包蟲病診斷標(biāo)準(zhǔn)(參考版)
2025-07-17 19:26本頁面
【正文】 參考文獻(xiàn)（略）。泡球蚴周圍有慢性炎癥反應(yīng)、組織纖維化和鈣化。感染人體的泡球蚴很少形成育囊和原頭節(jié)。由于變性壞死，在病灶的中心區(qū)常形成充滿壞死組織的液化腔。肝包蟲病患者可應(yīng)用B超引導(dǎo)下的細(xì)針穿刺檢查，或手術(shù)摘除棘球蚴后取材做檢查。痰液可直接涂片鏡檢。 肺包蟲病患者在棘球蚴囊破裂后，可咳出含棘球蚴囊壁、子囊、原頭節(jié)和頂突鉤的痰液。附錄D(規(guī)范性附錄)寄生蟲學(xué)和病理組織學(xué)檢查 細(xì)粒棘球蚴 呈囊狀，內(nèi)含液體，圓形或卵圓形多為單囊，直徑由不足lcm至10cm以上，巨大的蟲體可達(dá)30cm。I100 ul，于37℃封閉1 h，洗板3次； 待檢血清用上液1：20稀釋，每孔加100 ul，37℃溫育1h，洗板3次； 加工作濃度的酶標(biāo)記抗人IgG或IgM 100 ul，37℃1h后，洗板3次； 加鄰苯二胺(OPD，橙紅色)或四甲基胺／四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMB／TMBS)藍(lán)色)底物溶液100 u1，37℃，30 min。 加入2 mol／L H2S0450 ul終止反應(yīng)； 酶標(biāo)儀測(cè)各孔吸光值； 對(duì)照設(shè)置和結(jié)果判定：每板設(shè)陽性對(duì)照一孔(1 ug／ml抗原100 ul)，陰性血清對(duì)照三孔，以陰性對(duì)照OD均值十3 SD為陽性臨界值。 mol／L，溶解沉淀物； 用此液包被酶標(biāo)板每孔100ul，每份標(biāo)本包被兩孔，4℃過夜后，洗板3次(陽性及陰性對(duì)照同樣處理)； 每孔加含有3％BSA的PBST。 對(duì)照設(shè)置和結(jié)果判定：每板設(shè)陽性對(duì)照一孔(1~g／ml抗原100 ul)，陰性血清對(duì)照三孔，以陰性對(duì)照OD均值+3SD或S／N≥。 加入50 ul 2 mol／LH2S04，終止反應(yīng)。 加工作濃度的酶標(biāo)記第二抗體(特異性單抗或多抗)100 u137℃1h后，洗板3次。100 u1，于37℃封閉1 h，洗板3次。 循環(huán)抗原檢測(cè) mol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液稀釋至工作濃度包被酶標(biāo)板，每孔100 u1，4℃過夜后用PBST洗板3次。次日，用上述封閉液洗4次，每次5 min； 加入工作濃度的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗人IgG，室溫2 h，同前洗滌； 加入二氨基聯(lián)苯胺(DAB，棕色)顯色至清晰后，蒸餾水終止反應(yīng)，將反應(yīng)膜干燥保存。 操作方法 將抗原膜置于反應(yīng)槽中，加入用封閉液(3％脫脂奶粉， m1／L NaCl， mol／L TrisHCI，pH ，％吐溫一20)1：100稀釋的待檢血清，每批試驗(yàn)應(yīng)設(shè)參考陽性、陰性和PBS對(duì)照。此抗原膜條，可夾在PBS濕濾紙中封于塑料袋內(nèi)，4℃保存?zhèn)溆?。?jīng)Ponceau S染色，標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)分子量位置。陰性基本無色，陽性為鮮藍(lán)色。用前取母液lml+pH +30％H202 8 u1)。 操作方法 取已包被好抗原的PVC薄膜軟板，編號(hào)，用PBST洗1次，然后每孔加PBST 200 u1： 加待檢血清及參考血清(每板作陰性對(duì)照一孔、陽性對(duì)照一孔)每孔10 u1，混勻，置濕盒37℃5 min(或25℃室溫10 min)。以血清1：128稀釋出現(xiàn)陽性反應(yīng)者(++)判為血清抗體陽性。 操作方法 準(zhǔn)備抗原： mol／ PBS將l0％致敏紅細(xì)胞保存液稀釋至1％備用； 血凝板每孔加入25 u1 PBS； 第一孔加入待檢血清25 u1，用移液器或稀釋棒從第一孔開始逐孔向后稀釋； 每孔加1％致敏紅細(xì)胞25 u1，振蕩混合3 min，置37℃反應(yīng)1h，判定結(jié)果； 對(duì)照設(shè)置：每批試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陽性、陰性和紅細(xì)胞對(duì)照(紅細(xì)胞對(duì)照孔只有PBS和致敏紅細(xì)胞)。 紅細(xì)胞致敏 將10％戊二醛醛化的綿羊紅細(xì)胞20ml用生理鹽水300ml洗3次(3000 r／min，5min)，紅細(xì)胞壓積約為2ml： 加入生理鹽水98ml，將紅細(xì)胞配成2％懸液100ml； 與l：10000鞣酸100ml混合于37℃水浴30 min，每10 min混旋一次； ，棄上清； 沉淀加入生理鹽水198ml，將鞣化紅細(xì)胞配成1％懸液200ml； 與稀釋好的囊液抗原200ml混合，37℃水浴30 min，每10min混旋一次； 離心棄上清，用1％兔血清PBS( mol／L 、 PBS)洗3次，棄上清； 用10％兔血清PBS18ml將紅細(xì)胞配成10％致敏紅細(xì)胞20ml。沉淀中加入50ml生理鹽水和100ml PBS( mol／L，)混勻； 加入經(jīng)10％Na2CO3中和的戊二醛300ml(10％Na2CO375ml與25％戊二醛225ml(混合)于磁力攪拌器4℃緩慢攪拌24 h； 離心棄上清，沉淀用生理鹽水洗滌5次。 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) 紅細(xì)胞醛化 從綿羊頸靜脈無菌采血100ml，加入200ml～400ml阿氏液(、NaCI 、
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