【正文】 22 / 22。值得強(qiáng)調(diào)的是，應(yīng)闡明其它曾經(jīng)做過(guò)的試驗(yàn)，包括不成熟的尚待完善或失敗、暫末收載或不能收載于正文的檢定方法的理由，并提供詳盡的實(shí)驗(yàn)資料，以便有關(guān)部門(mén)審查其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理，以確定為主觀原因或客觀原因，從而判定是否需要作進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的依據(jù)。闡明確定檢查及含量限（幅）度的意義和依據(jù)。而有關(guān)檢定該藥真?zhèn)蝺?yōu)劣各項(xiàng)均應(yīng)重點(diǎn)詳細(xì)說(shuō)明。對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中各項(xiàng)均應(yīng)作逐項(xiàng)說(shuō)明。凡藥品中規(guī)定有含量測(cè)定項(xiàng)的，其原料藥材必須對(duì)成品中所測(cè)成分規(guī)定含量限度，防止盲目投料，可限定為本制劑專(zhuān)用的原料藥材規(guī)格，暫不要求代表全國(guó)各地藥材的質(zhì)量，達(dá)不到要求者可以不進(jìn)貨，不投料，以保證產(chǎn)品質(zhì)量。因此只有投入合格的原料才能保證成藥的質(zhì)量。一種是規(guī)定下限，如藥典中收裁戊己九，%，六味地黃丸，山茱萸中熊果酸、%、%（大蜜九）；種是規(guī)定幅度，如部頌標(biāo)推進(jìn)口西洋參藥材含人參總皂為5～10%，含西洋參制劑則應(yīng)根據(jù)處方量及工藝制相關(guān)數(shù)值規(guī)定制劑含量幅度；另一種為規(guī)定標(biāo)示量，如2005版藥典中收載華山參片，～%。新藥申報(bào)生產(chǎn)時(shí)應(yīng)積累10批以上的含量數(shù)據(jù)，提出限度。必須強(qiáng)調(diào)的是，含量限度的制定應(yīng)有足夠的、具代表性的樣品數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)。日本對(duì)栽培藥材常收集上百件樣品進(jìn)行測(cè)定，對(duì)結(jié)果做分布分析，有的下限取在去除約5%樣品的數(shù)值上，即將占總量5%的質(zhì)量最差、分布極小的樣品判為不合格。5含量限度的制定 含量限度是在檢驗(yàn)方法確定的基礎(chǔ)上，積累足夠的數(shù)據(jù)后總結(jié)提出的。如測(cè)定人參總皂苷，以人參皂苷Rbl、Re等作對(duì)照品并計(jì)算。測(cè)定大類(lèi)成分如皂苷也不宜采用總皂苷為對(duì)照品，因總皂苷組分復(fù)雜，各成分比例不穩(wěn)定，不同批次的皂苷難于保持一致，從而使含量測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定。（3）回收率測(cè)定問(wèn)題 在一些實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，常見(jiàn)到所謂的加樣回收測(cè)定，不是在稱(chēng)樣開(kāi)始時(shí)即加入純品，而是將其加至制備好的供試品溶液中，這樣不能考察提取、純化過(guò)程中被測(cè)成分是否損失；也有在薄層掃描試驗(yàn)中，于薄層板上依次點(diǎn)對(duì)照品溶液、供試品溶液及對(duì)照品與供試品重疊點(diǎn)于同一原點(diǎn)上，測(cè)定后計(jì)算，這只能反映板上的回收率，而不能代表全部含量測(cè)定方法的回收率。④為了消除其它組分干擾，采用導(dǎo)數(shù)光譜或二波長(zhǎng)，三波長(zhǎng)等方法測(cè)定單一或大類(lèi)成分，僅可用于藥味較少的制劑，其空白試驗(yàn)取多批次樣品測(cè)定，結(jié)果一致才可采用。由于處方原料不相同，工藝未知，配制出的背景空白不可能條件相同，吸收值差異較大，故此方法無(wú)推廣價(jià)值。③按上述方法制備背景空白以消除干擾是不可行的。②陰性（空白）對(duì)照液即除去欲測(cè)成分的藥材原料制備的樣品液，依法測(cè)定其吸收?qǐng)D譜，與基線吻合，或略有吸收，在無(wú)其它方法可循的情況下，其吸收值若低至樣品吸收值5%以下可忽略不計(jì)?？