水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)(參考版)
2025-08-02 02:38本頁(yè)面
【正文】 。通過(guò)對(duì)希瓦菌的生物學(xué)特性及其生物型分型的實(shí)驗(yàn)研究，以及本菌引起的感染以及探討外環(huán)境與宿主之間的關(guān)系，傳染源的追溯都有重要的流行病學(xué)意義。據(jù)Shideh等報(bào)道，臨床上的分離株有77屬于美國(guó)CDC分型中的腐敗希瓦菌生物2型，同時(shí)海藻希瓦菌引起人類(lèi)的感染也占相當(dāng)?shù)谋戎亍ＯＭ呔鷮儆诜前l(fā)酵菌群，一般為條件致病菌，但由于抗生素的廣泛應(yīng)用，使病原菌發(fā)生了很大變化，由條件致病菌引起的感染日益增多，同時(shí)因?yàn)樗拗鞯囊蛩?，往往也?huì)造成機(jī)會(huì)感染。目前廣泛用于臨床的微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)，但大都不能準(zhǔn)確用于希瓦菌屬中腐敗希瓦菌和海藻希瓦菌及亞種間的區(qū)分。據(jù)Shideh等報(bào)道，美國(guó)疾病預(yù)防控制中心( CDC)將希瓦菌屬中與人類(lèi)疾病有關(guān)的希瓦菌分為腐敗希瓦菌和海藻希瓦菌兩個(gè)種，而把腐敗希瓦菌又分為三個(gè)生物型。 從1941年由 Derby和Hammer首先分離并命名為假單胞菌以來(lái)，迄今已有近70年的歷史，在70年代曾隸屬于假單胞菌屬，異單胞菌屬也稱交替單胞菌，直至1985年， Mac—Donell等將其劃定為非發(fā)酵菌群中一個(gè)獨(dú)立的屬希瓦菌屬，DNA的G+C含量為44～54 mol% 。 論 有5株屬于腐敗希瓦菌的生物1型，2株為腐敗希瓦菌的生物2型， 另1株自蒼蠅分離的菌株被鑒定為海藻希瓦菌。5株病人菌株中，有3株屬于海藻希瓦菌，2株屬于腐敗希瓦菌的生物2型。 4株海藻希瓦菌的鑒定結(jié)果顯示，除能微弱氧化葡萄糖、果糖和核糖外，對(duì)其它幾種糖、醇均不能氧化，% 氯化鈉胨水中均能生長(zhǎng)，并能在血瓊脂平板上緩慢出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。% 氯化鈉胨水中均不生長(zhǎng)，在血瓊脂平板上不溶血。 生物分型 根據(jù)美國(guó)CDC的生物學(xué)分類(lèi)原則，并通過(guò)用傳統(tǒng)的鑒定方法對(duì)13株不同來(lái)源的希瓦菌的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果其中9株為腐敗希瓦菌，4株為海藻希瓦菌，詳見(jiàn)表 1 。 在 S S瓊脂上部分菌株被抑制，在綿羊血瓊脂平板上大部分菌落不溶血。在麥康凱瓊脂上，形成無(wú)色半透明光滑、淡橙色菌落。在半固體瓊脂中顯示有動(dòng)力，表層菌苔呈淡粉紅色，但色素不擴(kuò)散，也不溶于乙醇及氯仿等有機(jī)溶劑。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)36℃培養(yǎng)3～6h呈均勻混濁，18 ~24h液面形成菌膜，繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間后，則管底形成膜狀物沉淀。 生物學(xué)特性 果 O／F試驗(yàn)培養(yǎng)基，以觀察其對(duì)糖、 ％的鹽胨水中和SS瓊脂的生長(zhǎng)情況和綿羊血瓊脂上是否有溶血現(xiàn)象進(jìn)行屬內(nèi)區(qū)分。 腐敗希瓦菌 ( Shewanella1. 4 GN和 Api 20E及Api 希瓦菌屬的鑒定池塘水經(jīng)EC肉湯增菌后，由麥康凱平板分離。 分離培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)菌株1 材料與方法 1998年Shideh根據(jù)5S rRNA序列的同源性研究，對(duì)希瓦菌屬進(jìn)一步做了種、型的分類(lèi)。 putrefaciens )幾個(gè)階段，最終命名為希瓦菌屬( Shewanellaspp．)、異單胞菌屬( Alteromonas spp．)也稱交替單胞菌屬( Rubescens該菌的命名曾經(jīng)歷了原本歸屬于無(wú)色棒菌屬( Achromobacter 基因分型技術(shù)的快速發(fā)展，為更準(zhǔn)確地進(jìn)行微生物學(xué)分類(lèi)、臨床快速鑒定細(xì)菌感染、了解病原菌的致病機(jī)制以及它們與宿主的關(guān)系提供了可能。對(duì)樣品菌落總數(shù)作出是否符合衛(wèi)生要求的結(jié)論。 1五、 菌落數(shù)在1～100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以10的指數(shù)表示。 C c 若有二個(gè)稀釋度均在30～300之間時(shí)，應(yīng)以二者比值決定，比值≤2取平均數(shù)，比值2則其較小數(shù)字。稀釋度的選擇 選取菌落數(shù)在30～300之間的平皿作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。 A 菌落計(jì)數(shù)報(bào)告方法到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。 作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。 22h，取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36177。稀釋液移入平皿后，將涼至46℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻。 D 另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支10ml吸管。用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻，制成1:100的稀釋液。以無(wú)菌操作取檢樣25g（或ml），放于225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振要或研磨制成1:10的均勻稀釋液。取樣、稀釋和培養(yǎng)四、流程、步驟其它 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水 2 1三、菌落總數(shù)并不表示樣品中實(shí)際存在的所有細(xì)菌總數(shù)，菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類(lèi)，所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù)，需氧菌數(shù)等。了解菌落總數(shù)測(cè)定在對(duì)被樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)中的意義二、原理：菌落總數(shù)是指食品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落總數(shù)。食
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