12基因工程的基本操作程序z4班l(xiāng)(參考版)
2025-03-10 12:48本頁面
【正文】 基因工程的基本操作程序 ?目的基因的獲取 ?基因表達載體的構(gòu)建 ?將目的基因?qū)胧荏w細胞 ?目的基因的檢測與鑒定 cDNA文庫 演講完畢，謝謝觀看！ 。因為目的基因在表達載體中得到表達并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。 提示：① DNA分子雜交技術(shù)首先提取受體細胞中的 DNA，然后高溫解成單鏈，再與同位素標記的 DNA探針雜交；②抗原－抗體雜交所用到的抗體是用表達出的蛋白質(zhì)注射動物進行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。 抗體與蛋白質(zhì)進行抗原－抗體雜交，看是否有雜交帶。 ② 檢測是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA， 利用 DNA分子雜交技術(shù)， 目的基因DNA一條鏈（作探針）與受體細胞中提取的 mRNA雜交，看是否有雜交帶。 轉(zhuǎn)錄完畢后， RNA鏈釋放出來，緊接著 RNA聚合酶也從 DNA模板鏈上脫落下來。 補：原核細胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點 啟動子 終止子 RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。如果表達載體未進入大腸桿菌中，大腸桿菌會不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明 β 珠蛋白基因已進入其中。 （ 2）將 cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達載體。當它的成分異常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細胞貧血癥。 ，聯(lián)系前面有關(guān)細胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細胞中，大腸桿菌不存在這兩種細胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。 (4)植物基因工程中將目的基因?qū)胧荏w細胞的方法除了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可采取 ________________。 (2)根據(jù) TDNA這一轉(zhuǎn)移特點，猜測該 DNA片段上可能含有控制 _____________________ (酶 )合成的基因。下圖為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的示意圖，試回答下列問題： (1)一般情況下農(nóng)桿菌不能感染的植物是 ____，利用農(nóng)桿菌能在自然條件下感染植物的特點，能實現(xiàn) __________。 質(zhì)是什么？ ？ ，應(yīng)如何操作？ ，有哪幾個步驟涉及到堿基 互補配對？ 小結(jié) : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR ? 化學(xué)方法人工合成 2. 構(gòu)建基因表達載體 ? 目的基因、啟動子、終止子、標記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細胞 ? 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射技術(shù)、感受態(tài)細胞 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 ? 鑒定 ，該抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性 B．有利于對目的基因是否導(dǎo)入進行檢測 C．增加質(zhì)粒分子的分子量 D．便于與外源基因連接 2. 有關(guān)基因工程的敘述正確的是 A．限制酶只在獲得目的基因時才用 B．重組質(zhì)粒的形成是在細胞內(nèi)完成的 C．質(zhì)粒都可作為運載體 D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料 B D A．基因槍法 B．顯微注射法
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