基因工程重組蛋白的分離純化放映(參考版)
2024-09-03 09:26本頁面
【正文】 分離效率和產(chǎn)率均有提高 操作量不大 ， 過程慢 對于難分離體系 ， 逆流層析過程是一種有效分離手段 。 制備容易 ， 成本低廉 ， 強穩(wěn)定性 模板易流失 隨著分離蛋白質(zhì)印跡聚合物的成功合成 ，蛋白質(zhì)印跡技術(shù)已成為研究熱點 高效毛細管電泳 是 20 世紀 80 年代問世的一種高效液相分離技術(shù) ， 是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物 。 優(yōu)點：與離子交換層析應用互補，可以作用于分離離子交換很難或不能分離的物質(zhì)。 毛細管電泳中蛋白質(zhì)易被石英毛細管表面所吸附，且一次只能測一個試樣。 鹽溶法及鹽析法 鹽溶和鹽析主要是通過影響蛋白質(zhì)分子表面的電荷而分離、純化蛋白質(zhì) 硫酸鈉具有化學性質(zhì)穩(wěn)定、溶解度大等優(yōu)點，現(xiàn)在所指的鹽析法實際上多為硫酸銨鹽析法 該法受蛋白質(zhì)濃度、離子強度、鹽的性質(zhì)、 pH 及溫度等因素影響 上述兩種方法分離純化蛋白質(zhì)后，都要采用凝膠過濾或透析除鹽 離子交換層析 在某一 pH 條件下，載體帶有正電荷或負電荷，當待分離蛋白質(zhì)分子通過載體時，離子交換使蛋白質(zhì)分子分離純化 機械強度大、柱效高、孔徑和顆粒大小易于控制，但應用范圍窄 不能進行快速淋洗，且分離時間長，易造成生物分子的變性、失活 離子交換層析是發(fā)展最早的層析技術(shù)之一，目前已成為蛋白質(zhì)分離純化最常用的手段 電泳技術(shù) 電泳技術(shù)作為分離純化蛋白質(zhì)的手段之一，可分為變性電泳、常規(guī)電泳、等電聚焦電泳和毛細管電泳。 它把兩種聚合物與一種鹽的水溶液混合在一起，由于聚合物與聚合物之間或聚合物與鹽之間的不溶性形成兩相 具有操作條件溫和、處理量大、易連續(xù)操作等優(yōu)點，同時克服了常規(guī)萃取有機溶劑對生物物質(zhì)的變性作用，在粗提過程中保持了生物物質(zhì)的活性及構(gòu)象等優(yōu)勢 采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白，受聚合物分子量及濃度、溶液 pH、離子強度、鹽類型及濃度的影響 雙水相萃取技術(shù)是一種新型的分離技術(shù) 反膠團萃取 指膠團內(nèi)可溶解少量水而形成微型水池，利用膠團對外界有機溶劑的屏蔽作用，實現(xiàn)生物物質(zhì)的溶解和分離 具有選擇性高、萃取過程簡單，正萃、反萃同時進行，能有效防止大分子失活、變性 普通離子型表面活性劑可能對產(chǎn)品產(chǎn)生污染 。 缺點是對具有生物活性大分子易引起變性失活，操作要求在低溫下進行。 而乙醇、丁醇和丙酮等有機溶劑具有一定的親水性和較強的親脂性，主要用于一些脂質(zhì)結(jié)合較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶 乙醇提取法溶解性能較好、溶出的水溶性雜質(zhì)少、可回收反復利用。 利用蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最低且各種蛋白質(zhì)等電點不同的特點進行分離的方法 該法具有操作簡單，提取率高產(chǎn)率高等優(yōu)點，提取率有時可達 80%以上 不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后，等電點可能會發(fā)生偏移，故溶液中含有金屬離子時，必須注意調(diào)整 pH值。 缺點：該法上樣量有限 優(yōu)點：條件溫和、簡便、分離范圍廣、回收率高 ,對生化物質(zhì)的分離十分適宜 特點：常用在純化的最后一步，與其他分離方法 ( 如離子交換 ) 組合使用 超濾 原理：利用加壓膜分離技術(shù)，在一定的壓力下，使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過一定孔徑的特制薄膜，大分子溶質(zhì)滯留，從而使大分子物質(zhì)得到部分的純化 超濾膜缺乏選擇性以及在超濾過程中易產(chǎn)生濃差極化與膜污染 超濾技術(shù)作為一種典型的膜分離技術(shù)，則具有高效率、低能耗、無相變、無需添加任何化學試劑、操作簡便、條件溫和等諸多優(yōu)點 特點：在超濾過程中，所用超濾膜的孔徑約為 1 ～ 100 nm，截留相對分子質(zhì)量 ( 為 3105～ 1106，能用于蛋白質(zhì)、細菌、膠體、病毒、熱原、多糖等的分離 透析是利用小分子經(jīng)過半透膜擴散到水 ( 或緩沖液 ) 的原理，將無機鹽等小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)，常和鹽析、鹽溶等方法聯(lián)合使用 必須利用不同型號透析袋，通用性不好 透析結(jié)果表明，大的蛋白質(zhì)分子和小的氨基酸分子得到初步分離。 目前 ， 它已成為分析科學中最具活力的方法之一 其分離效率高 、 分析速度快 、 樣品用量少 、 抗污染能力強和易自動化等特點 儀器設備精密 ， 成本高 被廣泛應用于分子生物學 、 醫(yī)學 、 藥學以及高分子等多個領(lǐng)域 柱層析 通常采用固定床間歇操作方式 柱層析具有很高的分離效率 ， 且操作簡單 但存在著載體利用
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