蓪悠贩Q(chēng)人具塞錐形瓶中，精密加入溶劑10m1計(jì)算全量。4含量測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）提取問(wèn)題 對(duì)含藥材原粉的制劑，如采用取部分提取液的測(cè)定方法，不宜將樣品粉末直接置容量瓶中定容，因?yàn)橹兴幒繙y(cè)定的取樣量往往較大，且藥粉不溶于水，其固體體積不可忽視?；厥章试囼?yàn)至少需進(jìn)行5次試驗(yàn)（n＝5），或三組平行試驗(yàn)（n＝6），在同一批樣品中加入相同或不同純品量，后者可進(jìn)一步驗(yàn)證測(cè)定方法中取樣量多少更為合適。此法模擬真實(shí)性好，能反映被測(cè)藥材中其它成分的干擾情況，但由于已知含量藥材也是同法測(cè)得的平均值，故其理論值實(shí)際包括正負(fù)誤差在內(nèi)，有時(shí)也能掩蓋系統(tǒng)誤差。③取成藥空白，精密加人已知被測(cè)成分含量的藥材，依法測(cè)定。此法理論值較準(zhǔn)確，但其不足是缺少成藥中被測(cè)藥材本身的雜質(zhì)干擾條件，模擬真實(shí)性差，特別是被測(cè)藥材組分復(fù)雜，如人參被測(cè)成分為人參皂苷Re、因與該成分共存的同系物或類(lèi)同成分人參皂苷較多，其自身分離度重現(xiàn)性差，而只以加入純品測(cè)定回收率，與人參皂苷Re的干擾情況則無(wú)從反映。②以成藥空白（即除去欲測(cè)藥材后制成的成藥），精密加入被測(cè)化學(xué)成分純品，依法測(cè)定。一般加入量與所取樣品含量之比控制在1：1左右。對(duì)單味藥材的回收率測(cè)定，因不易制備除去被測(cè)成分的藥材空白對(duì)照品，只能用加樣回收法，如用提凈被測(cè)成分的藥渣作空白，則意義不大，因?yàn)樵诔ケ粶y(cè)成分的同時(shí)，干擾成分也被除去了。用實(shí)測(cè)值與原樣品中含測(cè)成分之差，除以加入純品量計(jì)算回收率。（10）回收率試驗(yàn) 含測(cè)方法的建立，多以回收率估計(jì)分析的誤差和操作過(guò)程的損失，以評(píng)價(jià)方法的可靠性。最小檢出量即檢測(cè)下限，一般按經(jīng)驗(yàn)法設(shè)計(jì)數(shù)個(gè)不同進(jìn)樣量，以目測(cè)估計(jì)最小儉出量。（9）檢測(cè)靈敏度及檢測(cè)下限的測(cè)定， 分析方法的靈敏度般以工作曲線的斜率表示。5），計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），一般要求低于5%。（8）重復(fù)性試驗(yàn) 按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品進(jìn)行多次測(cè)定（平行試驗(yàn)至少5次以上，即namp。用紫外分光光度法、比色法或薄層掃描法等測(cè)定時(shí)，應(yīng)對(duì)被測(cè)液或薄層色譜斑點(diǎn)的吸收度值穩(wěn)定性進(jìn)行考察，即每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，延續(xù)34小時(shí)，視其是否穩(wěn)定，以確定適當(dāng)?shù)臏y(cè)定時(shí)間。色譜法一般均采用對(duì)照品比較法如外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定，但也必須進(jìn)行線性考察，目的有三：；，即適用的樣品點(diǎn)樣或進(jìn)樣量的確定；，以確定是以一種或二種對(duì)照品量（即一點(diǎn)法或二點(diǎn)法）測(cè)定并計(jì)算。（5）樣品濃度與響應(yīng)值樣品濃度與吸收度或色譜峰面積（或峰高）之間的線性關(guān)系考察、即標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。紫外分光光度法或比色法中的空白對(duì)照液常見(jiàn)的有溶劑空白、試劑空白（溶劑加顯色劑）。（3）測(cè)定條件的選擇 如比色法、高效液相、薄層掃描法中最大吸收波長(zhǎng)的選擇，液相色譜法中固定相、流動(dòng)相、內(nèi)標(biāo)物的選擇，薄層掃描法層析與掃描條件的選擇等。