nèi)通過(guò)黏附及位點(diǎn)的占據(jù)，達(dá)到抑制大腸桿菌等致病菌的生長(zhǎng)繁殖的作煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 11 用 ,提高腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收率 ,降低排泄物中的氨氮含量 ,從而凈化水域、提高養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，增加養(yǎng)殖效益 [46]。 EM 菌 EM 菌是由多種益生菌復(fù)合而成的微生物群體 ,不同的益生菌相互影響相互作用，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物腸道內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的平衡。其不足之處是耐熱性較差， 6070℃ /h 即死亡。另外，酵母菌細(xì)胞壁能夠激發(fā)、增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能，維持有益菌群的生態(tài)平衡，從而預(yù)防疾病的發(fā)生 [44]。酵母菌還能與有害菌形成競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制 ,抑制有害菌的占位定植和生長(zhǎng)繁殖。 酵母菌 酵母菌（ Yeast）是一種可以在有氧或缺氧條件下分解糖類的單細(xì)胞真菌，可快速減少水生 動(dòng)物耗氧量。 反硝化細(xì)菌 (Denitrify Bacteria)是一種可以使用硝酸鹽和亞硝酸鹽作為氮源，水體含碳物質(zhì)作為碳源的兼性厭氧型細(xì)菌。 硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌 硝化細(xì)菌 (Nitrobacteria)是一類能利用氨及亞硝酸鹽作為氮源， CO2 作為碳源，從氨氧化過(guò)程中獲得能量的化能自養(yǎng)型細(xì)菌，為革蘭氏陰性，包括硝酸菌屬和硝酸菌屬。王麗娟 [41]在對(duì)魚的試驗(yàn)表明 :用乳酸菌投喂養(yǎng)殖動(dòng)物，使其黏附于 宿主腸道 ,能夠抵御革蘭氏陰性感染菌的侵染。其缺點(diǎn)是環(huán)境抗逆性差，不耐氧和高溫， 7580℃約 5min，損失超過(guò) 70%。乳酸菌包含種類非常多，包含 18 個(gè)屬以上，有 200 多種，廣泛存在于動(dòng)物腸道內(nèi)。證明芽孢桿菌S11 能通過(guò)提高蝦的細(xì)胞免疫和體液免疫的應(yīng)答能力以及腸道菌群的競(jìng)爭(zhēng)抑制，從而達(dá)到抵抗疾病、促進(jìn)生長(zhǎng)的效果。林亮等 [37]將芽孢桿菌制劑投入水池后對(duì)池底底部沉積物微生物群落展開(kāi)了分析 ,結(jié)果顯示 ,水池底部沉積物微生物群落的組成發(fā)生了變化 ,芽孢桿菌制劑能夠使底泥好氧細(xì)菌的數(shù)量增多。 羅輝等 [35]在鯉魚的餌料中分別加入枯草芽孢桿菌與混合芽孢桿菌，試驗(yàn)表明兩種微生態(tài)制劑都能對(duì)鯉魚的增重率有所提高。微生態(tài)制劑中芽孢桿菌常以芽孢的形式穩(wěn)定存在，其對(duì)外界化學(xué)消毒劑、高溫、高壓、干燥、輻射等有害因素有很強(qiáng)的耐受性，在休眠狀態(tài)下， 不消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，被食入宿主機(jī)體后，可在腸道壁快速萌發(fā)，成長(zhǎng)為具備生長(zhǎng)繁殖活力的營(yíng)養(yǎng)型細(xì)胞，且再生率接近 100%，同時(shí)其產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等具有很強(qiáng)的生物活性 ,可以降解植物餌料中部分難以被利用的物質(zhì) [33]芽孢桿菌的這些特殊性的利用對(duì)人類將是一筆寶貴的財(cái)富。趙亮等 [31]試驗(yàn) ,將光合細(xì)菌制劑投入人造半海水河蟹獨(dú)立養(yǎng)殖繁育體系中 ,氣單胞菌數(shù)目降低 %,弧煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 9 菌數(shù)目下降 %,硝化細(xì)菌數(shù)目提升了 5 倍。結(jié)果顯示，培育繁殖的輪蟲數(shù)目提高 218 到 1911倍 ,浮游植物數(shù)目提高 512 倍 ,幼苗成活率及產(chǎn)量各提升 314%到 2516%和 817%。 