【正文】 ? 分離方法： ①、 稀釋倒平皿法： 2022/8/25 78 2022/8/25 79 ② 、 平皿劃線分離： ③ 平皿涂抹法： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 80 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 81 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 82 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 83 單細(xì)胞挑取法 ： 利用選擇性培養(yǎng)基： 酚 、 染料 、 抗生素 、 加熱 、接種敏感動(dòng)物 （ 病原菌 ） 。 2022/8/25 76 三、微生物的培養(yǎng)方法： 1. 微生物純培養(yǎng)的分離方法 純培養(yǎng)（ pure culture）：實(shí)驗(yàn)室條件下從一個(gè)細(xì)胞或群 體繁殖得到的后代。 2022/8/25 75 鑒別培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入某化學(xué)藥劑對(duì)特定種群進(jìn)行鑒定 。 加富培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入血清 、 組織液等培養(yǎng)營養(yǎng)要求苛刻的微生物如枝原體 、 病原微生物 。 完全培養(yǎng)基：在 MM 中加入富含生長因子的天然物質(zhì)如蛋白胨 、 酵母膏滿足各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長 補(bǔ)充培養(yǎng)基：在 MM上有針對(duì)性的加入某一種或某幾種成分以滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株生長的培養(yǎng)基 。 其他：天然固體培養(yǎng)基 。 硅膠 ——硅酸鈉 、 硅酸鉀鹽酸 、 硫酸中和凝 結(jié)成的膠體 。 2022/8/25 71 常用凝固劑 : 瓊脂 ——從紅藻中提取的膠狀物 ， 由瓊脂糖 、 瓊脂 凝膠組成 。用于觀察微生物的動(dòng)力或保藏菌種 。 在實(shí)驗(yàn)室廣泛用于微生物的分離 、 鑒定 、 檢驗(yàn)雜菌 、 計(jì)數(shù) 、 保藏 、 生物測定等 。 適合生理代謝及基本理論研究 ， 及現(xiàn)代大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn) 。 半合成培養(yǎng)基：部分天然材料 + 部分化學(xué)試劑 。 2022/8/25 67 5. Eh值 （ 氧化還原電位 ） 好氧性微生物： Φ+ 厭氧性微生物： Φ + 兼性厭氧性微生物： Φ 好氧呼吸 Φ + 發(fā)酵或厭氧呼吸 提高氧分壓的方法：通氣 ， 加入氧化劑 降低氧分壓的方法：隔氧 ， 通氮?dú)?， CO2， 加入還原劑 2022/8/25 68 二 、 培養(yǎng)基的類型： 按來源分： 天然培養(yǎng)基：利用生物的組織 、 器官 、 細(xì)胞或抽提 物為原料制成的培養(yǎng)基 。 菌種代謝過程中產(chǎn)生代謝產(chǎn)物改變 pH。如 C/N高：適合積累細(xì)胞； C/N低 ， 適合積累代謝產(chǎn)物 3. 滲透壓 2022/8/25 66 4. pH值： 不同類型微生物的最適 pH范圍不同 。 2022/8/25 65 一、培養(yǎng)基配制原則 1. 根據(jù)微生物的營養(yǎng)要求配制 2. 注意各營養(yǎng)元素的配比 濃度過低不能滿足所需 ， 過高則抑制生長 。 鹵素：放出新生態(tài)氧 ， 氧化殺菌 。 RNH2 +HCHO RNH2 2022/8/25 60 ⑷ 、化學(xué)藥劑 無選擇性 ， 多外用 。 2022/8/25 59 ⑵ 、水分 水活度 （ aw） ：細(xì)胞自由水與總水的比值 aw=P/P0=自由水 /（自由水 +結(jié)合水） ⑶、滲透壓 鹽 %左右，糖 9%左右。 通過控制 H+進(jìn)出細(xì)胞保持細(xì)胞的近中性環(huán)境 。 細(xì)菌：中性偏中性 。 少數(shù)種類在小于 2， 大于 9生長 。 γ射線：強(qiáng)殺菌，強(qiáng)穿透力，可用于消毒。 低劑量引起生長和變異 ， 高劑量引起死亡 。） ③ O2： O3（ 臭氧 ） —— O2 + [O] 新生態(tài)氧 ， 殺菌 。 原理：形成胸腺嘧啶二聚體，干擾核酸復(fù)制。 136400nm。 胡蘿卜素在膜上阻止光到達(dá)細(xì)胞內(nèi) ， 可保護(hù)細(xì)胞 。 2022/8/25 53 ⑵ 、超聲波： 利用空化作用破壞細(xì)胞。 采取 速凍速融方法避免大的冰晶對(duì)食品 細(xì)胞的傷害 。 2022/8/25 52 ④ 低溫冷藏冷凍： 造就不利微生物生長的環(huán)境 ， 保 存菌種和食品等 。 2022/8/25 51 ③ 高溫消毒與滅菌 致死溫度： 單位時(shí)間（通常 10min）內(nèi)殺死微生物的最低溫度 意義：決定滅菌溫度 方法： 干熱滅菌：灼燒；烘烤 （ 160170℃ 2hr） 濕熱滅菌：巴斯德消毒法 （ 小于 100℃ ， 1530min） 間隙滅菌：常壓蒸汽反復(fù)滅菌 。 2022/8/25 49 ① 微生物的生長溫度范圍： 最低 最適 最高 專性嗜冷微生物 ＜ 0℃ 15℃ 20℃ 兼性嗜冷微生物 ≥0℃ 2530℃ 40℃ 嗜中溫微生物 10℃ 2040℃ 60℃ 嗜 熱性微生物 30 ℃ 4560℃ 90℃ 嗜 高溫微生物 80100℃ 2022/8/25 50 ② 原理： 嗜 冷微生物： 酶活對(duì)高溫敏感 ， 3040℃ 酶活喪失 ， 膜上 不飽和 脂肪酸含量高 。在此溫度范圍內(nèi)溫度越高生長速率越快。 ● 滅菌：用較劇烈的理化因素使任何物體內(nèi)外的一切微生物不可逆的喪失其生長繁殖能力的措施 ● 商業(yè)無菌：指食品經(jīng)殺菌處理后 ， 按照規(guī)定的微生物學(xué)檢驗(yàn)方法 ， 在所檢食品中無活的微生物檢出 ，或僅能檢驗(yàn)出極少的非病原微生物 ， 且它們在食品保藏過程中不可能生長繁殖 。 ● 防腐：就是利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖 ， 從而達(dá)到防止食品等發(fā)生霉腐的措施 。 缺點(diǎn)：易雜菌污染，菌種退化 2022/8/25 45 實(shí)現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)的方法 ? 恒濁法：其原理是根據(jù)培養(yǎng)容器內(nèi)微生物的生長密度，用光電系統(tǒng)來檢測培養(yǎng)液