6第三章-抗體制藥(二)(參考版)
2024-10-05 14:57本頁面
【正文】 。能測出 ng/ml，甚至 pg/ml水平的微量抗原物質(zhì)。 單克隆抗體是應(yīng)用 B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)抗 A 或抗 B血清。雙鏈抗體制備方法：化學(xué)交聯(lián)法、粘性蛋白結(jié)構(gòu)域融合法和接頭長度控制法。 內(nèi)容總結(jié) 第三章 抗體制藥〔二〕。 ? 用 5 倍柱床體積 (體積／體積 )的 ， 磷酸緩沖液以 2～ 3m1／ min 流速洗滌和平衡柱床，然后將 100ml 含抗 HBsAg 單抗的腹水用生理鹽水稀釋 5 倍 {體積／體積 )，以 2m1／ min 流速進(jìn)柱，然后用 ， ，同時測定A280，等第一個雜蛋白峰洗出后，改用含 ／LNaCl 的上述磷酸緩沖液洗滌，除去非特異性吸附的雜蛋白，然后用 的甘氨酸 HCl 緩沖液洗脫，同時分部收集洗脫液，合并含單抗的洗脫液，立即用， ，經(jīng)超濾，濃縮及凍 ? 于后即得抗 HBsAg 的單克隆抗體精品。 64 第三章 抗體制藥 第六十四頁，共六十六頁。 ? 表達(dá)腹水瘤生產(chǎn)技術(shù)：向健康的 Lou／ c 大鼠腹腔注射 1ml 降植烷 (Pristane)，飼養(yǎng) 1— 9 周后，向大鼠腹腔接種 5x106 個雜交瘤細(xì)胞，飼養(yǎng) 9～ 11 天后即可明顯產(chǎn)生腹水，待腹水量到達(dá)最大限度而大鼠又瀕于死亡之前時，處死動物，用毛細(xì)管抽取腹水，一般可得 50ml 左右。 63 第三章 抗體制藥 第六十三頁，共六十六頁。 62 第三章 抗體制藥 第六十二頁，共六十六頁。 61 第三章 抗體制藥 第六十一頁，共六十六頁。 ? 固定化抗大鼠 K 輕鏈單抗的制備： ? 載體也為 Sepharose 4B，其活化方法與制備固定化 tPA 相同。 于細(xì)胞融合前處死大鼠，用碘酒棉球及酒精棉球先后對右上腹部消毒，剖開腹部，用無菌剪刀與鑷子取出脾臟，用 ， ／ L 磷酸緩沖液洗去血液，在無菌燒杯或培養(yǎng)皿中切成 1mm3 小塊，再用磷酸緩沖液洗滌 3～ 4 次，直至澄清，傾去洗滌液，參加組織塊 5～ 6 倍體積 (質(zhì)量／體積 )的 %胰蛋白酶溶液 (— )于 37 度保溫，消化 20 一 40min，每 10min 輕搖消化瓶 1 次，直至組織塊松軟為止，傾去胰蛋白酶溶液，再用上述磷酸緩沖液洗滌 3～ 5 次，然后參加少量磷酸緩沖液用 10ml 吸管吹打分散，至大局部組織塊分散為細(xì)胞，用兩層無菌紗布過濾，未分散的組織塊再加少量磷酸緩沖液吹打和分散，合并細(xì)胞濾液，離心收集細(xì)胞并用磷酸緩沖液洗滌 2— 3 次，然后用無血清的 DMEM 培養(yǎng)液稀釋制成細(xì)胞懸浮液，即為免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞親本，備用。 另取 HBsAg 用 ， ／ L 磷酸緩沖液溶解并稀釋成 20μg／ ml 的溶液，加等體積福氏完全佐劑充分乳化后，取 2ml 注入 Lou／ c 大鼠腹腔， 2 周后進(jìn)行第 2 次免疫， 3 個月后于融合前 3— 4 天進(jìn)行加強(qiáng)免疫 。 58 第三章 抗體制藥 第五十八頁，共六十六頁。 57 第三章 抗體制藥 第五十七頁，共六十六頁。是使 Eagle培養(yǎng)基中 15 種氨基酸濃度增加 l 倍， 8 種維生素濃度增加 3 倍而成，用于細(xì)胞培養(yǎng)，提高了細(xì)胞生長效果。 工藝流程 大鼠骨髓瘤細(xì)胞 免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞 融合混合物 雜種細(xì)胞 混合物 雜交瘤 克隆系 細(xì)胞 種質(zhì) 培養(yǎng)液粗制 McAb 層析液 濃縮液 McAb 精品 56 第三章 抗體制藥 第五十六頁，共六十六頁。 免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞與大鼠骨髓瘤的 IR983F 細(xì)胞融合技術(shù)制造抗HBsAg單克隆抗體的工藝。目前生產(chǎn)抗 HBsAg的單克隆抗體技術(shù)有基因工程與細(xì)胞工程。 單克隆抗體生產(chǎn)工藝實(shí)例 抗 HBsAg的單克隆抗體生產(chǎn)工藝 抗乙型肝炎外表抗原 (HBsAg)單克隆抗體是專一性識別HBsAg 的單一抗體，能與 HBsAg 產(chǎn)生免疫反響。 ? 對分子量小，滲透力強(qiáng)、效果好。 免疫毒素的臨床應(yīng)用 ? 可用于治療腫瘤、自身免疫病、并能克服組織移植排斥反響。 ? 先克隆出細(xì)胞基因，再利用基因重組技術(shù)去除毒素中非特異性結(jié)合部位基因，經(jīng)過改造的毒素基因再與載體基因的互補(bǔ) DNA 重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達(dá)，形成融合蛋白，再經(jīng)純化可得到重組的免疫毒素。 免疫毒素的制備 ? 來源：主要是細(xì)菌毒素和植物毒素。 第一代 免疫毒素是包含有 A、 B 鏈的完整的毒素和抗體的交聯(lián)物，應(yīng)用有限，第二代 免疫毒素利用抗體或抗體片段與毒素作用，在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用； 第三代 免疫毒素－重組免疫毒
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