實(shí)驗(yàn)二飲料中大腸菌群的測(cè)定(參考版)
2025-01-09 02:53本頁(yè)面
【正文】 MPN值＝ MPN指數(shù) 10（ ml） /接種量最大的一管（ ml） ≤ 3 個(gè)大腸菌群 /1L飲水 ≤ 100個(gè) 細(xì)菌總數(shù) /1ml飲水 我國(guó)飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)： 。 對(duì)污染嚴(yán)重的地表水和廢水，初發(fā)酵試驗(yàn)的接種水樣應(yīng)作 1： 1： 100、 1： 1000或更高倍數(shù)的稀釋。 根據(jù)證實(shí)總大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù)，查附表 “ 最可能數(shù)（ MPN）表 ” ，即求得每 100ml水樣中存在的總大腸菌群數(shù)。 凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣 ， 革蘭氏染色為陰性無(wú)芽胞桿菌 ， 即報(bào)告為大腸桿菌陽(yáng)性；凡乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色為陽(yáng)性 ， 則報(bào)告為大腸桿菌為陰性 。 1） 0C的溫箱內(nèi)培養(yǎng) （ 24177。 即通常所說的證實(shí)試驗(yàn)，其目的在于證明從乳糖初酵管試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)的試管內(nèi)分離到的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。 10， 100, 1000 倍稀釋（ 1， 2， 3） （ 10倍稀釋 ） 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂板或麥康凱瓊脂平板上 ， 置 （ 36177。 2） h， 如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣 ， 則可報(bào)告為大腸菌群陰性 ， 如有產(chǎn)生者 ， 則按下列程續(xù)進(jìn)行 ③ 根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染情況估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3管。 每一個(gè)稀釋度接種 3管 ， 置 （ 36177。 其目的在于檢查樣品中有無(wú)發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細(xì)菌 。 固體檢樣最好用無(wú)菌均質(zhì)器 ， 以 800r/min～ 1000r/min的速度處理 1min， 做成 1： 10的稀釋液 。培養(yǎng)基保存應(yīng)注意避光防止氧化。美國(guó)公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)和美國(guó)細(xì)菌協(xié)會(huì)推薦，用于增殖或鑒別大腸桿菌的檢查。伊紅、美藍(lán)不能結(jié)合，故沙門氏菌和志賀氏菌等為無(wú)色或琥珀色半透明菌落。二者除了作為指示劑外，還有抑制格蘭氏陽(yáng)性菌的作用。美藍(lán)又稱亞甲藍(lán)，為堿性染料。 EMB（伊紅美藍(lán)瓊脂） 質(zhì)控： 此培養(yǎng)基呈紫色，可有細(xì)微沉淀。沙門氏菌形成無(wú)色菌落。瓊脂是凝固劑。 (25℃ ) 先將蒸餾水中加入磷酸氫二鉀及蛋白胨、乳糖使之溶解，后加瓊脂加熱溶解，再調(diào) pH=,再加入伊紅 ,美藍(lán)水溶液 , 高壓滅菌 115℃ 、 15分鐘。 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基除蒸餾水外，其它成分加倍。 二、實(shí)驗(yàn)材料 設(shè)備和材料 溫箱 、 水浴鍋 、 天平 、 顯微鏡 、 均質(zhì)器或乳缽 、 溫度計(jì) 、平皿 、 試管 、 發(fā)酵管 、 吸管 、 載玻片 、 接種針 培養(yǎng)基及試劑 乳糖 — 膽鹽發(fā)酵管 、 乳糖發(fā)酵管 、 蛋白胨水 、 靛基質(zhì)試劑 、麥康凱 、 伊紅美藍(lán)瓊脂 （ EMB） 、 革蘭氏染色液 大腸菌群計(jì)數(shù) 大腸菌群計(jì)數(shù) （一）最先準(zhǔn)備的器材 規(guī)格名稱 數(shù)量 用途 500ml三角瓶 1個(gè) 稀釋樣品 250ml三角瓶 1個(gè) 制 EMB瓊脂 18 180mm試管 9支 單料乳糖膽鹽發(fā)酵管 18 180mm試管 3支 稀釋樣品 （ 9ml） 1ml移液管 5 支 10ml移液管 3 支 直徑為 90mm平皿 2套 制 EMB平板 250ml量筒 1支 玻璃珠：直徑約 5mm （二）應(yīng)滅菌消毒的器材 剪刀 1把 不銹鋼藥匙 1把 滴管膠頭 5只 稱量紙適量 （三）應(yīng)制備的培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 總量 所用容器
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1