【正文】 ，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養(yǎng)時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。5．計數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數(shù)。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。3，取樣用三支1mL無菌吸管分別吸取10105和106?！溆嘁来晤愅疲麄€過程如圖153所示。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。2．稀釋用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，此即為10倍稀釋。(稀釋度)各3套。3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colonyforming units，cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個細胞。（二）、基本原理平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設(shè)計1～2種可行的檢測方法。（五）實驗報告l．結(jié)果將結(jié)果記錄于下表中。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算樣品的含菌量。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個菌體為宜。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當?shù)木鷳乙?。B（個）同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A圖15—1 血細胞計數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細胞計數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計數(shù)室；；計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。另外兩種計菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時間）以及加細胞分裂抑制劑等方法來達到只計數(shù)活菌體的目的。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單。后兩種計菌器由于蓋上蓋玻片后，因此可用油浸物鏡對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù)。（二）基本原理顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。一 顯微鏡直接計數(shù)法（一）目的要求1．明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。測定細胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。2何謂光合作用，比較闡揚光合作用和不產(chǎn)氧光合作用的異同。氧化磷酸化：好氧微生物在呼吸時，通過電子傳遞體系產(chǎn)生ATP的過程。2什么加底物水平磷酸化、氧化磷酸化和光合磷酸化？答：底物水平磷酸化：厭氧微生物和兼性厭氧微生物在基質(zhì)氧化過程中，產(chǎn)生一種含高自由能的中間體，如發(fā)酵中產(chǎn)生含高能鍵的1，3二磷酸甘油酸。丙酮酸氧化過程的一系列步驟總稱為三羧酸循環(huán)（TCA循環(huán)）。這一過程不需要消耗氧，形成中間產(chǎn)物——丙酮酸。另外產(chǎn)能的多少也不同。微生物的呼吸類型有三類：發(fā)酵、好氧呼吸和無氧呼吸。基團轉(zhuǎn)位是通過單向性的磷酸化作用而實現(xiàn)的。在膜的外側(cè)，外界供給的糖有滲透酶攜帶到細胞質(zhì)膜上，在特異性酶II的村華夏，糖被HPr—磷酸磷酸化形成糖—磷酸。基團轉(zhuǎn)位有特定的轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)，是通過單向性的磷酸化作用而實現(xiàn)的，細胞質(zhì)膜對大多數(shù)磷酸化的化合物有高度的不滲透性。1營養(yǎng)物質(zhì)逆濃度梯度進入細胞的方式有哪些？是如何進入的？ 答：有主動運輸和基團轉(zhuǎn)位。1營養(yǎng)物質(zhì)順濃度梯度進入細胞的方式有哪些？是如何進入的？答：有單純擴散和促進擴散。1如何判斷某水樣是否被糞便污染？