【正文】 剝離出的花藥放在 4％硫酸鐵銨水溶液中浸泡 4~24h，浸泡時花藥必須浸于底部，飄浮于液體表面的花藥則達不到媒染效果。剝離花藥時要選擇白色的。 3 剝離花藥 花蕾有許多小花組成，小花中有三枚花藥。 由于花蕾體積較大，需固定一周時間，中間要更換 2～ 3 次固定液 。 操作方法 1 取材 東北師大校園內(nèi)栽培的紫萼玉簪花開花的時間是每年夏天的 7 月上旬，取正處于減數(shù)分裂時期尚未開花的花蕾，取材的時間一般在上午 8～ 9 點，下午 2～ 3 點為宜。 2 試劑 乙醇、冰乙酸、硫酸鐵銨、蘇木精。由于染色體 數(shù)目和結(jié)構(gòu) 有嚴重的變異，不能產(chǎn)生有效配子， 因而 導致有性生殖率極低，幾乎不產(chǎn)生種子或只產(chǎn)生少數(shù)敗育的種子， 繁殖 方式主要依賴分根法 進行無性繁殖 。 試劑和器材 1 材料 紫萼玉簪花蕾 (東北師大校園內(nèi)栽培種 )。有時可以利用 對 微核 測試 方法檢測 環(huán)境污染等因素 對染色體畸變的影響 。 在減數(shù)分裂 后期 I， 同源染色體由紡錘體拉向兩極時形成染色體橋和落后的斷 片。不同的染色體結(jié)構(gòu)變異具有 各自 不同的特殊表型。染色體結(jié)構(gòu)變異主要有缺失、重復、倒位、易位四種。 2 了解染色體結(jié)構(gòu)變異在遺傳上的意義。 2 討論染色體結(jié)構(gòu)變異的類型及其特點。 關(guān)于這種差異產(chǎn)生的畸變原因 是否與某種環(huán)境因素有關(guān)， 目前尚不清楚。 我 院遺傳學 實驗室飼養(yǎng)的果蠅 (D. virilis) 唾腺染色體 中，常見某一條染色體局部區(qū)域 出現(xiàn) 不聯(lián)會 的 分叉或分枝 現(xiàn)象 ， 該區(qū)域的帶紋彼此間也存在明顯差異 。另外 ， 在染色體臂上有明顯深淺 不同 、 寬窄不 一 的帶紋 。 其中有 5 對染色體臂較長 ， 一對染色體臂很小是點狀染色體 。 6 顯微鏡觀察 先用低倍鏡觀察 ， 發(fā)現(xiàn) 分散好的染色體圖像后 再 轉(zhuǎn) 換至 高倍鏡觀察。 另外 ， 水洗過程也是細胞低滲過程。 3 解離 用濾紙條吸凈唾腺周圍的其它物質(zhì)，然后在唾腺上滴上 1mol／ L HC1 解離 2～ 3min，以 解除 細胞 間聯(lián)系 ， 便于 染色體散開。 唾 腺找到以后，用解剖針將唾腺與其它組織分開，只留唾腺在載片上。用鑷子夾住幼蟲身體后 2／ 3 部分，將幼蟲在身體前端拉開。唾腺位于幼蟲頭部兩側(cè) ， 長度約占身體總長 1／ 3～ 1／ 4 左右。 2 解剖幼蟲 取一潔凈的載片，滴上 2 滴生理鹽水。 為了讓果蠅幼蟲長得肥大更便于操作，在實驗前一天 ， 將溶解好的酵母液添 加在培養(yǎng)基里，添加前要先把培養(yǎng)瓶中的成蟲轉(zhuǎn)移掉。 12 2 試劑 乙醚、丙酸、酵母粉、綿白糖、瓊脂條、玉米粉、 1mo1／ L HC 0. 85％ NaC石炭酸品紅、蒸餾水。 試劑和器材 1 材料 果蠅 (Drosophila virilis 染色體數(shù)目 2n=12) 三齡幼蟲。這些帶紋的數(shù)目和位置是恒定的，代表著種的特征和一些基因 的位置。 因此 ，在 唾腺細胞 里，查 不出 2n 的染色體數(shù) 目 ，只能觀察到從染色中心向空間伸展的染色體臂。 