【正文】 。 ，結果分析報告。 ： 293T,Hela 及常見的原代細胞等。 測量熒光： Modulus?單管型多功能熒光計進行檢測。 轉(zhuǎn)染：將帶有熒光素酶標記的報告基因和目的基因進行過表達 (不同時間點 ). 提供刺激：一般為藥物處理，病毒感染，紫外照射等各種條件刺激。 熒光素 酶報告基因的檢測原理 原理：制備含有 Luc/Rluc的 DNA載體，進行過表達細胞株。 我們并不放棄 WB 檢測，在熒光素酶檢測后，樣品在進行 WB 檢測，使實驗更具有說服力。目前主流檢測方法。具有可靠的統(tǒng)計學原理，每組實驗重復三次。Westernblotting 得到結果所需時間太久 .操作過程繁瑣，并且需要使用比較昂貴的抗體 .WB結果缺乏統(tǒng)計學依據(jù)。用酶聯(lián)免疫法對蝦肉呋喃唑酮代謝物 AOZ 殘留進行測定，操作簡易，不需要復雜的儀器設備，樣品預處 理簡單，作為一種快速篩選手段，在食品工業(yè)中有著廣闊的推廣應用前景，尤其在水產(chǎn)品出口企業(yè)中，但酶聯(lián)免疫試劑盒的價格將是最大的制約因素。 13）整個試驗過程中，勿使微孔干燥。 11）加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。 9）試劑盒內(nèi)容物要完全回穩(wěn)后再進行操作，否則，會出現(xiàn)吸光 值偏低或沒有吸光值。 7)加入 100ul 基質(zhì) /發(fā)色劑到每一微孔中，充分混合并在室溫暗處孵育 15 分鐘。 6)倒出孔中的流體將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。 4)加入 50ul 酶標記物溶液（紅帽）到每一個微孔底部，充分混合。 2）、將足夠標準和樣品所用數(shù)量的孔條插入微孔架，標準和樣品做兩個平行實驗，記錄下標準和樣品的位置。 試驗過程中的注意事項 1） A 回溫試劑（ 20℃ 24℃）。 2）以（ B/B0） 100 值為縱坐標，以樣品濃度的對數(shù)值為橫坐標，做標準對數(shù)曲線。 數(shù)據(jù)處理 1）計算（ B/B0） 100 值。 11）于每一微孔中加入 100μ L反應終止液。 9）于每一微孔中加入底物溶液 100μ L 后，輕敲盤子四周，使 其充分混合。 7）微孔中的反應液甩掉，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復洗3 次。 5）再于每一微孔中另再加入 100μ L已稀釋的酶標記物。 3）于適當?shù)奈⒖字蟹謩e加入 50μ L 標準溶液（ 0， ， ， ， ）。 1）將 AOZ試劑盒從冰箱中拿出，回溫至室溫。 5）將玻璃試管置于 80℃～ 100℃熱水浴中約 3min， 以減少水相與有機相間的乳化現(xiàn)象。 3）離心 10min（ 3000r/min），取 2mL上清（乙酸乙酯層）至 10mL玻璃管中，于 50℃下氮氣吹干。置 37℃的恒溫培養(yǎng)箱中溫育，靜置過夜（約 16h）。 方法 樣品處理 蝦去頭去殼，取可食用部分，制成均質(zhì)物。 試劑與溶液 呋喃唑酮代謝產(chǎn)物 AOZ試劑盒：北京望爾生物技術有限公司；靈敏度為 g/kg，包括： AOZ標準溶 液（ 0、 0. 1 0. 4 1. 3 ）、濃縮緩沖液、濃縮提取 /洗滌液、衍生試劑、濃縮酶標記物、底物溶液、反應終止液。 1 材料與方法 樣品 均來自福建省海利水產(chǎn)有限公司。公司秉承共同發(fā) 展的目標，不斷完善質(zhì)量管理體系，執(zhí)著追求品質(zhì) ,先后獲得了《衛(wèi)生注冊證書》、《輸美水產(chǎn)品 HACCP驗證證書》， 2021年 11 月通過了 BRC 認證， 2021 年 1 月通過了 ISO9001 認證， 2021 年通過了歐盟相關質(zhì)量認證，產(chǎn)品獲得了國外消費者的肯定和喜歡，遠銷日本、美國、加拿大、墨西哥和香港等國家和地區(qū)，在國外贏得了市場。 福建省詔安縣海利水產(chǎn)有限公司，是一家集水產(chǎn)品加工、銷售、研 究、開發(fā)和養(yǎng)殖于一體的大型出口企業(yè)。