培訓(xùn)課件：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)操作注意事項(xiàng)(參考版)
2024-08-20 15:38本頁面
【正文】 謝 謝 。 9 . 蒸餾水被污染。 洗滌要充分。 孵育時(shí)貼封片或加蓋 。 樣品應(yīng)新鮮，長期保存可于 20℃凍存，防止污染。 加液量、稀釋要準(zhǔn)確。 調(diào)準(zhǔn)培養(yǎng)箱溫度。 準(zhǔn)確定時(shí)。 顯色時(shí)應(yīng)避光保溫。 更換底物。盛 放 洗滌液的瓶子要潔凈。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 4 ．蒸餾水被污染 , 或盛洗滌液的瓶子被污染，留有使酶失活的物質(zhì)。 3. 配制洗滌液 的 量筒受酶抑制物污染 。 2 ．漏加 或錯(cuò)加 試劑，如酶結(jié)合物、底物 A 、 B 液。 重復(fù)測定標(biāo)本時(shí)，盡可能使用同一移液 槍 ，裝緊吸嘴，條件、人員應(yīng)盡量與上次保持一致，以排除這些因素造成的重復(fù)性差的可能性。 5 ． 不同批號試劑盒組分混用 。 3 ．保溫時(shí)間 不一致。 1 ． 樣品數(shù)量較多，加樣時(shí)間過長。 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 11 ．試劑盒超過有效期。 10 ．試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，受高溫影響。 9 ．洗滌液配制不當(dāng)。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 8 ．蒸餾水被污染。 6 ．底物作用時(shí)間不夠。 5 ．酶結(jié)合物加樣量偏少。 4 ．樣品加樣量偏少。 3 ．保溫時(shí)間不夠。 2 ．培養(yǎng)箱溫度不到 37 ℃ 。 ELISA實(shí)際操作中常見的問題 和 解決辦法 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 1 ．試劑盒未平衡至室溫。 產(chǎn)生非特異性顯色的原因 一． 試劑盒因素 ：固相載體原料的不同和制作工藝的差別、包被物的提純度、固相載體表面未被包被的空隙封閉不良等； 二． 人為因素 ：加樣、洗板、溫育、判斷結(jié)果中的操作不當(dāng)或責(zé)任心不強(qiáng)等造成假陽性或假陰性； 三． 標(biāo)本中含有干擾物 ： ——樣品中有與目標(biāo)成分性質(zhì)相似的物質(zhì)。 8 結(jié)果判斷 ? ELISA測定按其表示測定結(jié)果的方式分為定性和定量測定兩大類。 ?所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有最大吸收的波長如 450nm或 492nm進(jìn)行比色測定； ?而雙波長比色則在敏感波長如 450nm和非敏感波長如 630nm下各測定一次，最后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非敏感波長下的吸光度值的差值。 ?（ 3）比色測定時(shí)，一定要注意酶標(biāo)儀的波長是否已調(diào)至合適或所用濾光片是否正確。各種酶標(biāo)儀性能不同，使用前應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書。 7 比色 ? ELISA的比色測定由酶標(biāo)儀進(jìn)行。 TMB （ 四甲基聯(lián)苯胺）經(jīng) HRP作用后，約 40分鐘 顯色達(dá)頂峰，隨即逐漸減弱，至 2小時(shí)后可完全消退至無色。 6 顯色 ?在以 HRP作為標(biāo)記酶的 ELISA試劑盒中，一般顯色反應(yīng)條件為 37℃ 或室溫反應(yīng) 15－ 30分鐘。若手工洗板，要注意
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