1營養(yǎng)物質(zhì)是如何進入細胞的? 答：微生物的營養(yǎng)物質(zhì)各種各樣，有水溶性和脂溶性，有小分子和大分子。1如何從被糞便污染的水樣中將大腸桿菌群中的四種菌逐一鑒別出來？答：大腸菌屬中的大腸埃希氏菌、枸 酸鹽桿菌、產(chǎn)氣桿菌、副大腸桿菌等均能在遠藤氏培養(yǎng)基上生長，但它們對乳酸的分解能力不同：前三種能分界乳糖，但分解能力有強有弱，大腸埃希氏菌分解能力最強，菌落呈紫紅色帶金屬光澤；枸 酸鹽桿菌次之，菌落呈紫紅或深紅色；產(chǎn)氣桿菌第三，菌落呈淡紅色。【配制選擇培養(yǎng)基時可加入染料、膽汁鹽、金屬鹽類、酸、堿或抗生素等其中的一種】1什么叫鑒別培養(yǎng)基？哪些培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基？答：當幾種細菌由于對培養(yǎng)基中某一成分的分界能力不同，其菌落通過指示劑先是除不太那個的顏色而被區(qū)分開，這種起鑒別和區(qū)分不同細菌作用的培養(yǎng)基叫鑒別培養(yǎng)基。【按物質(zhì)的不同，培養(yǎng)基可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和符合培養(yǎng)基】1什么叫選擇培養(yǎng)基？那些培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基？答：選擇培養(yǎng)基就是用以抑制非目的微生物的生長并使所要分離的微生物生長繁殖的培養(yǎng)基。1什么叫培養(yǎng)基？按物質(zhì)的不同，培養(yǎng)基可分為哪幾類？按實驗?zāi)康暮陀猛镜牟煌煞譃槟膸最悾?答：根據(jù)各種微生物的營養(yǎng)要求，將誰、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等物質(zhì)按一定的比例配制而成的，用以培養(yǎng)微生物的基質(zhì)，即培養(yǎng)基。若有的廢水缺磷，則可用磷酸氫二鉀補充。某些工業(yè)廢水缺氮；洗滌劑廢水磷過剩，也缺氮。當處理某一工業(yè)廢水時，怎樣著手和考慮配給營養(yǎng)？答：為了保證廢水生物處理的效果，要按碳氮磷比配給營養(yǎng)。少的話不能正常生長，多的話就會導致反馴化。微生物需要哪些營養(yǎng)物質(zhì)？供給營養(yǎng)時應(yīng)注意什么？為什么？答：微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)有水、碳素營養(yǎng)源、氮素營養(yǎng)源、無機鹽及 生長因子。【有機物占干物質(zhì)質(zhì)量的90%~~97%，包括蛋白質(zhì)、核酸、糖類和脂類。答：酶促反應(yīng)速度受酶濃度和底物寧都的影響，也受溫度，pH，激活劑和抑制劑的影響。高溫、強酸和強堿都能使酶喪失活性；重金屬離子能鈍化酶，使之失活。酶的催化作用條件溫和。酶的催化作用具有專一性。除此之外的大多數(shù)酶類，如氧化還原酶、異構(gòu)酶、轉(zhuǎn)移酶、裂解酶和合成酶等，均位于細胞內(nèi)，屬胞內(nèi)酶?！景疵缸饔玫孜锏牟煌煞譃榈矸勖?、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、核糖核酸酶】上述三種分類和命名方法可右擊低聯(lián)系和統(tǒng)一起來。按酶所在細胞的不同部位，酶可分為哪幾種？按催化反應(yīng)類型可分為哪幾類？這兩種劃分如何聯(lián)系和統(tǒng)一？答：按酶在細胞的不同部位可把酶分為胞外酶、胞內(nèi)酶和表面酶。酶的活性中心是指酶蛋白分子中與底物結(jié)合，并起催化最用的小部分氨基酸微區(qū)。什么是輔基？什么是輔酶？有哪些物質(zhì)可作輔基或輔酶？：組成酶的20種氨基酸按一定的排列順序有肽腱連接成多肽鏈，兩條多肽鏈之間或一條多肽鏈卷曲后相鄰的基團之間以氫鍵、鹽鍵、脂鍵、疏水鍵、范德華力及金屬鍵等相連接而成。全酶，有蛋白質(zhì)和不含氮的小分子有機物組成，或有蛋白質(zhì)和不含氮的小分子有機物加上金屬離子組成。第四章 微生物的生理酶是什么？它有哪些組成？各有什么生理功能？答：酶是動物、植物及微生物等生物體內(nèi)合成的，催化生物化學反應(yīng)的，并傳遞電子、源自和化學基團的生物催化劑。菌絲潛入培養(yǎng)基，整個菌落像是潛入培養(yǎng)集中，不易唄挑取。霉菌菌落疏松，與培養(yǎng)基結(jié)合不緊，用接種環(huán)很容易挑取。霉菌的菌落呈圓形絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀。啤酒酵母還含幾丁質(zhì)。1酵母菌有哪些細胞結(jié)構(gòu)？有幾種類型的酵母菌？答：酵母菌的細胞結(jié)構(gòu)有細胞壁、細胞質(zhì)膜、細胞核、細胞質(zhì)及內(nèi)含物。有的霉菌還可處理含硝基化合物廢水。