【正文】 低溫或常溫保存 。 （ 2） 預(yù)凍 ：將裝有 冰箱 35 45度中冷凍成冰 （ 3） 真空干燥 ：使冰升華除去水分， 68小時(shí)后樣品呈白色疏松狀態(tài)。 優(yōu)點(diǎn) ：適用范圍廣 ， 除少數(shù)不生孢子只產(chǎn)生菌絲體的絲狀真菌外其他都可用；保存期長(zhǎng) ， 可達(dá)幾年至十幾年；存活率高 。 接種環(huán)取菌 ， 混勻后 10oC貯藏 。 蒸餾水懸浮法 最簡(jiǎn)單的保藏方法 。 隔絕空氣法 移植法的輔助方法 。 僅適用于保藏產(chǎn)生芽孢或孢子的微生物 ， 可保藏幾年 。 缺點(diǎn) 是保藏時(shí)間短，反復(fù)轉(zhuǎn)接性狀易變異。 定期移植法 簡(jiǎn)便易行，不需特殊設(shè)備。 蛭弧菌 第五節(jié) 菌種的退化、 復(fù)壯與保藏 一 、 菌種的退化和復(fù)壯 退化的表現(xiàn) ： 菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變 ， 蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體小而少 生長(zhǎng)速度緩慢 ， 孢子數(shù)量減少 代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降 ， 對(duì)寄主寄生能力下降 復(fù)壯的方法 ： 純種分離：稀釋平板法 ， 平板劃線分離或涂布法 通過寄主進(jìn)行復(fù)壯：寄生性微生物的退化菌株可通過接種至相應(yīng)昆蟲或動(dòng)植物寄主體內(nèi)以提高菌株毒性 。 捕食性真菌：捕食線蟲 六 、 寄生關(guān)系 是一種生物生活在另一種生物的表面或體內(nèi) ， 從后者的細(xì)胞組織或體液中取得營(yíng)養(yǎng)的現(xiàn)象 ， 前者為寄生物 ， 后為寄主 。 非特異性偏害：乳酸菌生長(zhǎng)可抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng) 特異性偏害：產(chǎn)生抗生素 五 、 捕食 一種微生物直接吞食另一種微生物 。 地衣的代謝：地衣中的真菌和藻類已形成特殊形態(tài)的整體了，在生理上相互依存，真菌營(yíng)異養(yǎng)生活，藻類制造養(yǎng)料，真菌提供水分、無機(jī)鹽供藻類光合作用。 典型的例子是 地衣 。 三 、 共生關(guān)系 symbiosis 指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中 ， 各自執(zhí)行優(yōu)勢(shì)的生理功能 ， 在營(yíng)養(yǎng)上互為有利 ， 組成共生體 ， 兩者之間的關(guān)系就為共生關(guān)系。 二 、 原始合作關(guān)系 protocooperation 也稱互生關(guān)系 。 但由于在競(jìng)爭(zhēng)中 ， 兩者都要消耗有限的同一養(yǎng)料 ， 結(jié)果使兩種微生物的生長(zhǎng)都受限制 。 除了這些機(jī)制外，有的抗生素作用于電子傳遞系統(tǒng)，使呼吸作用停止；有的是能量轉(zhuǎn)移的抑制劑，使 ATP不能合成；有的是解偶聯(lián)劑，呼吸可進(jìn)行但不合成能量。 通過抑制 DNA或 RNA的合成來抑制微生物正常的生長(zhǎng)繁殖 。 不同的抗生素抑制蛋白質(zhì)合成機(jī)制不同 ： 與核糖體亞基結(jié)合 30S亞基 ——卡那霉素 、 鏈霉素 、 春日霉素 50S亞基 ——氯霉素 、 紅霉素 、 林可霉素等； 在蛋白質(zhì)合成的不同階段起作用 能與酶組分中的金屬離子結(jié)合 ， 抑制酶活性 。 作用于真菌細(xì)胞膜的大部分是多烯類抗生素 ，如制菌霉素 、 兩性霉素等 ， 主要與膜中的麥角固醇結(jié)合從而破壞膜結(jié)構(gòu) ， 細(xì)菌質(zhì)膜不含固醇 ， 不起作用 。 破壞細(xì)胞質(zhì)膜 某些抗生素尤其是多肽類抗生素如多粘菌素 、短桿菌素等等 ， 主要引起細(xì)胞膜損傷 。 抑制細(xì)胞壁肽聚糖合成的抗生素主要作用于 G+，對(duì) G效果不明顯。 青霉素 β內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)與 D丙氨酸末端結(jié)構(gòu)很相似 ，從而能占據(jù) D丙氨酸的位置與轉(zhuǎn)肽酶結(jié)合 ， 將酶滅活 ， 肽鏈無法連接 ， 抑制細(xì)胞壁合成 ， 使菌體吸收水分膨脹破裂 。 青霉素抑制 G+肽聚糖的形成 。 作用方式各不相同，主要是阻止微生物新陳代謝的某些環(huán)節(jié)，鈍化某些酶的活性。 八 、 抗生素 antibiotics 大多數(shù)抗生素是由某些微生物合成或半合成的化合物 ， 在低濃度 （ ug/ml） 即可殺死或抑制其他微生物生長(zhǎng)的化合物 。由于染色劑的抑菌作用有選擇性 ， 利用此可將菌分離 。 堿性染料的陽離子與菌體的羧基或磷酸基作用 ， 形成弱電離的化合物 ， 妨礙菌體正常代謝 ， 擾亂菌體的氧化還原作用 ， 并阻礙芽孢的形成 。 