唾腺染色體可以比果蠅其它細胞染色體大幾百倍。 3 了解唾腺染色體的 結(jié)構(gòu)及其變異 特點。 實驗 3 染色體畸 變觀察 實驗 果蠅唾腺染色體制片與染色體畸變觀察 目的要求 1 練習解剖 果蠅 幼蟲 和 分離 果蠅 唾腺的 方法 。 以 海島棉 （ Gossypium barbadensc） 為例，其核型 可寫成 ： 2n=4x=52=38m+12sm(2SAT)+2st(SAT) 9 核型的綜合描述 說明分析對象的染色體數(shù)目，所含染色體組的數(shù)目及來源（同源或異源），每個染色體組的基數(shù)，染色 體 大小和核型。 7 翻拍或繪圖 完成上述步驟的染色體剪貼，可以通過翻拍攝影或描圖成為染色體組型圖。 n 5 染色體配對 根據(jù)測量數(shù)據(jù)進行同源染色體剪貼配對。 相對長度 = 100?總?cè)旧w長度每一條染色體的長度 4 列表 將以上測量項目列表 ，并將測量結(jié)果填入表 3 中 。 臂比率 （p）（q）短臂長度長臂長度臂比率 ? 表 2 染色體分類標準 臂比值 著絲點位置 表示符號 正中部著絲點 M ~ 中部著絲點區(qū) m ~ 亞中部著絲點區(qū) sm ~ 亞端部著絲點區(qū) st ~∞ 端部著絲點區(qū) t ∞ 端部著絲點 T 著絲粒指數(shù) 100??該染色體的長度 短臂長度著絲粒指數(shù) 總?cè)旧w長度 細胞單倍染色體總長度，包括性染色體在內(nèi)。 2 制備顯微攝影的放大圖像 將 選定的染色體圖象進行 拍攝 和 打印輸出。 2 器材 顯微鏡、測微尺、毫 米 尺、鑷子、剪刀、繪圖紙、計算器。 同時 ， 這 也是研究物種的起源 、生 物的遺傳與進化 、 細胞遺傳學 和 現(xiàn)代分類學的重要手段 之一 。 染色體 組型分析 不僅 能 對細胞內(nèi)的染色體 進行分組，還能對 每條 染色體的特 征 進行 定量和定性的描述，是研究染色體的 基 本手段之一。 實驗原理 染色體組型通常是指生物體細胞所有可測定的染色體表型特征總稱 ， 包括染色體的總數(shù) 、 染色體組的數(shù)目 、 組內(nèi)染色體基數(shù) 、 每條染色體的形態(tài)、長度、 著絲點 位置 、 隨體或次縊痕等。 2 比較 人 與小鼠 染色體 的形態(tài)差別 。按照 染色體個體 大小 和 著絲點位置 ，人們將 46 條染色體 分為 A、 B、 C、 D、 E、 F 和 G 等 7個組， 各組別 中染色體 的特征參見 表 1。 13 實驗結(jié)果 人的染色體 2n=46，其中 22 對常染色體，一對性染色體 。 12 顯微鏡觀察 載片晾干以后，先用低倍鏡觀察，找到分散好的細胞 相后災 轉(zhuǎn) 至 高倍鏡 下 觀察。 11 染色 在 干燥后的 載片上 ， 滴 加 2 滴石炭酸品紅 。為了便于細胞分散 和 破裂 ， 滴片時 應使滴管與載玻片之間 保持 一定距離， 大約 2030 cm 為宜。 10 滴片 9 棄 掉 上清 液 之后 ，根據(jù)離心管壁回留量與 沉淀細胞量的多少， 再加 入 少量 （約 ～ mL） 固定液制成細胞懸浮液。 室溫下 固定 15min以后 ， 再離心。 8 固定 離心后棄去上清液，輕輕敲打離心管底部以便讓沉淀細胞松動開，再加入 新配制的 5mL固定液 。再放回 37℃溫箱中，保溫低滲 20min。 