糖基化工程ppt課件-資料下載頁
2024-09-20 20:18本頁面
【正文】 和結構上是不同的。植物的 N糖鏈僅包括高甘露糖型和復雜型 ,而無雜合型糖鏈。并且大多數(shù)植物的復雜型糖鏈僅含有 Man、 Fuc和 Xyl，其連接方式也不同于哺乳動物，而與無脊椎動物十分相似。 如植物復雜型糖鏈包括 α1→3Fuc ，哺乳動物中主要為αl→6Fuc ；另外植物五糖核心結構上連 → 接了 β1→2Xyl ，而哺乳動物中無 Xyl糖基修飾方式。植物所表達的糖蛋白在哺乳動物中有很高的免疫原性，可能與此二糖苷鍵結構有關。此外，哺乳動物細胞中存在著 α 2， 6唾液酸轉移酶，而植物細胞無此酶，故其糖鏈結構上也無唾液酸成分。 為了能夠達到實際應用目的，避免產(chǎn)生高免疫原性的復雜型糖鏈結構，目前主要采取以下二種措施： (1)真核細胞中，蛋白質(zhì) C端若帶有滯留信號 H／ KDEL，將截留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)。同樣的，對植物中表達的重組蛋白進行改造 (使之帶有滯留信號序列 )，能讓其留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，避免進入高爾基體被植物系統(tǒng)糖基化； (2)利用基因工程技術，使植物高爾基體中糖基轉移酶突變 [knockout)或增添新酶，然后讓糖蛋白最終貯存在如液泡或非原質(zhì)體中。 哺乳動物細胞株表達的重組產(chǎn)物，可帶有復雜的糖鏈結構，和人源糖蛋白的糖鏈結構較為相似，故成為目前主要的異源糖蛋白表達系統(tǒng)。然而．哺乳動物細胞株在糖基化的機制上，與人類組織仍然有顯著的差異。如，大多數(shù)哺乳動物細胞表達α1 ， 3半乳糖基轉移酶；而人類、類人猿中該酶基因已失活。故某些鼠源細胞株合成的末端 α1 ， 3Gal糖鏈，在人體內(nèi)可引起免疫反應。又如，成人的糖蛋白上不含乙酰唾液酸 (NeuGc)，而在人 .鼠雜交瘤細胞中含量則很高。 在特定的條件下，中國倉鼠卵巢 (CHO)細胞株和鼠類細胞株重組能夠產(chǎn)生一種寡聚糖抗體，這種寡聚糖抗體帶有 N羥乙酞基神經(jīng)氨酸（ NeuGc)殘基或者。 13一半乳糖二糖單元，又稱 Gallili抗原（？）這些非人源性多糖能夠在患者體內(nèi)產(chǎn)生免疫原性反應。 此外，那些發(fā)生異常糖基化批次的產(chǎn)品可能產(chǎn)生非標準化的治療效果。全球第二大生物科技公司 Genentech公司的科研人員發(fā)現(xiàn) :抗腫瘤藥物赫賽汀 (Herceptin}的海藻糖基化糖型比其非海藻糖基化糖型的 FcyRl調(diào)節(jié)的抗體依賴型細胞的細胞毒性減小 40%到 50%。采用 ICH一生物技術產(chǎn)品標準規(guī)格以確保每批產(chǎn)品都發(fā)生連續(xù)的人類糖基化反應，這樣可以大大降低生物技術產(chǎn)品的安全性隱患和療效隱患。 凝集素 凝集素是動物細胞和植物細胞都能夠合成和分泌的、能與糖結 合的蛋白質(zhì) ,在細胞識別和粘著反應中起重要作用 ,主要是促進細胞間的粘著。凝集素具有一個以上同糖結合的位點，因此能夠參與細胞的識別和粘著 ,將不同的細胞聯(lián)系起來。凝集素具有多方面的特性，在此我們僅簡要提及其與免疫細胞化學技術方法應用有關的某些特性。我們知道，生物膜中含有一定量的糖類，主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特點在于它們能識別糖蛋白和糖肽中，特別是細胞膜中復雜的碳水化合物結構，即細胞膜表面的碳脂化合物決定簇。 一種凝集素具有對某一種特異性糖基專一性結合的能力，如刀豆素與 α — D— 吡喃糖基甘露糖（ α — D—Mannopyranosy）結合；麥芽素與 N— 乙酰糖胺（ N—acetyl glucosamine）結合；菜豆凝集素與 N— 乙酰乳糖胺結合（見本章 表 6— 1）。 因此，凝集素可以作為一種探針來研究細胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價結合能力，能與 熒光素 、 生物素 、 酶 、膠體金和 鐵蛋白 等示蹤物結合，從而在光鏡與 /或電鏡水平顯示其結合部位。
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