包蟲病診斷標(biāo)準(zhǔn)-資料下載頁
2025-07-14 19:26本頁面
【正文】 顯色至清晰后，蒸餾水終止反應(yīng)，將反應(yīng)膜干燥保存。 判讀結(jié)果 細(xì)粒棘球蚴特異性反應(yīng)條帶：“8 kDa、16 kDa．、2024 kDa．(AgB)和38 kDa(Ag5) 多房棘球蚴特異性反應(yīng)條帶：18 kDa(Eml8)、54 kDa(Era2)和220 kDa(EmAP) 循環(huán)抗原(circulating antigen，cAg)檢測 特異性單克隆或多克隆抗體的制備 用粗抗原或特異性抗原免疫Balb／c小鼠，按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞融合、陽性細(xì)胞克隆篩選和鑒定，將分泌特異性單克隆抗體的細(xì)胞株腹腔注射小鼠，獲得單克隆抗體腹水； 用粗抗原或特異性抗原免疫兔，獲得高效價(jià)的多克隆抗體； 建立可檢測粗抗原或特異性抗原的敏感的雙抗體夾心ELISA方法； 用建立的雙抗體夾心ELISA反應(yīng)系統(tǒng)檢測血清中的cAg。 循環(huán)抗原檢測 mol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液稀釋至工作濃度包被酶標(biāo)板，每孔100 u1，4℃過夜后用PBST洗板3次。 每孔加入含3％BSA的PBST。100 u1，于37℃封閉1 h，洗板3次。 待檢血清用上液1：2稀釋，每孔加100 u1，37℃溫育1h，洗板3次。 加工作濃度的酶標(biāo)記第二抗體(特異性單抗或多抗)100 u137℃1h后，洗板3次。 加鄰苯二胺(OPD，橙紅色)或四甲基胺／四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMB／TMBS，藍(lán)色)底物溶液100 u1，37℃，30 min。 加入50 ul 2 mol／LH2S04，終止反應(yīng)。 酶標(biāo)儀測各孔吸光值。 對照設(shè)置和結(jié)果判定：每板設(shè)陽性對照一孔(1~g／ml抗原100 ul)，陰性血清對照三孔，以陰性對照OD均值+3SD或S／N≥。 循環(huán)免疫復(fù)合物檢測(circulating immune plex，CIC) 檢測CIC中的循環(huán)抗原 mol／％溶液，取此液100 ul加等量1：2待檢血清混合置室溫下1h后，5000 r／min離心1 h； 吸去上清液，在沉淀中加含有8 mol／L。 mol／L，溶解沉淀物； 用此液包被酶標(biāo)板每孔100ul，每份標(biāo)本包被兩孔，4℃過夜后，洗板3次(陽性及陰性對照同樣處理)； 每孔加含有3％BSA的PBST。100ul，37℃封閉1 h，洗板3次； 加入HRP標(biāo)記的工作濃度特異性單抗或多抗100ul，37℃下1h后洗板3次； 加鄰苯二胺(OPD，橙紅色)或四甲基胺／四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMB／TMBS，藍(lán)色)底物溶液100 ul，37℃，30 min。 加入2 mol／L H2S0450 ul終止反應(yīng)； 酶標(biāo)儀測各孔吸光值； 對照設(shè)置和結(jié)果判定：每板設(shè)陽性對照一孔(1 ug／ml抗原100 ul)，陰性血清對照三孔，以陰性對照OD均值十3 SD為陽性臨界值。 檢測CIC ； mol／L，每孔100 ul，4℃過夜后用PBST洗板3次； 每孔加入含3％BSA的PBS39。I100 ul，于37℃封閉1 h，洗板3次； 待檢血清用上液1：20稀釋，每孔加100 ul，37℃溫育1h，洗板3次； 加工作濃度的酶標(biāo)記抗人IgG或IgM 100 ul，37℃1h后，洗板3次； 加鄰苯二胺(OPD，橙紅色)或四甲基胺／四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMB／TMBS)藍(lán)色)底物溶液100 u1，37℃，30 min。 加入2 mol／LH2SO4 50 u1終止反應(yīng)； 酶標(biāo)儀測各孔吸光值； 對照設(shè)置和結(jié)果判定：每板設(shè)陽性對照一孔(人工復(fù)合物)，陰性血清對照三孔，以陰性對照OD均值+3SD或S／N≥。附錄D(規(guī)范性附錄)寄生蟲學(xué)和病理組織學(xué)檢查 細(xì)粒棘球蚴 呈囊狀，內(nèi)含液體，圓形或卵圓形多為單囊，直徑由不足lcm至10cm以上，巨大的蟲體可達(dá)30cm。組織學(xué)檢查可見囊壁分為兩層，外層為角皮層，內(nèi)層為生發(fā)層，生發(fā)層向內(nèi)長出許多原頭節(jié)或生發(fā)囊。 肺包蟲病患者在棘球蚴囊破裂后，可咳出含棘球蚴囊壁、子囊、原頭節(jié)和頂突鉤的痰液。肉眼即可識(shí)別棘球蚴囊壁和子囊，但仍應(yīng)進(jìn)行組織學(xué)檢查。痰液可直接涂片鏡檢。最好將痰液稀釋后離心，取沉渣鏡檢。肝包蟲病患者可應(yīng)用B超引導(dǎo)下的細(xì)針穿刺檢查，或手術(shù)摘除棘球蚴后取材做檢查。 多房棘球蚴 典型的多房棘球蚴是由無數(shù)直徑小于11mm至30mm的不規(guī)則的囊組成泡狀結(jié)構(gòu)。由于變性壞死，在病灶的中心區(qū)常形成充滿壞死組織的液化腔。顯微鏡檢查，可見較薄的PAS陽性的角皮層，生發(fā)層常不易辨認(rèn)。感染人體的泡球蚴很少形成育囊和原頭節(jié)。泡球蚴的內(nèi)部為壞死組織區(qū)，外部有組織細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤。泡球蚴周圍有慢性炎癥反應(yīng)、組織纖維化和鈣化。由于組織纖維化使泡球蚴變得致密和堅(jiān)硬。參考文獻(xiàn)（略）
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