孫艦軍等 [29]將光合細(xì)菌加入餌料中投喂中國(guó)對(duì)蝦 22 天后發(fā)現(xiàn) ,細(xì)胞數(shù)目、 PO、抑菌能力和抗菌活力分別比對(duì)照組提高 %、 %、 %、 %和 %。 1998年光合細(xì)菌被農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)為新型微生物飼料添加劑。 光合細(xì)菌分為 3 個(gè)科：紅螺菌科（ Rhodospirillaceae）和綠菌科（ Chlorobacteriaceae）、著色菌科（ Chromatiaceae），共 18 個(gè)屬 [28]。其特殊的生長(zhǎng)性能及其生理功能使光合細(xì)菌具有作為水產(chǎn)動(dòng)物飼料、水質(zhì)改良、疾病預(yù)防等功能。光合細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，有硫顆粒，具有光合色素，是一種用光作為能量來(lái)源、在厭氧光照或好氧黑暗條件下吸收生長(zhǎng)環(huán)境中的有機(jī)物、含硫物、含氮物等作為物質(zhì)來(lái)源進(jìn)行光合生長(zhǎng)代謝的菌類。投入水體的菌種一定周期后會(huì)逐漸死亡減少 ,故需在飼養(yǎng)過(guò)程當(dāng)中按照一定周期定量投入 ,使益生菌在水環(huán)境中形成優(yōu)勢(shì)菌群 ,發(fā)揮最大效果；換水也會(huì)減少菌體數(shù)量，因此應(yīng)減少換水次數(shù)，換水后需補(bǔ)充菌量的不足 [27]。因此需特別注意不能與消毒劑、抗生素等化學(xué)物質(zhì)同時(shí)使用，否則菌種將難以存活或發(fā)揮作用。但在使用過(guò)程中，需注意水體環(huán)境能否滿足益生菌生存和繁殖的條件，投喂菌種應(yīng)根據(jù)水體的酸堿性以及其他理化性質(zhì)而確定。 Austin 等用不同濃度的溶藻膠弧菌分別用注射和浸浴的方法來(lái)處理大西洋鮭，使得殺鮭氣單胞菌對(duì)鮭的感染率大幅度下降 [26]。體型小的動(dòng)物常選用浸浴的方法，這種方 法應(yīng)注意使用濃度與劑量，適宜的劑量才能最大限度地提高動(dòng)物的免疫機(jī)制，而注射的方法則適合于體型較大的動(dòng)物。飼喂過(guò)程中，餌料要小心保存，以免變質(zhì)達(dá)不到應(yīng)有的效果。若能利用基因工程等技術(shù)得到耐受性較強(qiáng)的菌種，可降低在餌料制粒過(guò)程中益生菌的破壞問(wèn)題。但操作不便，對(duì)配比的控制不夠精確，而且所需劑量較大。而此法對(duì)微生態(tài)制劑有效成分的耐受性和穩(wěn)定性要求較高，在餌料制粒和投喂過(guò)程中需保有一定的生理活性，才能產(chǎn)生一定的積極作用。 微生態(tài)制劑的常用施用方式及其注意事項(xiàng) 作為餌料添加劑 作為飼料添加劑，動(dòng)物在吸食過(guò)程中連同添加劑一起食入體內(nèi)而產(chǎn)生作用。 適于微生態(tài)制劑菌種的特點(diǎn) 微生態(tài)制劑的菌種的選擇十分重要 ,理想的益生菌菌株應(yīng)具有以下幾個(gè)特點(diǎn) :(1)能與宿主共生且對(duì)宿主無(wú)害 ,無(wú)致病性、沒(méi)有毒副作用 ,不和病原菌雜合； (2)可以在 pH 值煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 6 較低的無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸及膽汁酸中生存 ,且可以黏附在腸粘膜上； (3)發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生乳酸、過(guò)氧化氫等其他抗菌物質(zhì)； (4)在體內(nèi)易繁殖 , 能產(chǎn)生抗生素類的物質(zhì) ,有較高的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì) ,進(jìn)而阻止致病菌的定植與增殖 [23]； (5)源于正?；盍^高的動(dòng)物自身的菌株最佳 ,使其能夠較高程度地發(fā)揮有益功能等。 養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)環(huán)境中的益生菌可以吸收水體多余的有機(jī)物、含氮物、含硫物等通過(guò)光合作用合成自身物質(zhì) ,并可進(jìn)行硝化與反硝化作用轉(zhuǎn)化水體重金屬等有害物質(zhì)以改善水質(zhì)環(huán)境 [21]。微生態(tài)制劑中的益生菌可抑制大腸桿菌、沙門氏菌的生長(zhǎng)，從而恢復(fù)優(yōu)勢(shì)菌群的數(shù)量，