（2）分離純化 根據(jù)被測(cè)成分的性質(zhì)，采用一定方法，排除干擾物質(zhì)，使供試樣品達(dá)到定純凈度。對(duì)提取液的取舍一般有兩種方法，一種為取全量，即充分洗凈殘?jiān)?，并將洗滌液合并于提取液中；另一種為取一定量，即在提取前精密加入定量溶劑，稱(chēng)重，搖勻，過(guò)濾，最后結(jié)果按相當(dāng)?shù)臉悠妨坑?jì)算，即得。（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：儀器分析方法為因素 A前處理方法為因素 B（2）供試品溶液的制備（3）色譜條件及測(cè)定法新藥可以引用藥典或文獻(xiàn)收載的與其相同成分的測(cè)定方法，但因品種不同。含量測(cè)定是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的核心部分，它是質(zhì)量控制中最能有效考察產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的項(xiàng)目，也是藥品穩(wěn)定性考察最重要的依據(jù)。⑨，間接控制成藥質(zhì)量。⑧復(fù)方制劑中由于某些藥味基礎(chǔ)研究工作薄弱，測(cè)定干擾難以克服或含量極低，無(wú)法進(jìn)行某些成分含量測(cè)定的，也可選擇適宜的溶劑進(jìn)行浸出物測(cè)定，如含揮發(fā)性成分或脂溶性成分可作醚浸出物測(cè)定，前者還可測(cè)定揮發(fā)性醚浸出物；如含各種苷類(lèi)成分藥味較多，也可測(cè)正丁醇浸出物。⑦中西藥結(jié)合的制劑一般不提倡，除非經(jīng)拆方試驗(yàn)，藥效學(xué)證實(shí)復(fù)方制劑優(yōu)于單獨(dú)中藥或西藥，此藥才能成立。由于樣品不均或工藝及檢測(cè)操作稍有誤差則對(duì)含量影響極大。⑤含量過(guò)低的成分較難真正反映成藥的內(nèi)在質(zhì)量。④對(duì)于因藥材原料產(chǎn)地和等級(jí)不同而含量差異較大的成分，需注意檢測(cè)指標(biāo)的選定和產(chǎn)地的限定。在保證各藥味質(zhì)量的基礎(chǔ)上，達(dá)到控制成藥質(zhì)量的目的。③所測(cè)成分應(yīng)歸屬于某一單一藥味；如成藥中含有二種以上藥味具相同成分或同系物（母核相同），最好不選此指標(biāo)，因無(wú)法確證某一藥材原料的存在及保證所投入的數(shù)量和質(zhì)量。②成分類(lèi)別清楚的，可對(duì)總成分如總黃酮、總皂苷、總生物堿等進(jìn)行測(cè)定。④，但須在起草說(shuō)明中闡述理由。如具瀉火舒肝功能的左金丸，具清熱解毒功能的萬(wàn)氏牛黃清心丸中，測(cè)定黃連、黃柏中小檗堿是合適的，但這絕不意味著中醫(yī)用藥主要用小檗堿代黃連、黃柏，甚至黃連、黃柏通用，而是以此成分衡量各自的成藥質(zhì)量。②單方制劑所含成分必須基本清楚、即如明確為生物堿類(lèi)等，并搞清其中主要成分的分子式與結(jié)構(gòu)式，既能測(cè)定其總成分，又便于以主要成分計(jì)算。對(duì)出口中成藥，多要求建立二項(xiàng)以上的含量測(cè)定；尤其對(duì)于注射劑，要求大部分成分或組分均要說(shuō)清楚，更要研究建立多項(xiàng)測(cè)定，以達(dá)可控要求，保證藥物安全有效。然而藥物的療效必定有其物質(zhì)基礎(chǔ)，根據(jù)中醫(yī)藥理論，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)研究，擇其具生理活性的主要化學(xué)成分，作為有效或指標(biāo)性成分之一，建立含量測(cè)定項(xiàng)目，評(píng)價(jià)藥物的內(nèi)在質(zhì)量，并衡量其商品質(zhì)量是否達(dá)到要求及產(chǎn)品是否穩(wěn)定，是完全必要的。2005版藥典對(duì)西洋參、白芍、甘草、丹參、金銀花、黃芪等首次規(guī)定其含重金屬限量為：鉛（Pb） ≤， 鎘（Cd） ≤，汞（Hg） ≤，砷（As）≤，銅（Cu）≤。有時(shí)因水質(zhì)欠佳，洗滌藥材后污染鉻、砷，用含砷且高的硫磺作熏蒸劑，使貝母、金銀花等含砷量高，另?yè)?jù)新加坡商反映，新、馬二國(guó)限度規(guī)定為（ppm）：砷 銅 鉛 汞 新加坡 5 150 20 馬來(lái)西亞 6 20 10 香港砷限量為10pPm；銅為50ppm。