酵母菌處理和有機固體廢棄物生物處理中都起積極作用。1硅藻和甲藻是什么樣的藻類？水體富氧化與那些藻類有關(guān)？答：多數(shù)的甲藻對光照強度 和水溫范圍要求嚴格，在適宜的光照和水溫條件下，甲藻在短期內(nèi)大量繁殖島城海洋“赤潮”。綠藻是藻類生理生化研究的材料及宇宙航行的供氧體，有的可制藻膠。裸藻是水體富營養(yǎng)化的指示生物，而綠藻在水體自凈中起凈化和指示生物的作用。綠藻在流動和靜止的水體、土壤表面和樹干都能生長?！静煌糠敝撤绞剑郝阍鍨榭v裂，綠藻為無性生殖和有性生殖。上述色素使葉綠體呈現(xiàn)鮮綠色，與綠藻相同。分11門的是保留上述的10門之外另加隱藻門。分類：藍藻門、裸藻門、綠藻門、輪藻們、金藻門、黃藻門、硅藻門、甲藻門、紅藻門及褐藻門。可以利用水蚤的這個特點，判斷水體的清潔程度。水體中含氧量低，水蚤的血紅素含量高；水蚤的含氧量高，水蚤的血紅素含量低。水蚤的血液含血紅素，血紅素溶于血漿，肌肉、卵巢和腸壁等細胞中也含血紅素。微型后生動物包括哪幾種？答：輪蟲、線蟲、寡毛類動物（飄體蟲、顫蚓、水絲蚓等）、浮游甲殼動物、苔蘚動物（苔蘚蟲，羽苔蟲）。胞殼有兩層，外層較厚，表面凸起，內(nèi)層薄而透明。所以胞囊是抵抗不良環(huán)境的一種休眠體。何謂原生動物的胞囊？它是如何形成的? 答：在正常的環(huán)境條件下，所有的原生動物都各自保證、吃自己的形態(tài)特征。原生動物中各綱在水體自凈和污水生物處理中如何起指示作用？答：原生動物在正常的環(huán)境條件下都各自保持自己的形態(tài)特征，但當環(huán)境條件變化，超過其適應(yīng)能力時，都可使原生動物不能正常生活而形成胞囊。其不同點是：累枝蟲的蟲體口緣有兩圈纖毛環(huán)形成的似波動膜，和鐘蟲相像，其柄等分支或不等分支。所以當一個蟲體收縮時牽動其他蟲體一起收縮，故叫聚縮蟲。獨縮蟲和聚縮蟲的蟲體很像，每個蟲體的尾柄相連，但肌絲不相連，因此一個蟲體收縮時不牽動其他蟲體，故名獨縮蟲。你如何區(qū)分鞭毛綱中的眼蟲和桿囊蟲？纖毛綱中包括哪些固著型纖毛蟲（鐘蟲類）？你如何區(qū)分固著型纖毛蟲的各種蟲體？ 答：纖毛綱中的固著型纖毛蟲有獨縮蟲屬、聚縮蟲屬、累枝蟲屬、蓋纖蟲屬等。鞭毛綱、肉足綱和纖毛綱存在水體中，在廢水生物處理中起重要作用。營養(yǎng)方式：全動性營養(yǎng)、植物性營養(yǎng)和腐生性營養(yǎng)三種方式。結(jié)構(gòu)最簡單的單細胞動物。其中魚腥藻屬在富營養(yǎng)化水體中形成水華。其中的微囊藻屬和腔球藻屬課引起富營養(yǎng)化水體發(fā)生水華。按藍細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)的特征，老的分類為二綱：色球藻綱和藻殖段綱。1藍細菌是一類什么微生物？分幾綱，其中有那幾屬與水體富營養(yǎng)化有關(guān)？答：藍細菌：有一類細菌細胞結(jié)構(gòu)簡單，只具原始核，沒有核仁和核膜，只有染色質(zhì)，只具葉綠素，沒有葉綠體。1何謂放線菌？革蘭氏染色是何種反應(yīng)？答：放線菌是在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長而得名的細菌。如果只在穿刺線的下部生長者為厭氧菌。判斷細菌呼吸類型：如果細菌在培養(yǎng)基的表面及穿刺線的上部生長者為好氧菌?？捎檬裁磁囵B(yǎng)技術(shù)判斷細菌的呼吸類型和能否運動？如何判斷？答：%~~%的瓊脂半固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細菌可呈現(xiàn)出各種生長狀態(tài)。c在半固體培養(yǎng)集中的培養(yǎng)特征：呈現(xiàn)出各種生長狀態(tài)，根據(jù)細菌的生長狀態(tài)判斷細菌的呼吸類型和鞭毛有無，能否運動?！九囵B(yǎng)特征】a在固體培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征就是菌落特征。革蘭氏陽性菌和格蘭仕陰性菌即被區(qū)分開。4用中型脫色劑如乙醇或丙酮酸脫色，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1min，水洗去掉浮色。將一大類細菌染上色，而另一類染不上色，一邊將兩大類細菌分開，作為分類鑒定重要的第一步。敘述革蘭氏染色的機制和步驟。所以細菌表面總是帶負電荷。當細菌的培養(yǎng)液的pH若比細菌的等電點高，細菌的游離氨基電力受抑制，游離羧基電離，細菌則帶負電荷；否則，游離氨基電離，游離羧基電離受抑制，細菌則帶正電。細菌細胞壁表面含表面蛋白，所以，細菌也具有兩性電解質(zhì)的性質(zhì)，它們也有各自的等電點。在pH為？？為什么？答：細菌體含有50%以上的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)由20種氨基酸按一定的排列順序有肽腱連接組成。在生長旺盛的細胞中，每個核糖體和初生態(tài)的多肽鏈