陰離子型的 LAS（ 直鏈烷基苯磺酸鈉） ， 可被生物降解 ， 有殺菌作用 。 合成洗滌劑 合成洗滌劑中主要起去污作用的物質(zhì)是表面活性劑 ， 根據(jù)表面活性劑在水中解離出的有表面活性的離子所帶電荷的不同 ， 可分為陰離子型 、 陽離子型、 兩性型及非離子型 。 能吸附帶負(fù)電荷的細(xì)菌 ， 破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜最終導(dǎo)致菌體自溶死亡 ， 也可使菌體蛋白變性沉淀 。一般規(guī)定處理時(shí)間為 10分鐘，而供試菌定為Salmonella typhi（傷寒沙門氏菌）。 酚的衍生物 ， 如甲酚 、 間苯二酚和六氯苯酚殺菌力更強(qiáng) 。 （ 三 ） 表面活性劑 酚 酚是表面活性劑 ， 可引起蛋白質(zhì)變性 ， 還可抑制脫氫酶和氧化酶的活性 。 可作熏蒸消毒劑 ， 對(duì)空氣和物體表面消毒 。 %的甲醛溶液可殺死細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體 ， 5%可殺死芽孢 。 醇的殺菌力隨分子量的增加而增加 ， 丁醇 丙醇乙醇 甲醇 ， 90%95%異丙醇比 70%乙醇?xì)⒕Υ蟮写瘫菤馕?。 乙醇對(duì)芽孢不敏感 。 七 、 有機(jī)物 （ 一 ） 醇 是脫水劑和脂溶劑 ， 可使蛋白質(zhì)脫水 、 變性 ， 殺死菌體 ， 還能溶解物品表面的油脂 ， 所以有機(jī)械除菌的作用 。 干燥條件下，細(xì)胞代謝處于停滯狀態(tài)，供給潮氣又可復(fù)活。與 菌齡 、 空氣 有無及基質(zhì)性質(zhì) 也有關(guān)。 干燥作用與 溫度 有關(guān)，溫度越高越容易死亡。 大多數(shù)腐生或寄生細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞可在大氣下干化死亡 。 六 、 干燥 干燥 （ 指水活度低至 ） 會(huì)使微生物的代謝活動(dòng)停止 ， 有機(jī)體基本處于休眠狀態(tài) ， 嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起細(xì)胞脫水和蛋白質(zhì)變性進(jìn)而引起死亡 。 強(qiáng)堿可用作殺菌劑 ， 但毒性大 。 低溫維持法 ：只要在 63℃ 下維持 30min 高溫瞬時(shí)法 ：只要在 72℃ 下維持 15s 超高溫法 ：只要在 135150℃ 下維持 26s 五 、 極端 pH 過高過低 pH對(duì)微生物生長(zhǎng)都不利 ， 表現(xiàn)在： pH過低 ， 引起微生物表面由負(fù)電荷變?yōu)閹д?，影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的吸收 影響培養(yǎng)基中有機(jī)化合物的離子化作用 ， 間接影響微生物 pH適宜時(shí)才能使酶發(fā)揮最大活性 過高過低 pH都降低微生物對(duì)高溫的抵抗能力 強(qiáng)酸強(qiáng)堿具有殺菌力 。 缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí) ， 適用于不耐熱藥品 、 營(yíng)養(yǎng)物 、 特殊培養(yǎng)基或缺乏高溫設(shè)備時(shí) ， 也可用于一般物品滅菌 。 滅菌 (sterilization)是通過超高溫或其他物理、化學(xué)因素將所有微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和所有的芽孢或孢子全部殺死。 致死溫度與菌體蛋白質(zhì)含水量有關(guān) 。 pH低易被殺死 菌體含水量 。 所需時(shí)間與溫度高低有關(guān) 與菌齡有關(guān) 。 但汞鹽有劇毒 ， 應(yīng)用較受限制 。 HgCl2 1： 5001：2022對(duì)大多數(shù)細(xì)菌有致死作用 ， 實(shí)驗(yàn)室也曾用 % HgCl2消毒非金屬器皿 。 %硝酸銀用于皮膚消毒 。 機(jī)制 ： 與酶或蛋白質(zhì)上的 SH發(fā)生反應(yīng)使酶失活 ， 蛋白質(zhì)變性 進(jìn)入細(xì)胞后以金屬原子的形式沉積在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生抗代謝作用 重金屬離子在細(xì)胞內(nèi)與主要代謝物發(fā)生螯和作用 取代細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的主要元素 銅： 硫酸銅是主要的銅化合物殺菌劑 ， 對(duì)真菌及藻類效果較好 ， 也可以殺死金黃色葡萄球菌和抑制破傷風(fēng)桿菌芽孢 。 二 、 超聲波 三 、 重金屬 重金屬是酶的組成成分 ， 適當(dāng)濃度對(duì)微生物生長(zhǎng)有促進(jìn)作用 ， 高濃度下則可致死 。 間接作用 ： 輻射可引起培養(yǎng)基中的水或者氧電離 ， 產(chǎn)生自由基