【正文】 因此 ， 雖然 MTD試驗不能探知藥敏的結果 ， 但仍然可以提供快速和可信的結核分枝桿菌的檢測結果 。 Gen Probe方法檢測結核分枝桿菌 ? 傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法最早可以在 1個星期后檢測到結核桿菌 ， 但是有可能會需要 8個星期 。 Gen Probe方法檢測結核分枝桿菌 ? Gen Probe分子菌種鑒定包括結核分枝桿菌復合群、鳥分枝桿菌復合群、鳥分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌。 這個探針可與結核分枝桿菌復合體的特定序列互補 。 三、菌株資料計算機數(shù)據(jù)庫管理程序 Gen Probe方法檢測結核分枝桿菌 ? GENPROBE 用雜交保護分析方法 （ HPA）檢測 RNA擴增產(chǎn)物中結核分枝桿菌的特定序列 。對試驗操作、凍存物品、試劑質(zhì)量進行監(jiān)控。 凍存中質(zhì)控 選菌齡、菌量適宜的菌株，凍存時平行接種 LJ培養(yǎng)基，做活菌及污染試驗。每批凍存菌株實驗狀況、凍存障礙、實驗人、凍存菌株庫號、凍存菌株質(zhì)控管號等情況須詳細記錄，每批試劑配制日期、配制人等須詳細，凍存菌株凍存條件等保管情況記錄在冊。菌株貯存要求有嚴格的貯存條件，嚴密的貯存程序，入庫菌株須專人負責，嚴格按照各程序進行管理，每份菌株入庫、凍存、貯藏、管理各環(huán)節(jié)操作必須二人同時進行，以確保菌住質(zhì)量，數(shù)據(jù)準確無誤。通過對菌株庫的基因分型和耐藥性檢測，可以發(fā)現(xiàn)本地區(qū)菌株流行情況，調(diào)查耐藥性趨勢，為結核病控制、流行病學提供細菌學方面的依據(jù)。 ? 所有試劑均應用標準菌株對照試驗合格后使用。 ? 鑒別菌株應生長旺盛，生長時間為 3~4周為宜。 ? 分枝桿菌臨床分離株藥物敏感性試驗應與菌種初步鑒定同步進行，以對硝基苯甲酸（ PNB） 、噻吩 2羧酸肼（ TCH） 鑒別培養(yǎng)基初步鑒別結核分枝桿菌、牛分枝桿菌和非結核分枝桿菌 ? 鑒別培養(yǎng)基的制備過程略。 分枝桿菌菌種鑒定 ? 形態(tài)學 菌落形態(tài)、顏色 ? 生長條件 28 ℃ 生長試驗，結核分枝桿菌在 28 ℃ 的孵育環(huán)境中不能生長；而TNM菌群的大部分分枝桿菌可以生長。據(jù)資料報道，日本在1980年報告：在分枝桿菌感染中，非結核分枝桿菌的發(fā)病率為 12%，并有逐年上升趨勢，其中主要為鳥胞內(nèi)復合群，高達 %，其次為堪薩斯占 % ? 我國年對非結核分枝桿菌的研究資料尚不充足，也缺乏較大規(guī)模的流調(diào)，據(jù)報告非結核分枝桿菌在我國的發(fā)病率占分枝桿菌的 %左右。 ? 如果用噬菌體做藥敏試驗，若有耐藥結核分枝桿菌存在，細菌能存活，會出現(xiàn)蝕斑，蝕斑的數(shù)量與在含抗結核藥物培養(yǎng)基上存活的結核分枝桿菌有關。 噬菌體法 ? 將分枝桿菌噬菌體感染結核分枝桿菌，未進入菌體內(nèi)的噬菌體用特異的抗噬菌體物質(zhì)滅活，進入菌體內(nèi)的噬菌體得到保護而復制增殖，溶菌后釋放子代噬菌體，將此噬菌體與相應的結核分枝桿菌混合，接種在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察蝕斑的產(chǎn)生。 