植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建與操作技術(shù)(參考版)
2025-01-18 04:57本頁(yè)面
【正文】 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 33秒 04:13:332 February 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 33秒 04:13: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過(guò)于提升自我。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :13:3304:13Feb232Feb23 1越是無(wú)能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 , February 2, 2023 閱讀一切好書如同和過(guò)去最杰出的人談話。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 33秒 04:13:332 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來(lái)秋。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 33秒 04:13: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 04:13:3304:13:3304:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 04:13:3304:13:3304:132/2/2023 4:13:33 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 上午 4時(shí) 13分 33秒 上午 4時(shí) 13分 04:13: 沒(méi)有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 2023年 2月 上午 4時(shí) 13分 :13February 2, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 :13:3304:13:33February 2, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見(jiàn)青山。 :13:3304:13Feb232Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 說(shuō)明外植體離體培養(yǎng)中污染的防治措施。 ② 適用范圍廣，也適用于弱苗或污染苗 ③ 需時(shí)間短， 20天成活，緩苗期 1015天 ④ 植株生長(zhǎng)發(fā)育較快 名詞解釋：植物組織培養(yǎng)、愈傷組織、外植體、玻璃化、褐化 2 、說(shuō)明植物離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基制備程序。 嫁接移栽法 ? 用試管苗做 接穗 嫁接在同一植物的實(shí)生苗上。 原則 ? 逐步調(diào) 節(jié) 溫、濕、光、無(wú)菌等環(huán)境要素，循序漸進(jìn) 馴化方法（煉苗） ? 培養(yǎng)室培養(yǎng) 半遮蔭的自然光，打開瓶蓋（無(wú)菌到有菌），注入少量自來(lái)水（逐漸降低幼苗溫度） ? 一般進(jìn)行 12周 三、試管苗的移栽 常規(guī)移栽法 ? 將已誘導(dǎo)出大量根的試管苗，馴化 35天，移到無(wú)菌混合土中，當(dāng)長(zhǎng)出 23片新葉時(shí)，栽到田間或盆缽中。 ⑷無(wú)菌 ? 試管苗所在環(huán)境無(wú)菌，與外界有菌環(huán)境不同，試管苗也無(wú)菌，同時(shí)，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氣體環(huán)境較為特殊，與外界環(huán)境有很大差異。 組織培養(yǎng)出來(lái)的苗通稱試管苗或組培苗 ⑵ 高濕 ? 試管瓶?jī)?nèi)水分移動(dòng)途徑有兩條： 試管苗水分從氣孔蒸騰 培養(yǎng)基向外蒸發(fā)，凝結(jié)后又進(jìn)入培養(yǎng)基 ? 瓶?jī)?nèi)相對(duì)濕度接近 100%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于瓶外空氣濕度，故 試管苗蒸騰小 。并且溫度一般控制在 25+2℃ 甚至更高。 影響因素 ⑴ 選擇 適宜的外植體 及 最佳培養(yǎng)基 ⑵提高 轉(zhuǎn)管 率 ⑶加 抗氧化劑 （抗壞血酸、 PVP、牛血清白蛋白等） ⑷加 活性炭 %活性炭 褐變的防止措施 ?組培苗外觀形態(tài)呈 半透明狀的生長(zhǎng)異?，F(xiàn)象 ?葉、嫩梢呈水晶透明或半透明 水浸狀 ；矮小 腫脹失綠 ；葉片皺縮卷曲、 脆弱易碎 ?葉表幾 無(wú)角質(zhì)層 蠟質(zhì)，沒(méi)有功能性氣孔，不具有柵欄組織，僅有海綿組織 ?體內(nèi) 含水量高 ，干物質(zhì)低， 光合能力和酶活性降低 ，組織畸形 ， 器官功能不全 ，分化能力降低 ?生根困難 ，很難繼續(xù)培養(yǎng)和移栽成活 ⑴ 激素 ： CTK濃度、比例過(guò)高（繼代次數(shù)太多） ⑵ 瓊脂 ：瓊脂濃度低（培養(yǎng)基太 “ 稀 ” ） ⑶ 溫度 ： ⑷ 光照 時(shí)間：光照太多、太強(qiáng) ⑸ 通風(fēng) 條件：氣體交換不良 (6)離子 水平：無(wú)機(jī)離子種類及比例不當(dāng) N 主要原因 ① 提高蔗糖和瓊脂濃度（提高 滲透勢(shì) ） ② 適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長(zhǎng)素比例 ③ 適當(dāng)增加 Ca、 Mg、 Mn、 K、 P、 Fe、 Cu，降低 N（ 銨態(tài)氮 ）和 Cl（ 重選或改良培養(yǎng)基配方 ） ④ 增加 自然光照 ，控制光照時(shí)間 812h。 （ 2）外植體的滅菌 ? 多次 滅菌法：次氯酸鈉 無(wú)菌水 次氯酸鈉 ? 多藥劑 交替法：肥皂水 酒精 次氯酸鈉 無(wú)菌水 ⑶ 器皿與金屬器械的滅菌 ? 玻璃器皿可采用濕熱滅菌或 干熱 滅菌 ? 金屬器皿一般 火焰 滅菌， 也可干熱滅菌 （ 135140攝氏度滅菌 35h； 160170攝氏度滅菌 24h； 180200攝氏度滅菌 ） ⑷布質(zhì)制品的滅菌 濕熱滅菌 ⑸無(wú)菌操作室的滅菌 ? 2%新潔爾滅或 70%酒精擦拭（噴霧），紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。 ? 污染途徑：周圍環(huán)境不清潔；超凈工作臺(tái)過(guò)濾裝置失效；培養(yǎng)瓶的口徑過(guò)大 在組織培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象 污染的預(yù)防措施（ 6點(diǎn)） （１）防止材料帶菌的措施 ? 莖尖作外植體時(shí)，進(jìn)行 預(yù)培養(yǎng) （無(wú)糖）或暗培養(yǎng)，以 新抽嫩枝 作外植體。 外植體的成苗途徑有三種： （一）外植體 愈傷組織 完整植株 ① 同時(shí)長(zhǎng)芽和根 植株 ② 芽 根 植株 ③ 根 芽 植株 （二）外植體 胚狀體 植株 a) 器官上 b) 愈傷組織 c) 游離單細(xì)胞 d) 小孢子 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽 數(shù)量多、速度快、結(jié)構(gòu)完整 （ 三 ） 外植體 直接形成根與芽 植株 （ 一） 污染 病原菌 ： 細(xì)菌、真菌 ⑴ 細(xì)菌 污染：菌斑呈 黏液狀 ，接種后 12天發(fā)現(xiàn)。 固體培養(yǎng)中 ， 如瓶塞不透氣 ， 培養(yǎng)物也不能生長(zhǎng) ， 要選擇通氣性好的培養(yǎng)瓶蓋 ， 增加可利用的氧氣 ， 迅速除去釋放出來(lái)的CO2， 有利于外植體外層細(xì)胞開始分裂 。 ４、氧氣 接種時(shí)要有部分組織和空氣接觸 。 2℃ 。 ２ 、 溫度 大所數(shù)植物最適溫度在 2332℃ 之間 。 ? 主要因素： 光照、溫
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