cyp2c19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則20xx年-文庫吧資料
2025-03-25 00:56本頁面
【正文】 圍的確定方法。相關(guān)資料中應(yīng)詳述試驗(yàn)方案、樣本來源、樣本量、樣本入組標(biāo)準(zhǔn)及試驗(yàn)結(jié)果等。 （五）陽性判斷值確定資料 對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測準(zhǔn)確性的臨界值（ Cutoff）。 精密度指標(biāo)可設(shè)置為檢測成功率等，申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實(shí) 驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對室間重復(fù)性進(jìn)行評價(jià)。 精密度評價(jià)需滿足如下要求： 對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑（包括核酸提取 /純化組分）本身外，還包括分析儀、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測輪次、試劑批次等。 5. 精密度 精密度評價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取 /純化等樣本處理步驟。 干擾試驗(yàn)可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價(jià)干擾物質(zhì)對目標(biāo)基因檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評價(jià)。 應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。 同時(shí)，申請人亦應(yīng)評價(jià) CYP2C19 基因多態(tài)性試劑可準(zhǔn)確檢出的人基因組 DNA 濃度上限，即適當(dāng)檢出率水平下的最高人基因組 DNA 濃度。 可采用梯度濃度的人基因組 DNA 樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如： 95%）下的最低人基因組 DNA 濃度，即為最低檢測限。 3. 檢測限和可 報(bào)告范圍 CYP2C19 基因多態(tài)性檢測試劑的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)基因的最低人基因組 DNA濃度。 2. 檢測準(zhǔn)確性 建議采用若干份臨床樣本驗(yàn)證 CYP2C19 基因多態(tài)性試劑的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與產(chǎn)品適用范圍一致；樣本應(yīng)涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點(diǎn)的雜合突變、純合突變情況，并包含不同基因組 DNA 濃度。該步驟除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能 去除 PCR 抑制物。 如產(chǎn)品適用樣本類型不止一種，申請人應(yīng)針對不同樣本類型分別完成性能評估。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)國內(nèi)或國外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。 （四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)針對下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)）、 試驗(yàn)可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。 反應(yīng)體系研究指最佳反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集預(yù)處理、樣本保存、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟（如有）、 PCR 反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（ Ct 值）等的確定。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP 濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo) 記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。 精密度參考品應(yīng)至少包括所有多態(tài)性位點(diǎn)的低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸提取液。 陰性參考品：應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，納入同源序列交叉反應(yīng)樣本、干擾樣本等。應(yīng)至少包含野生型和所有多態(tài)性位點(diǎn)的雜合型樣本，同時(shí)盡量納入純合突變型樣本。申請人應(yīng)提交有關(guān)企業(yè)參考品原料選擇 、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的研究資料，包括所用到的參考方法等。申請人應(yīng)針對質(zhì)控品原料選擇、制備、定值過程等提供詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)，并對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。質(zhì)控品可采用質(zhì)粒或臨床樣本的核酸提取液等。 對于此類產(chǎn)品，一般情況下，反應(yīng)體系中野生型序列和突變型序列均有陽性反應(yīng)，可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量 控制，則試劑盒中可不另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照；否則，應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照。 試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來實(shí)現(xiàn)。UDG/UNG 應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，一般包括：分子量、純度（ HPLC 等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物探針以供篩選，針對待測位點(diǎn)的檢測靈敏度和特異性等進(jìn)行評價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。 引物、探針 本文所述 CYP2C19 基因多態(tài)性檢測一般針對等位基因 CYP2C19*CYP2C19* CYP2C19*3 和 CYP2C19*17。如為 申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。 1. 此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取 /純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、 dNTP、反應(yīng)緩沖液等。 綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理 辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021 年第 44 號(hào)），以下簡稱《 44 號(hào)公告》的要求。上述資料必須包括基于中國人群的充分的臨床數(shù)據(jù)。 若被測靶標(biāo)為新的多態(tài)性位點(diǎn)，申請人還應(yīng)提交支持資料，以證明： CYP2C19 酶對氯吡格雷具有預(yù)期的代謝活性； ，其 血小板功能具有預(yù)期的差異； 主要不良心血管事件； ，攜帶新位點(diǎn)等位基因的患者預(yù)后獲得改善。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、最低檢測限及被測靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點(diǎn)）等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。 本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。 本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針 PCR 方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。其中， PCI 術(shù)后血栓
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