【正文】 本品每丸含桂枝以肉桂酸（ C9H8O2）計(jì)，不得少于 。供試品溶液的制備：取本品 10g，切碎，混勻，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 50%甲醇 50ml，稱定重量，超聲處理 30min，放冷，再稱定重量，用 50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 u 穿心蓮總內(nèi)酯的測(cè)定 可根據(jù)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)在 pH=8以上水解開環(huán)的性質(zhì)，用氫氧化鈉水解，以酸回滴剩余堿間接測(cè)定總內(nèi)酯含量；u 穿心蓮單體內(nèi)酯的測(cè)定 薄層分離后用紫外分光光度法、薄層掃描、高效液相色譜法測(cè)定應(yīng)用示例桂枝茯苓丸中肉桂酸的含量測(cè)定處方組成：桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈 %磷酸溶液（ 30： 70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 285nm。定性鑒別：u多采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別u具有紫外吸收，在硅膠 CF254薄層板上呈現(xiàn)暗斑點(diǎn)，也可用硅膠 G薄層，用顯色劑顯色后進(jìn)行觀察。（ 2）含量測(cè)定u具有紫外吸收，但不能產(chǎn)生熒光，在硅膠 GF254薄板上可產(chǎn)生暗色斑點(diǎn)，所以芍藥苷常用的定量方法為高效液相色譜法和薄層掃描法。 六、單萜及二萜類成分分析 含芍藥苷中藥制劑的分析（ 1）定性鑒別u可用硅膠 GF254薄層板分離后于紫外光燈（ 254nm）下直接觀察，但斑點(diǎn)色澤較淺，也可用顯色劑顯色后進(jìn)行鑒別。? 當(dāng)干擾成分較多時(shí)，可先用薄層分離，刮取薄層洗脫被測(cè)成分后再用熒光光度法進(jìn)行測(cè)定，但本法不及薄層掃描法簡(jiǎn)便，刮取薄層洗脫時(shí)易引起誤差。 （ 2）薄層掃描法 本法為香豆素類成分常用測(cè)定方法之一，樣品經(jīng)薄層分離后，于熒光燈下定位，利用香豆素類成分具有紫外吸收或能產(chǎn)生熒光的特性，不經(jīng)顯色，直接進(jìn)行掃描測(cè)定。含量測(cè)定（ 1）分光光度法u利用香豆素類成分的顏色反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，于可見光波長(zhǎng)區(qū)域進(jìn)行測(cè)定?？芍苯佑^察提取溶液的熒光，也可觀察薄層斑點(diǎn)熒光。u香豆素的熒光性質(zhì)在薄層色譜中可用于定性鑒別和定量分析。u香豆素母核本身無熒光，而羥基香豆素在紫外光下大多數(shù)能顯藍(lán)色熒光，這是因?yàn)榱u基能增強(qiáng)分子熒光的緣故。 香豆素類成分在堿性溶液中加熱，使內(nèi)酯環(huán)開裂，若酚羥基對(duì)位無取代基，則可與重氮化試劑反應(yīng)生成紅色偶氮染料。（ 2）與酚羥基反應(yīng) 具有酚羥基取代的香豆素類在水溶液中可與 FeCl3試劑產(chǎn)生顏色。 五、香豆素類成分分析概述 概念：香豆素是一類內(nèi)酯衍生物，具有芳香氣，分子中苯環(huán)或吡喃酮環(huán)上常有取代基存在，按其基本的環(huán)狀結(jié)構(gòu)形式，分為簡(jiǎn)單香豆類、呋喃香豆素類、吡喃香豆素類、其他香豆素類。 薄層掃描法：可用硅膠 GF254薄層，檢測(cè)熒光熄滅斑點(diǎn)；也可用硅膠 G薄層，用顯色劑顯色后測(cè)定。顯色劑： （ 1）硫酸乙醇溶液；（ 2）茴香醛試液；（ 3）香草醛硫酸試液；（ 4）對(duì)二甲氨基苯甲醛 硫酸溶液。定性鑒別 利用薄層色譜可對(duì)環(huán)烯醚萜苷類成分進(jìn)行定性鑒別。 溶解性：大多易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇。 u分光光度法 可用單波長(zhǎng)法、雙波長(zhǎng)法、導(dǎo)數(shù)分光光度法測(cè)定有機(jī)酸的含量。滴定液顏色較深時(shí)，影響觀察滴定終點(diǎn)，采用電位法指示終點(diǎn)。 具有熒光的物質(zhì)如綠原酸、阿魏酸等，可不必顯色，在熒光燈下觀察熒光。 展開劑：常用極性較大的溶劑，為防有機(jī)酸展開過程中發(fā)生離解，常在展開劑中加入一定比例的甲酸或乙酸等以消除因解離而產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。