（3）化學(xué)污染 可能來(lái)自土壤、化肥、化學(xué)除草劑、農(nóng)藥、藥材熏蒸、殺蟲(chóng)劑、水源等。（2）昆蟲(chóng)及微生物污染 自六十年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)非滅菌藥物制劑（包括藥材與中成藥）的生物性污染都有一些考察，有些屬?lài)?yán)重污染，據(jù)國(guó)外報(bào)道，在一份甘草中分離出黃曲霉菌的代謝產(chǎn)物黃曲霜毒素B1及B2；有些外用成藥中曾檢出破傷風(fēng)桿菌等。3污染的控制類(lèi)型（1）異物污染 可分為鈍性異物和有害異物兩類(lèi)，前者如夾雜泥沙雜草、非藥用部位等；鈍性異物的存在主要是影響劑量的準(zhǔn)確及療效的顯現(xiàn)；有害異物的污染則可能造成嚴(yán)重質(zhì)量事故，如曾發(fā)現(xiàn)赤芍中雜有三分三，從而出現(xiàn)中毒事故。這表明中藥材以后將不再允許用硫磺熏，并且還擬將在2005年版增補(bǔ)本中增加二氧化硫殘留量測(cè)定法?？偣腆w的測(cè)定在注射劑中列于含量測(cè)定項(xiàng)下，以此量為基礎(chǔ)，計(jì)算所含有關(guān)成分的量。藥典附錄根據(jù)有關(guān)劑型分別要求檢查不同項(xiàng)目。歸納為三類(lèi)：1質(zhì)量參數(shù)類(lèi)型：與質(zhì)量直接有關(guān)的專(zhuān)定檢查項(xiàng)目，如大黃中檢土大黃苷；川烏、草烏炮制后烏頭堿的限量；黃連素中檢棕櫚堿及藥根堿等；監(jiān)測(cè)偽品的摻人、藥物純度及安全性等。（4）薄層色譜應(yīng)以彩色照片記錄其真實(shí)性，日光下顯色明顯的可復(fù)印，定量試驗(yàn)也可用掃描圖（從原點(diǎn)至前沿）記錄。C提取物對(duì)照品只能用于鑒別試驗(yàn)而不可用于定量，文字描述而不用實(shí)物對(duì)照品只適用于色譜斑點(diǎn)少而清晰，特征性強(qiáng)的條件下，否則極難描述清楚；而相對(duì)比移值的方法作為研究探索性試驗(yàn)尚可，因?qū)游鰲l件標(biāo)準(zhǔn)化程度差，影響色譜斑點(diǎn)位置因素較多，不可用于法定標(biāo)準(zhǔn)中。藥材產(chǎn)地、采收期、加工方法不同等引起成分差異，也應(yīng)進(jìn)行必要的考察。在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，最好進(jìn)行正品與偽品對(duì)比，選出兩者有明顯區(qū)別的展開(kāi)系統(tǒng)，必要時(shí)增加偽品的檢查項(xiàng)目，加大黃與土大黃均含蒽醌類(lèi)成分，可增加土大黃苷的檢查藉以區(qū)別。反之，由于同屬植物往往含有相近似的化學(xué)成分，其色譜必然也存共同之處。但對(duì)于多來(lái)源藥材，各品種之間的色譜圖可能有差異，如中國(guó)藥典收載的甘草有甘草、光果甘草和脹果甘草三種來(lái)源，薄層層析結(jié)果就可能不完全相同。如黃連應(yīng)檢出小檗堿斑點(diǎn)，但檢出小菜堿斑點(diǎn)的則不一定就是黃連。②有關(guān)問(wèn)題的討論A用單體對(duì)照品可確切地鑒別某種成分，科學(xué)性強(qiáng)，但當(dāng)所檢成分為數(shù)種藥材所共有時(shí)，則專(zhuān)屬性差。E用相對(duì)比移值表示 以外加成分（為被檢藥材所不含）作參比標(biāo)準(zhǔn)，使被檢藥味的特征斑點(diǎn)得一相對(duì)比移值作為鑒別依據(jù)。D用文字描述 在進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究時(shí)。C用藥材對(duì)照 中國(guó)藥典1985年版一部收載的藥材及成藥采用了16種藥材對(duì)照品，至1990年版增加至39種，部頒標(biāo)難及新藥標(biāo)準(zhǔn)中也收入相當(dāng)數(shù)量。部頒標(biāo)難收載西洋參和新藥絞股蘭總皂成分別聞西洋參總皂苷和絞膠蘭總皂苷作對(duì)照品。麝香雄甾烷類(lèi)化合物的定量也可采用高效薄層方法進(jìn)行。2005版藥典中收載對(duì)照品282個(gè)，比2000年版新增對(duì)照品數(shù)90個(gè)， 收載對(duì)照提取物11個(gè)）例如：麝香中甾體激素的鑒