smp-qc-0031-00生物指示劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程-文庫吧資料
2024-09-14 12:12本頁面
【正文】 液（ pH=6～ 7）中，至少 15 分鐘，或用 75%酒精液處理毛細(xì)管（但不能將消毒酒精帶入培養(yǎng)基）。 取出后分開放置于冰浴中至少 5 分鐘后取出。 油浴在設(shè)定溫度下穩(wěn)定 5 分鐘后，將毛細(xì)管架取出，留出一根未加 熱毛細(xì)管，其余毛細(xì)管插入試管架的篩網(wǎng)，毛細(xì)管間可保持適當(dāng)間距，以便于受熱均勻和取出。 用明火（酒精燈）熱封毛細(xì)管開口處，加熱菌懸液上液面處的管子尖梢，邊轉(zhuǎn)動(dòng)邊封口，用手接觸時(shí)應(yīng)不感到溫?zé)?，封口后的毛?xì)管保存于冰浴內(nèi)直至熱處理。 裝菌懸液時(shí)不得將氣泡留在毛細(xì)管底部，可把針頭伸到毛細(xì)管底部，分裝后慢慢移出來。稀釋因子則是這個(gè)數(shù)的倒數(shù)。 設(shè)計(jì)的稀釋度，每只平板應(yīng)能得到 菌落 25～ 250cfu。 選擇的初始濃度至少能下降 3 個(gè)對數(shù)單位，通常 106～ 108較合適借助參考資料來選定本次試驗(yàn)最合適的加熱間隔時(shí)間或數(shù)據(jù)點(diǎn)。 確定試驗(yàn)參數(shù) 如果某種芽胞液或同一種 CMCC（或 ATCC）編號的芽 胞液有現(xiàn)成的 D 值資料，以此資料為參考確定所需試驗(yàn)參數(shù)（初始濃度、間隔時(shí)間和稀釋度）。根據(jù)試驗(yàn)芽胞液的配制過程，從標(biāo)定的初始濃度算出 。應(yīng)至少準(zhǔn)備兩個(gè)樣品的試驗(yàn)懸浮液。 [ 是加入每支毛細(xì)管 ∮ （ ～ ） 99mm 內(nèi)的菌液體積 ]。工作芽胞懸浮液可由儲備液稀釋而得，或直接從被試驗(yàn)芽胞的平板上收集而得，制備該懸浮液是為了避免過多地使用基準(zhǔn)芽胞懸浮液從而避免縮短其儲存期（這對確保微生物耐熱的穩(wěn)定性是很重要的）。在這種情況下，建議采用澆注平皿法，待冷卻后再在表面覆蓋一層薄瓊脂。芽胞轉(zhuǎn)移到空白稀釋液中開始稀釋必須連續(xù)操作，不能中斷，直至澆好平板并開始培養(yǎng)為止。 可用 9ml 蒸餾水，生理鹽水或氯化鈉磷酸鹽緩沖液為空白稀釋液。 為減少可變因素，對整個(gè) D 值、 Z 值測定應(yīng)使用同一批培養(yǎng)基，用于澆注平皿的 胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（ TSA） 必須是 質(zhì)量檢查合格且在有效期內(nèi) 或 兩天內(nèi)新配制的。 旋渦振蕩混合器、 90mm15mm（高）的平皿若干、秒表等。 （毛細(xì)管）注射器具 ： 標(biāo)有 50μl刻度、容量 500μl。頂部有把手，以便拿取。制作該試管架的材料（不銹鋼）必須至少能耐受 150℃ 。 ： 毛細(xì)管尺寸為 ∮ （ ） 100mm玻璃毛細(xì)管，一端應(yīng)事先封口?！?，應(yīng)有足夠容量（ 3～ 5L），以使整個(gè)毛細(xì)管架浸入油浴時(shí)，溫度波動(dòng)不會超過 ℃ 。 只有 48 小時(shí)的菌落數(shù)的對數(shù)大于或等于 24 小時(shí)的值，此次試驗(yàn)方才有效。 在 24 和 48 小時(shí)后觀察結(jié)果，并記錄。在 20 分鐘內(nèi)于每皿傾注已融化并冷卻至 45～ 50℃ 的 TSA 培養(yǎng)基 20ml，混勻，待凝固后倒置培養(yǎng)。 吸取 1ml 于合適的管中，同時(shí)做兩份，用無菌純化水稀釋至合適的倍數(shù)，使每皿中形成的菌落數(shù)為 30～ 300cfu，但不得少于 6 cfu。 標(biāo) 題 生物指示劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程 編 碼 SMPQC003100 控制章： 第 3頁共 8頁 對于紙載蒸汽滅菌指示劑， 將此管置于 95～ 100℃ 水浴中，當(dāng)溫度到達(dá) 95℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，加熱 15 分鐘；對于干熱或環(huán)氧乙烷滅菌指示劑，將此管置于 80～ 85℃水浴中，當(dāng)溫度到達(dá) 80℃ 時(shí)開始計(jì)時(shí)，加熱
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