有機(jī)物的分離與提純課件(參考版)
2025-08-07 23:41本頁面
【正文】 。 3 儀器測(cè)定法 化合物本身有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后生成熒光化合物者可測(cè)量其熒光強(qiáng)度而進(jìn)行定量。 展開后的薄層，用一定波長(zhǎng)單色光束進(jìn)行掃描，記錄其吸光度的變化，得到掃描曲線。 2 測(cè)面積法 展開后色譜上的斑點(diǎn)面積與化合物含量間，符合一定 的線性關(guān)系。 (3)其它方法：極譜、庫(kù)侖滴定、熒光測(cè)定等。 3 測(cè)定 (1)紫外分光光度法：洗脫液調(diào)整至一定體積，在此化合物最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定。 ? 6． 定量分析 ? （ 1） 目視比較半定量法： ? （ 2） 洗脫法 薄層層析的定量測(cè)定 展開后，薄層分離所得斑點(diǎn)中化合物可進(jìn)一步定量 ，其測(cè)定方法可分為兩大類： ? 一類為 洗脫測(cè)定法 ，將所需測(cè)定的斑點(diǎn)中的組分用適當(dāng)溶劑洗脫，再選用適當(dāng)方法定量； ? 另一類為 直接測(cè)定法 ，色譜分離后，直接用肉眼觀察比較或用儀器掃描斑點(diǎn)而測(cè)定其含量。 ? 5． 定性分析 ? 顯色后可以根據(jù)各個(gè)斑點(diǎn)在薄層上的位置計(jì)算出Rf值 ， 然后與文獻(xiàn)記載的 Rf值比較以鑒定物質(zhì) 。 ? 3． 展開 ? 和紙層析相似 ， 薄層層析在密閉的層析缸中 ， 用上行法 、 下行法或近水平法展開 。 ? 表 46 濕法制板方法及活化條件 薄層的類別 吸附劑：水的用量 ① 活 化 ② 硅膠 G 硅膠 G 氧化鋁 G 硅藻土 G 1:2或 1:3 1:2(用%CMC溶液 ) 1:1～ 3 1:2 110～ 130℃ 1h 110℃ 30min 80℃ 30min 110℃ 30min ? 2． 點(diǎn)樣 ? 將試樣用適當(dāng)?shù)娜軇?(— 般用乙醇 、 丙酮 、 氯仿等， 不宜用水 )溶解 ， 制成 ～ 1％ 的試液 。 ? (三 )操作方法 ? 薄層層析法的過程 ， 主要有六個(gè)步驟： ? 制薄層板 ? (1)軟板的制備： ? (2)硬板的制備： ? 涂板方法 :傾注法；刮層法；涂鋪器鋪層法 。 ? 見圖 47。 ? 在選擇展開劑時(shí) ， 應(yīng)根據(jù)展開劑的極性 、 被測(cè)物的極性及吸附劑的活性三個(gè)方面來考慮 。 ? 2． 常用的吸附劑 ? (1)氧化鋁： ? (2)硅膠： ? 另外 ， 還有硅藻土 (硅藻土 G、 硅藻土 GF254)、 聚酰胺 、 纖維素等 。 必須根據(jù)欲分離物質(zhì)的性質(zhì)適當(dāng)?shù)倪x擇使用 。 ? (5)應(yīng)用面廣：可用于微量成分的分析 ， 也可作制備層析 。 ? (4)顯色方便 ， 能直接噴灑腐蝕性的顯色劑 ， 如濃硫酸等 。 ? (2)分離能力強(qiáng)：斑點(diǎn)小而清晰 。 因?yàn)閷游鍪窃诒游絼┥线M(jìn)行 ， 所以也稱為吸附薄層層析法 。 ? 4． 定性分析 ? 在一定的操作條件下 ， 每種物質(zhì)都有一定的 Rf值， 測(cè)量 Rf值與手冊(cè)對(duì)照 。 ?圖 44為層析裝置 ? 3． 顯色 ? 展層后 ， 取出層析紙 ， 畫好溶劑前緣標(biāo)記 。 若為液體試樣 ， 一般可直接點(diǎn)樣 。 ? 紙層析條件的選擇最終還必須通過實(shí)踐來決定 。 兩個(gè)被分離物質(zhì)的 Rf值之差應(yīng)大于。 ? (3)揮發(fā)性較好 ， 使濾紙?jiān)谡归_后易于干燥 。
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