糖基化工程ppt課件(參考版)
2024-09-22 20:18本頁面
【正文】 另一方面，凝集素具有多價結(jié)合能力，能與 熒光素 、 生物素 、 酶 、膠體金和 鐵蛋白 等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡與 /或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。 一種凝集素具有對某一種特異性糖基專一性結(jié)合的能力，如刀豆素與 α — D— 吡喃糖基甘露糖（ α — D—Mannopyranosy）結(jié)合；麥芽素與 N— 乙酰糖胺（ N—acetyl glucosamine）結(jié)合；菜豆凝集素與 N— 乙酰乳糖胺結(jié)合（見本章 表 6— 1）。我們知道，生物膜中含有一定量的糖類，主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素具有一個以上同糖結(jié)合的位點，因此能夠參與細胞的識別和粘著 ,將不同的細胞聯(lián)系起來。采用 ICH一生物技術(shù)產(chǎn)品標準規(guī)格以確保每批產(chǎn)品都發(fā)生連續(xù)的人類糖基化反應(yīng)，這樣可以大大降低生物技術(shù)產(chǎn)品的安全性隱患和療效隱患。 此外，那些發(fā)生異常糖基化批次的產(chǎn)品可能產(chǎn)生非標準化的治療效果。 在特定的條件下，中國倉鼠卵巢 (CHO)細胞株和鼠類細胞株重組能夠產(chǎn)生一種寡聚糖抗體，這種寡聚糖抗體帶有 N羥乙酞基神經(jīng)氨酸（ NeuGc)殘基或者。故某些鼠源細胞株合成的末端 α1 ， 3Gal糖鏈，在人體內(nèi)可引起免疫反應(yīng)。然而．哺乳動物細胞株在糖基化的機制上，與人類組織仍然有顯著的差異。同樣的，對植物中表達的重組蛋白進行改造 (使之帶有滯留信號序列 )，能讓其留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，避免進入高爾基體被植物系統(tǒng)糖基化； (2)利用基因工程技術(shù)，使植物高爾基體中糖基轉(zhuǎn)移酶突變 [knockout)或增添新酶，然后讓糖蛋白最終貯存在如液泡或非原質(zhì)體中。此外，哺乳動物細胞中存在著 α 2， 6唾液酸轉(zhuǎn)移酶，而植物細胞無此酶，故其糖鏈結(jié)構(gòu)上也無唾液酸成分。 如植物復(fù)雜型糖鏈包括 α1→3Fuc ，哺乳動物中主要為αl→6Fuc ；另外植物五糖核心結(jié)構(gòu)上連 → 接了 β1→2Xyl ，而哺乳動物中無 Xyl糖基修飾方式。植物的 N糖鏈僅包括高甘露糖型和復(fù)雜型 ,而無雜合型糖鏈。 在植物中，序列子 AsnXSer／ Thr中 Asn，與哺乳動物一樣，是作為 N糖鏈接受體。 利用外源基因?qū)胫参锉磉_系統(tǒng)，以植物作為 “ 綠色工廠 ” 生產(chǎn)藥用蛋白的前景是十分誘人的。而一個甘露糖合成途徑的雙突變株，可表達非免疫原性、非過度糖基化的重組蛋白。為了改造酵母的糖基化形式，現(xiàn)階段主要采取二種措施： (1)位點專一性突變，減少潛在的糖基化位點；(2)利用酵母的突變株，如外周糖鏈生物合成缺陷型和 α l，3甘露糖基轉(zhuǎn)移菌缺陷型，產(chǎn)生類似哺乳動物的高甘露糖型糖鏈。此外，酵母表達系統(tǒng)還可在蛋白糖鏈上添加 α l， 3甘露糖基，井因此抗原表位而在人體內(nèi)引起強烈的免疫反應(yīng)。例如，酵母表達的人甲狀旁腺素盡管有全部的生物活性，但其糖鏈修飾是酵母中特有的 O甘露糖基化方式。另外，由于其較低的轉(zhuǎn)化效率，基因背景了解不充分，以及細胞外大量分泌蛋白酶的存在，使得異源蛋白的表達較為困難。 大多數(shù)此類表達系統(tǒng)主要用于生產(chǎn)絲狀真菌本身的內(nèi)源性蛋白，如某些工業(yè)用途或可食用的酶類。另外，已出現(xiàn)將幾種關(guān)鍵性的糖基轉(zhuǎn)移酶克隆進大腸桿菌中共表達，重新構(gòu)建重組糖蛋白表面糖鏈結(jié)構(gòu)的報道。 糖基化在不同異源蛋白表達系統(tǒng)中的差異 此表達系統(tǒng)中最為常用的是大腸桿菌和枯草桿菌由于易操作，獲得量高，且基因背景、表達特性均很了解等因素，使得細菌表達系統(tǒng)成為最受歡迎的異源蛋白表達系統(tǒng)之一。還有研究證實糖基化可以降低病毒的免疫原性。因為在 1998年以前，成百萬的人己經(jīng)接受了 rhEPO的治療，這種發(fā)病的增多被假定是制造過程或配方的改變所導(dǎo)致。很少量病例對 rhEPO產(chǎn)生的抗體也能識
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