6 低滲處理 細胞培養(yǎng)至 72h 后 ，小心地從 培養(yǎng) 箱中取出培養(yǎng)瓶， 輕輕地 打開瓶塞， 切記不要震蕩 ,避免沉淀的細胞懸浮起來 ,不利于實驗操作。 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 每天至少搖動培養(yǎng)瓶一次，以保證培養(yǎng)液通氣。在無菌條件下，向每瓶培養(yǎng)液內(nèi)加入全血 即可 。 (9) 細胞 培養(yǎng)基的配制 在 每個培養(yǎng)瓶中 假如 M199 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 4mL，小牛血清 l mL，肝素 3 滴， PHA mL, 加入 雙抗 至 最終濃度 為 100 單位／ mL， NaHCO3 調(diào) pH 至 7. 2～ 7. 4。 (7) 秋水仙素 溶液的配制 用生理鹽水配制成 濃度為 40 微克／ mL) 秋水仙素溶液 ， 使用注射器式無菌過濾器進行除菌 操作。 (5) 肝素 溶液的配制 用生理鹽水按效價單位配成 500 單位／ mL， 高壓滅菌 后備用 。 (4) PHA(植物血球凝集素 )的配制 稱取 PHA 50mg 配制成 濃度為 lmg／ mL (生理鹽水配制 )的溶液。 (2) 5％ NaHCO3 的配制 稱 取 5g NaHCO3，溶于 100mL 蒸餾水中，高壓滅菌備用。 2 各種藥品及培養(yǎng)基的配制 (1) M199 基 礎(chǔ) 培養(yǎng)基的配制 稱取 M199 培養(yǎng)粉 溶于 1,000 mL 雙蒸水中 ，經(jīng) G6型號細菌過濾漏斗 抽濾后 備用 。 (2) 實驗用全部藥品都要經(jīng) 高壓 滅菌 或過濾除菌 處理。 3 器材 恒溫培養(yǎng)箱、電冰箱、高壓滅菌鍋、離心機、真空泵、分析天平、顯微鏡、超凈工作臺、注射器、離心管、培養(yǎng)瓶、試管架、量桶、燒杯、酒精燈、抽濾瓶、 G6 型號 細菌 過濾漏斗。 試劑和器材 1 材料 人的 肘 靜脈 外 周血。將細胞在體外培養(yǎng) 3 天 之后， 經(jīng)過 用秋水仙素處理，低滲、固定 和 離心等 操作之后 ,即可 制成人類染色體標本玻片 .通過顯微鏡可以 對 人的染色體形態(tài)和染色體數(shù)目 進行觀察和分析。 目前，經(jīng)過實驗技術(shù)的 改進， 僅 用 ～ mL 全血就能做一次實驗。 實驗原理 正常情況下人的外周血中很少有分裂相細胞，只有在異常的情況下才能出現(xiàn)。 2 掌握 制作 人染色體標本的方法。 2 如果 有條件時 ， 要 進行顯微攝影 ， 然后進行組型分析。 秋水仙素 作用時間長時，小鼠染色體多是晚中期。秋水仙素的濃度，注射量和作用時間對小鼠染色體形態(tài)影響很大。 另外 ，要熟練地使用推進器的座標尺，記錄 良好細胞 分裂相的位置 ， 以便 最 后 比較觀察和分析 。沖洗后 ， 馬上把片子再翻過來 ， 將 有 細胞 的一 面朝上 放置 。注意 ， 玻棒與載片之間不能有接觸和磨擦，玻棒始終浮在染液表面，以保證細胞和染色體的完整性。染色時每張載片滴二滴 染液 。 11 染色 7 徹底 干 燥 之后 的片子 可以 放置在 染色缸 內(nèi) 或 染色板 上染色 ， 也可以把染液直接滴在載片上 。為了讓細胞破裂、分散得更好，滴片時，滴管與載片之間保持一定距離，讓細胞 “ 摔 ” 破。