a重組蛋白分離純化方法選擇的基因原則-biotechn(參考版)
2025-01-24 01:05本頁面
【正文】 重組蛋白的質量控制指標包括： 重組蛋白的鑒別（序列） 重組蛋白的純度（雜質的類型） 重組蛋白的活性（檢測方法） 重組蛋白的安全性 重組蛋白的穩(wěn)定性 重組蛋白的一致性（構象與構型） 原核細菌表達的重組蛋白產物的質量檢測項目與方法 檢測項目 檢測方法 產品是否含內毒素 家兔熱原法 蛋白質是否變異 肽譜、 HPLC、 等電聚焦、毛細管電泳 甲硫氨酸是否被甲?；? 肽譜、質譜、 HPLC、 Edman分析 蛋白質是否變性、聚合、脫氨基 SDSPAGE、 凝膠層析、等電聚焦、質 配體是否脫落 SDSPAGE、 免疫分析 氨基酸是否發(fā)生取代 氨基酸分析、肽譜、質譜、毛細管電泳 產品是否被細菌、病毒、支原體等污染 微生物學檢測 譜、 HPLC、 毛細管電泳、 Edman分析 D 親和層析 10 外源基因表達產物的分離純化 C 凝膠層析 B 離子交換層析 A 重組蛋白分離純化方法選擇的基本原則 F 原核生物表達的重組蛋白質量檢測 E 膜分離 演講完畢，謝謝觀看！ 。其中，化學物理性能主要涉及到耐熱 性能、毒性、機械強度等。 對分子質量的差別進行分離的方法。實際上特殊 E 膜分離 10 外源基因表達產物的分離純化 膜分離的基本原理 分離膜的主要性能 影響膜分離的因素 膜分離的基本原理 膜分離是利用膜的選擇性，以膜的兩側存在一定量的能量差作為 化，它是一種物質被透過或被截留的過程，近似于篩分過程，依據濾 膜分離的基本定義 推動力，由于溶液中各組分透過膜的遷移速率不同而實現的分離。 凝膠層析的基本操作 平衡溶液的流速應低于層析時需要的流速 注意凝膠的斷層和氣泡 層析柱平衡 操作壓控制 平衡和洗脫時應維持流速恒定 恒定的操作壓是恒流的先決條件 凝膠層析的基本操作 上柱樣品溶液的體積根據分離要求來確定： 進樣體積 進行組別分離時，樣品溶液最大可為柱體積的 10% 進行分級分離時，樣品溶液的體積要小，使樣品層盡可能 窄，這樣洗脫出的峰形好 D 親和層析 10 外源基因表達產物的分離純化 親和層析的基本概念 親和層析載體的性質與選擇 親和層析配基的性質與選擇 親和層析的基本操作 親和層析的基本概念 親和層析 是利用待分離物質與其特異性配體之間特異性的親和力 進行分離的一類 特殊的層析技術，它有如下特點： 純化過程簡單、迅速，且分離效率高 特別適用于分離純化一些含量低、穩(wěn)定性差的生物大分子 親和層析的基本特點 純化倍數大，產物純度高 必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件 因此應用范圍受到一定的限制 親和層析的基本概念 抗原與抗體 DNA與互補 DNA或 RNA（ cDNA、 mRNA) 酶與其底物、競爭性抑制劑、 輔酶因子 激素或藥物與其受體 具有特異性親和作用的生物分子 維生素于其特異性結合蛋白 糖蛋白與其相應的植物凝集素 親和層析的基本概念 親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連 作為固定相吸附劑 當含有混合組份的樣品（流動相）通過此固定相時，只有 和固定相分子有特異親和力的物質，才能被固定相吸附結 親和層析的基本原理 合，其它沒有親和力的無關組份就隨流動相流出 然后改變流動組成份，將結合的親和物洗脫下來 親和層析載體的性質與選擇 具有多孔的立體網狀結構，能使被親和吸附的大分子自由通過 具有良好機械性能的均勻珠狀顆粒，具有良好的流速 親和層析載體的選擇 具有惰性，盡量減少非專一性吸附 具有相當量的易活化的基團，在溫和的條件下能與配基共價合 偶聯(lián) 在偶聯(lián)、吸附和洗脫時，有較好的物理化學穩(wěn)定性 親和層析載體的性質與選擇 纖維素 葡聚糖凝膠 常用的親和層析載體 瓊脂糖凝膠 聚丙烯酰胺凝膠 其它新型載體 親和層析配基的性質與選擇 純化對象和配基之間必須有較強的親和力 但親和力太高也是有害的，因為在解離配基復合物時所需的 親和層析配基的選擇 條件就要強烈， 這
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