目前呋喃唑酮在食品中殘留的監(jiān)測方法主要有高效液相色譜法 [78]、酶聯(lián)免疫法 [9]、分光光度法、原子吸收法 [10]等，酶聯(lián)免疫法已受到廣泛重視。由于對呋喃唑酮蛋白結合態(tài)殘留物的安全性產(chǎn)生懷疑，自 1995 年起歐盟、日本、美國等都開始禁止這類抗菌劑在食用的畜禽及水產(chǎn)動物中使用，并嚴格執(zhí)行對輸入的食用魚，蝦 及禽類進行殘留檢測 [5]。另外 ,其作為人畜共用藥，長期微量攝入易使人體產(chǎn)生抗藥性，導致呋喃唑酮藥物失去醫(yī)療功效 [4]。經(jīng)研究表明，呋喃唑酮的代謝物中有相當數(shù)量是以其完整側(cè)鏈 3氨基 2惡唑烷酮即 AOZ 與蛋白結合的殘留物形式存在 ,AOZ 進一步代謝可產(chǎn)生具致癌、致突變作用的羥乙基肼 [3]，因此檢測呋喃唑酮代謝物 (AOZ)的殘留更具有現(xiàn)實意義。常被摻放在飼料中，用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖傳染病的預防與治療 [1]。呋喃唑酮代謝物 。結論 :實驗證明該方法適合養(yǎng)殖蝦類中 AOZ 殘留篩選。方法 :酸性條件下利用 2硝基苯甲醛衍生化 ,乙酸乙酯提取 ,正己烷去雜質(zhì)后進行 ELISA分析。 2．作吸附等溫線時為什么要用粉狀炭？廢水中的物質(zhì)經(jīng)活性炭吸附后分散好，容易單層吸附。 六、實驗結果與分析 亞甲基藍濃度與吸光度序號 12345 濃度 mg/l510203040 吸光度 亞 甲 基 藍 標 準 曲 線y=+ = 亞 甲 基 藍 濃 度（ mg/L)吸光度 A 活性炭投加量吸光度 A 原亞甲基藍濃度 C0/(mg/L)吸附平衡后亞甲基藍濃度 C/(mg/L)logCC0CC0C/mlogC0C/ 活 性 炭 間 歇 吸 附 試 驗 記 錄 活 性 炭 投 加 量(mg)lgK1/ 吸附等溫線（ 1）根據(jù)測定數(shù)據(jù)繪制吸附等溫線；（ 2）根據(jù) Freundlich 等溫線，確定方程中常數(shù) K，n；（ 3）討論實驗數(shù)據(jù)與吸附等溫線的關系。反之，如果第一個炭柱進出水溶質(zhì)濃度相差無幾，則可減少進水量。 在測水樣的吸光度之前，應該取水樣的上清液然后再分光光度計上 測相應的吸光度。 吸取上清液，在分光光度計上測定吸光度 ,并在標準曲線上查得相應的濃度，計算亞甲基藍的去除率吸附量。 在五個三角瓶中分別放入 100、 200、 300、 400、 500mg 粉狀活性炭，加入 200ml 水樣。 （ 22） 、吸附等溫線間歇式吸附實驗步驟 用分光光度法測定原水中亞甲基藍含量，同時測定水溫和 PH。 ： 恒溫振蕩器 1 臺、分析天平 1臺、分光光度計 1 臺、三角瓶 5 個、1000ml 容量瓶 1 個、 100ml 容量瓶 5 個、移液管 試劑：活性炭、亞甲基藍四、實驗步驟 （ 11） 、標準曲線的繪制 配制 100mg/L 的亞甲基藍溶液：稱取 亞甲基藍，用蒸餾水溶解后移入 1000ml容量瓶中，并稀釋至標線。 (4)利用繪制的吸附等溫曲線確定吸附系數(shù)： K、 1/n。 (2)掌握活性炭吸附公式中常數(shù)的確定方法。 二、實驗目的 本實驗采用活性炭間歇的方法，確定活性炭對水中所含某些雜質(zhì)的吸附能力。 、研究意義在水處理領域，活性炭吸附通常作為飲用水深度凈化和廢水的三級處理，以除去水中的有機物。同時，被吸附物質(zhì)在溶劑中的溶解度也直接影響吸附的速度。將活性炭作為重要的凈化劑，越來越受到人們的重視。在水處理領域，活性炭吸附通常作為飲用水深度凈化和廢水的三級處理，以除去水中的有機物。 活性炭是由含碳物質(zhì)（木炭、木屑、果核、硬果殼、煤等）作為原料，經(jīng)高溫脫水碳化和活化而制成的多孔性疏水性吸附劑。 四、名詞解釋 酶聯(lián)免疫法：是指在酶標板上包被特定的抗原（和 /或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關抗體（和 /或抗原）反應，形成的抗原抗體復合物再與相應的酶標記的抗體和 /或