藥敏試驗注意事項 試驗操作： （ 1）應在生物安全操作臺內(nèi)進行操作； （ 2）要使用標準化的磨菌管、吸管、接種環(huán)進行稀釋和接種； （ 3）要使用新鮮菌落，取菌落時要刮取整個斜面，不要只取單個菌落； （ 4）菌液制備、稀釋、接種要力求準確，以保證接種量在要求范圍內(nèi)； （ 5）注意觀察溫箱溫度。 附：麥氏 1號比濁管的制備 ： 1%氯化鋇(BaCl2)加入 ml 1%硫酸 (H2SO4)， 封口，比濁前搖勻。 比例法藥敏試驗 ? 質(zhì)量控制 (104 mg/ml)在對照培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)少于 20個菌落，則應從對照管傳代培養(yǎng)，重復試驗。 ? :接種后的培養(yǎng)基置于 37 ℃ 培養(yǎng)， 4周后報告結果。 比例法藥敏試驗 ? :用 22號標準接種環(huán)分別沾取 1環(huán) (即) 102 mg/ml和 104 mg/ml的菌液，用劃線法均勻接種至對照及含藥培養(yǎng)基表面，應注意使菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)基斜面。 ? (a):22號接種環(huán) 100倍稀釋法 ：用 22號標準接種環(huán)沾取 2滿環(huán)１ mg/ml的菌液，移至 2 ml滅菌生理鹽水中，即稀釋成 mg/ml菌液；用同樣方法再進行 100倍稀釋，即成 104 mg/ml菌液（注： 22號標準接種環(huán)：金屬絲直徑 ,接種環(huán)內(nèi)徑 3mm， 滿環(huán)移液 ）。 （ 2） 取上述培養(yǎng)物 （ 須刮取斜面各個部分的培養(yǎng)物 ） 置于玻璃磨菌器底部 ， 插入磨菌棒捻動使成乳酪狀 ， 以 ％ Tween80生理鹽水磨菌稀釋 ， 與標準麥氏比濁管 （ MacFaarland ） 比濁 ， 即配成１ mg/ml的菌懸液 。 ? 絕對濃度法具體操作步驟略。 含藥培養(yǎng)基制備 ? 每 100ml基礎培養(yǎng)基加入 1ml配制、稀釋好的抗結核藥液，混勻，無菌分裝每管7ml， 85 ℃ 凝固 50min. ? 制成的培養(yǎng)基 37 ℃ 無菌試驗 24h， 檢查培養(yǎng)基污染情況后置 4 ℃ 避光保存， 1個月內(nèi)使用。 ? ，分裝至無菌試管，每管 5~10ml,封口， 20 ℃ 保存， 3個月內(nèi)使用。 抗結核藥物溶液的配制和稀釋 ? 下列公式： 實際藥量 =（培養(yǎng)基內(nèi)藥物終濃度 需制備培養(yǎng)基體積） /（該藥物純度 該藥物校價 1000） 各變量單位：實際藥量： mg 效價： % 培養(yǎng)基內(nèi)藥物終濃度： 181。 抗結核藥物溶液的配制和稀釋 ? ，并確認純度和效價，在有效期內(nèi)使用。 （ 3）比例法操作較為繁瑣，且需定量技術。在此基礎上 ,由于絕對濃度法每種藥物設定高、低 2 個藥物濃度 ,所以絕對濃度法在一定程度上反映了耐藥的程度和水平。絕對濃度法向比例法轉軌，將會使我們的藥敏試驗結果與國際接軌 ，與國際具有可比性，而不會影響到與我國既往資料的連續(xù)性和可比性。近年來 ,隨著我國部分省陸續(xù)加入 WHO 耐藥監(jiān)測項目 ,二種方法的一致性問題以及藥敏試驗是否向比例法轉軌已成為國內(nèi)爭議的熱點。 ? 比例法 是由法國的 G. Cati 和 1963 年首先提出 ,是 WHO