實驗二--大腸菌群的檢驗(參考版)
2024-08-20 16:04本頁面
【正文】 如果接種水的水樣量不是 10ml、 1ml和 ，而是較低或較高的三個濃度的水樣量，也可查表求得 MPN指數(shù)，再經(jīng)下面公式換算成每 100ml的 MPN值。我國目前系以 1L為報告單位，故 MPN值再乘以 10，即為 1L水樣中的總大腸菌群數(shù)。 根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查 MPN檢索表，報告每 100ml（ g）食品中大腸菌群的最可能數(shù)。 2） h， 觀察產(chǎn)氣情況 。 在上述的選擇性培養(yǎng)基上 ， 挑取可疑大腸菌群 1~2個進行革蘭氏染色 ， 同時接種乳糖發(fā)酵管 ， 置 （ 36177。 1） 0C溫箱內(nèi) ， 培養(yǎng) 18h~24h， 然后取出 ，觀察菌落形態(tài)并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵試驗 。也可直接用樣品接種。 1） 0C溫箱內(nèi) ， 培養(yǎng) （ 24177。 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi) ， 接種量在 1ml以上者 ， 用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管； 1ml及 1ml以下者 ， 用單料乳糖發(fā)酵管 。 ② 用 1ml滅菌吸管吸取 1： 10稀釋液 1ml， 注入含有 9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi) ， 振搖混勻 ， 做成 1： 100的稀釋液 ， 換用 1支 1ml滅菌吸管 ， 按上述操作依次作 10倍遞增稀釋液 2. 乳糖初發(fā)酵試驗 即通常所說的假定試驗 。 樣品 1 1 2 3 4 5 2 A1組 酸奶 1 A2組 水樣 1 A3組 水樣 2 A4組 水樣 3 B1組 鮮奶 B2組 水樣 4 B3組 水樣 5 B4組 酸奶 2 三、實驗方法與 步驟 采樣及稀釋 ① 以無菌操作將檢樣 25g（ 或 25ml） 放于含有 225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi) （ 瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠 ） 或滅菌乳缽內(nèi) ， 經(jīng)充分振搖或研磨做成 1： 10的均勻稀釋液 。但某些沙門氏菌、志賀氏菌可被抑制。 （ 3）此培養(yǎng)基用于鑒別大腸桿菌及產(chǎn)氣桿菌，并可快速鑒定白色念珠菌及鑒定凝固酶陽性葡萄球菌。 （ 2）在堿性環(huán)境中，不分解乳糖產(chǎn)酸的細菌不著色。當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時，細菌帶正電荷，染上紅色，再與美藍結(jié)合而形成紫黑色菌落，并有綠色金屬光澤。質(zhì)控菌株接種后， 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時，觀察結(jié)果應(yīng)如下表所示： 菌株 菌號 生長情況 菌落 產(chǎn)氣腸桿菌 ATCC 13048 好 粉紅，無光澤 大腸埃希氏菌 ATCC 25922 好，極好 有紫綠金屬光澤中心 肺炎克雷伯氏菌 ATCC 13883 好 綠金屬光澤，有黑心 奇異變形桿菌 ATCC 25933 好，極好 無色 鼠傷寒沙門氏菌 ATCC 14028 好，極好 無色 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923 被抑制 － 說明： （ 1）伊紅又稱署紅或四溴熒光素，為酸性染料。金黃色葡萄球菌基本上不生長。 大腸桿菌在 EMB上發(fā)酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金屬光澤。 蛋白胨提供細菌生長發(fā)育所需的氮源、維生素和氨基酸，乳糖提供發(fā)酵所需的碳源，磷酸氫二鉀維持緩沖體系，伊紅 Y和美藍抑制絕大部分革蘭氏陽性菌的生長。 蛋白胨 乳糖 磷酸氫二鉀 瓊脂 伊紅 γ 美藍 或 20ml 伊紅 γ (20g /L)和 10ml 美藍 ( g /L) 蒸餾水
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