全內反射熒光顯微鏡-文庫吧資料
2025-05-20 02:56本頁面
【正文】 細胞的光損傷和光漂白影響也很小。 共焦技術 ? 共焦技術：單光子或雙光子的共焦系統(tǒng)層析深度分別為～ 500－ 800nm。 ? 因此將全內反射熒光顯微術與其它的顯微成像技術相結合來研究將是未來發(fā)展的一個新的方向。 全內反射熒光顯微鏡下拍到 的位于表面的 ActinYFP和 TubulinYFP蛋白分子圖 分別在全內反射熒光顯微鏡下（左）和 一般熒光顯微鏡（右）拍到的 Dilstainedneuron,細胞。利用全內反射熒光顯微鏡結合后來發(fā)展的熒光共振能量轉移或者雙視角的光鏡可以看到離子通道與其配基或者調節(jié)子之間的相互作用，同時可以在體內跟蹤構像變化與離子電流。 ? 目前，已經(jīng)發(fā)展了一種同時可以測電流和熒光信號的實驗系統(tǒng)。 ? 離子通道通過負責神經(jīng)，肌肉興奮性細胞的質膜調節(jié)離子電流和電化學勢。 ? 分子伴侶蛋白 GroEL和伴侶輔助分子 (cochaperon)GroES或者其底物乳球蛋白的相互作用已經(jīng)在單分子水平進行了很好的研究。肌球蛋白分子上熒光基團發(fā)出的熒光光譜隨著時間的起伏現(xiàn)象，說明了自發(fā)的肌球蛋白單分子構像改變。 ? 單個的生物大分子的熒光分子特征和動態(tài)構像變化要運用到 棱鏡型 的全內反射熒光顯微術。 這些問題都可以利用全內反射熒光顯微成像系統(tǒng)來解決 全內反射熒光顯微鏡可以直接對細胞表面的過程進行觀測，而不受到來自細胞內深層區(qū)域信號的干擾。所以應該盡量降低背景激發(fā)光。 1. 全內反射熒光顯微術 在生物單分子科學中的應用 ? 單分子熒光探測主要有三個問題： ? （ 1）單分子發(fā)出的熒光信號通常是很 微弱的，所以要尋找一個足夠靈敏的探測器。另一方面它的圖像解釋相對于近場 ,干涉顯微成像來說也較簡單。 ? 全內反射熒光顯微術正是憑借其獨特的優(yōu)勢 (它的熒光激發(fā)深度只在～ 100 nm 的薄層范圍內 ),從而成為研究 細胞表面科學 如生物化學動力學、單分子動力學的最有前途的光學成像技術。 ? 當今世界上研究單分子科學最具前途的新型生物光學顯微技術之一 ? 可用來實現(xiàn)對單個熒光分子的直接探測。 θc 為發(fā)生全反射的臨界角。 ? 由于細胞的典型折射率為 1. 33～ 1. 38 ,因此要想實現(xiàn)全內反射 ,物鏡的 NA 必須大于 1. 38 。 放置樣品的空間受到棱鏡的限制。 棱鏡型全內反射熒光顯微鏡光路示意圖 評價 棱鏡型系統(tǒng)在實現(xiàn)上更加容易，它只需要激光 光源、棱鏡和顯微鏡。 全內反射顯微鏡的分型及其結構 ? 全內反射熒光顯微鏡根據(jù)其成像系統(tǒng)的不同可分為棱鏡型和物鏡型兩種類型 兩種類型的全內反射熒光顯微鏡成像系統(tǒng)， 1）為棱鏡型， 2）為物鏡型。 CCD相機的 快速成像 特點提高了其時間分辨率，使得觀察單分子的運動、細胞物質的分泌、蛋白質的相互作用成為可能并成為這方面的優(yōu)勢觀察儀器。 黃色小圓點 表示被隱失波激發(fā)的熒光分子， 白色小圓點 表示未被激發(fā)的熒光分子。 隱失波的強度 深度圖 熒光激發(fā)原理 非均勻波 透射強度和浸透深度公式 T12（ θi） 分界面處的透射強度 d 12 滲透深度 θi 入射角 λ 入射光波長 對于可見光波長380 ～ 780nm而言，浸透深度為～100nm。 基本原理 全內反射熒光顯微鏡 的基本設計思路 全內反射熒光顯微鏡 的基本原理 熒光激發(fā)原理 snell定律 : n1sin
研究報告相關推薦
鄂ICP備17016276號-1