滴完之后，用嘴用力吹散細胞。細胞懸浮液 的密度 也不能太稀 、 細胞太少 ，這樣會影響 觀察時速度。 8 制 備 細胞懸 浮液 第二次固定 離心后去掉上清液，加入少量固定液制成細胞懸浮 液 。在室溫條件下 ,細胞需固定15min.， 固定后還需離心 一次 。 6 固定 離心后去掉上清液。低滲需要在 37 ℃條件下進行，低滲時間為 20 min。 5 低滲 離心之后，去掉上 清 液 ， 輕輕敲打離心管底部，加入 5 mL 低滲液 ， 讓細胞與低滲 液 充分混勻，達到最佳低滲效果。 3 解剖小鼠 秋水仙素注射 2h 后， 將小鼠 脫臼 處死 ， 取出股骨脛骨，剔凈肉，再用紗布塊將剩余的肉 擰下來，用剪刀剪去骨兩端，把注射器針頭插入骨腔中，用生理鹽水將骨髓細胞沖入離心管中，要反復沖幾次盡可能收集更多的細胞。 2 秋水仙素 注射 解剖前 2 h，向小鼠腹腔內(nèi)注射秋水仙素溶液 mL。 (2)低滲溶液：稱 克 KCl溶于 1,000 mL 蒸餾水中，其濃度為 mL／ L。 3 器材 恒溫培養(yǎng)箱、普通離心機、顯微鏡、分析天平、架盤天平、離心管 (5～ 10 mL)、吸管注射器 (5 mL)、 100 mL 燒杯、載玻片。 6 試劑和器材 l 材料 健康小白鼠 (Mus musculus 2n=40)，體重約 18～ 20g， 雌雄不限。 通過對 小鼠骨髓細胞 的 低滲、固定、滴片、染色等處理，可觀察到小鼠染色體。 實驗原理 小鼠骨髓細胞具有旺盛的分裂增繁能力 。 2 學會動物細胞的滴片方法。 2 簡述 減數(shù)分裂各個時期的特點和意義。它還需要通過植物雄配子體 的過程，發(fā)育成小孢子，才能產(chǎn)生能夠授精的細胞，即成熟的花粉粒。四分體中的每一個細胞都含有單倍染色體數(shù)。 減數(shù)第二次分裂是實質(zhì)上的一次典型的有絲分裂。緊接著是細胞質(zhì)也分裂，便形成了兩個子細胞。 末期的染色體由于不斷解螺旋而變成了染色質(zhì)狀態(tài)。 進入后期時，二價體的二個同源染色體彼此分開，在紡錘體的作用下，染色體開始向兩極移動。同源染色體的兩個著絲 點彼此相對分布在赤道面兩側(cè)。另外，在玉米減數(shù)分裂的終變期，每個細胞核內(nèi)總有一個染色體與核仁緊密相連，這是第 6 號染色體，也是核仁組織者染色體。具有交叉的染色體上的交叉位點也隨之向染色體的末端移動，使帶有中部、亞中部和近端部著絲點的染色體形成了“ O”形或“ V”字形，這一現(xiàn)象叫做端化。這種結(jié)合的部位稱為交叉，它 代表著同源染色體間可能發(fā)生交換的位點。 雙線期： 進入雙線期以后，聯(lián)會的同源染色體開始分離。聯(lián)會也為非姊妹染色體之間交換提供了條件，通過交換可發(fā)生遺傳物質(zhì)的相互轉(zhuǎn)移和基因重組。 5 粗線期： 染色體進一步螺旋化、縮短變粗。這時同源染色體之間開始準確地識別、配對，這一過程稱為同源染色體的聯(lián)會。此時，雖然染色體都經(jīng)過了復制后，都含有二個染色單體，但是在顯微鏡下仍看不到這種結(jié)構(gòu)。減數(shù)第一次分裂時間相對較長、且復雜，前期 I 中就有五個期： 細線期： 染色體呈非常細長的線狀交織成網(wǎng)，好似毛線團狀。另外，多核細胞是絨氈層細胞?；ǚ勰讣毎蕡A形，個體較大；花藥壁細胞是長方形，個體較小。而且花藥壁細胞中的絨氈層細 胞也在進