基因工程技術(shù)與應(yīng)用知識點(diǎn)(參考版)
2024-08-16 04:40本頁面
【正文】 。?應(yīng)用對象：原核載體、真核載體（酵母、植物和動物）、穿梭載體。）二. 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)外源蛋白質(zhì)（利用轉(zhuǎn)基因植物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)異源蛋白質(zhì)及其它高分子化合物）三. 改良植物品種（可以通過轉(zhuǎn)基因來控制植物果實(shí)的成熟時間，也可以培育抗蟲害、抗病、坑除草劑和抗逆境的植物，還可以改變花型和花色及改良作物品質(zhì)）轉(zhuǎn)基因安全性：標(biāo)記基因是否有害；環(huán)境危害；不同的酶對離子強(qiáng)度要求不同，所以當(dāng)DNA同時以兩種限制酶處理時，選擇可使兩種酶活性反應(yīng)均可達(dá)75﹪以上的restriction buffer，若找不到適當(dāng)?shù)腷uffer則先加低鹽的buffer使其中一酶作用后，再加入高鹽buffer使另一酶作用，若無法以鹽的高低分別加入不同的buffer，則先加入一種buffer作用后，加95﹪alcohol沉淀DNA，再加另一種buffer作用?；虮磉_(dá)產(chǎn)物的檢測方法：?報告基因的酶法檢測?酶聯(lián)免疫吸附法?Western印跡法?表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)活性檢測植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法：1直接基因轉(zhuǎn)移技術(shù)（基因槍法、原生質(zhì)體法、脂質(zhì)體法、花粉管通道法、電激轉(zhuǎn)化法、PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化方法）2生物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法(農(nóng)桿菌介導(dǎo)和病毒介導(dǎo)兩種轉(zhuǎn)化方法)，常用于雙子葉植物。分泌型蛋白：外源基因的表達(dá)產(chǎn)物N端連有一信號肽序列，通過運(yùn)輸和分泌的方式穿過細(xì)胞的外膜進(jìn)入培養(yǎng)基中。3用E. coli偏愛的密碼子。解決策略：1）如果克隆的基因含有內(nèi)元，可以使用mRNA。2）外源基因可能含有在E. coli作為終止子的序列。或者：1）外源基因可能含有內(nèi)元。這樣基因可以轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。大腸桿菌基因表達(dá)載體的重要組成元件：?復(fù)制起始區(qū)(ori)?選擇標(biāo)記?正確插入的多克隆位點(diǎn)(控制有效轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控)?啟動子：Lac和Tac；PL和PR；T7?核糖體結(jié)合位點(diǎn)?翻譯起始點(diǎn)AUG等真核基因在大腸桿菌中表達(dá)遇到的問題和對策：細(xì)菌不能識別真核基因的表達(dá)信號。根據(jù)載體的選擇標(biāo)記的初步篩選：①抗藥性選擇標(biāo)記插入失活/插入表達(dá)篩選法（正向選擇?重組子在培養(yǎng)基上能生長，而非重組子不能生長。4基因產(chǎn)物檢測法：如果使用的是表達(dá)載體，那么就可以通過鑒定基因產(chǎn)物的方法鑒定正確的克隆。2 PCR法：如果已知插入DNA片段的某些序列，就可以通過PCR的方法進(jìn)行鑒定。正向選擇?重組子在培養(yǎng)基上能生長，而非重組子不能生長。?特點(diǎn)：感受態(tài)細(xì)胞制備簡單；用途廣泛，但需特殊儀器電激儀。 特點(diǎn)：操作簡便，不需特殊儀器，一般實(shí)驗(yàn)室均可進(jìn)行。轉(zhuǎn)化率：是指DNA分子轉(zhuǎn)化受體菌獲得轉(zhuǎn)化子的效率幾種常見的轉(zhuǎn)化方法：1化學(xué)轉(zhuǎn)化法：? 原理：0186。轉(zhuǎn)導(dǎo)：是指通過λ噬菌體（病毒）顆粒感染宿主細(xì)胞的途徑把外源DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)的過程。轉(zhuǎn)化：以質(zhì)粒為載體的重組DNA分子引入受
電大資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1