按羧基數(shù)目可分為單羧基酸、二羧基酸和三羧基酸。 ? 蒽酮 硫酸法 糖類與硫酸發(fā)生脫水反應(yīng)，生成糠醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生顏色物質(zhì)，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，于 620nm波長(zhǎng)處有最大吸收，吸收度與多糖含量呈線性關(guān)系。 （ 2）總多糖的含量測(cè)定? （ DNS）比色法 在堿性溶液中， 基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)系，利用比色法可測(cè)定樣品中糖含量。? 再將其酸水解后進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，確定其組成（單糖的種類及比例），以單糖的量推算多糖的量。 （ 2） 紙色譜法u多糖可采用酸水解法將其水解成單糖，然后進(jìn)行紙色譜；也可用某些系統(tǒng)直接將多糖展開。由于糖是多羥基化合物，極性強(qiáng)容易吸附。 第六節(jié)、多糖、有機(jī)酸類成分分析一、多糖的鑒別與含量測(cè)定多糖的鑒別（ 1） 薄層色譜法? 多糖可采用酸水解法將其水解成較小片段，然后進(jìn)行薄層色譜鑒別。u總揮發(fā)油的測(cè)定，采用揮發(fā)油測(cè)定器，用蒸餾法測(cè)定，可分別測(cè)定相對(duì)密度在 。油中所含各類化合物的極性順序?yàn)椋? 烴（萜）＜醚＜酯＜醛、酮＜醇、酚＜酸 因此可試用不同極性的展開劑進(jìn)行分離 常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等，其中以硅膠常用 常用展開劑為石油醚或正己烷，可使不含氧的烴類成分展開，而含氧化合物一般留在原點(diǎn)。顯色反應(yīng)u揮發(fā)油中若含有酚類成分，加入三氯化鐵的乙醇溶液，可產(chǎn)生藍(lán)色、藍(lán)紫色或綠色反應(yīng)；u若含有羰基化合物，加入苯肼或苯肼衍生物、羥胺等試劑，可生成結(jié)晶性的衍生物；u若含有醛類化合物，加入硝酸銀氨試液，可發(fā)生銀鏡反應(yīng)；u若含有內(nèi)酯類化合物，于樣品的吡啶溶液中加入亞硝酰鐵氰化鈉及氫氧化鈉溶液，出現(xiàn)紅色并逐漸消失；若含有不飽和化合物，于樣品中加入溴，紅棕色褪去；u若含有奧類衍生物，加入濃硫酸，可產(chǎn)生藍(lán)色或紫色反應(yīng)。揮發(fā)油為易流動(dòng)的油狀液體，具香味和揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。u蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ ELSD）用于高效液相色譜法檢測(cè)三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛。（ 2）高效液相色譜法u大多數(shù)三萜皂苷類成分，如人參皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外區(qū)的末端吸收來檢測(cè)，但靈敏度相對(duì)要低。u測(cè)定方法：主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和比色法。u用比色法測(cè)定中藥制劑中總皂苷或總苷元的含量時(shí)，可選用單體皂苷或皂苷元作對(duì)照品，但要注意測(cè)定單體皂苷或皂苷元與總皂苷的換算系數(shù)。u在中藥制劑中，如處方中藥味含皂苷類成分較多時(shí)，常用正丁醇作溶劑，測(cè)定正丁醇浸出物。u提取后經(jīng)分離得到總皂苷成分，分離可用有機(jī)溶劑，如水飽和的正丁醇萃取，u也可用大孔吸附樹脂處理后溶劑洗脫?？傇碥盏暮繙y(cè)定（ 1）提取分離u總皂苷的含量測(cè)定一般需要用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛　薄層層析后，可選用三氯醋酸、氯磺酸 醋酸、 50%及10%硫酸乙醇液、三氯化銻、磷鉬酸、濃硫酸 醋酸酐、碘蒸氣等顯色劑進(jìn)行顯色，其中以不同濃度的硫酸乙醇液為最常用。薄層色譜法u由于皂苷類成分大多無明顯的紫外吸收，故經(jīng)薄層色譜分離，然后選用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色觀察，是皂苷定性鑒別中最常用的