【正文】 。他無論在理論上還是在實(shí)踐中，都給與我很大的幫助，使我得到不少的提高這對(duì)于我以后的工作和學(xué)習(xí)都有一種巨大的幫助，感謝他耐心的輔導(dǎo)。是他們?cè)谖耶厴I(yè)的最后關(guān)頭給了我們巨大的幫助與鼓勵(lì)，給了我很多解決問題的思路，在此表示衷心的感激。在我的十幾年求學(xué)歷程里，離不開父母的鼓勵(lì)和支持，是他們辛勤的勞作，無私的付出，為我創(chuàng)造良好的學(xué)習(xí)條件，我才能順利完成完成學(xué)業(yè)，感激他們一直以來對(duì)我的撫養(yǎng)與培育。學(xué)友情深，情同兄妹?；厥姿哪?，取得了些許成績，生活中有快樂也有艱辛。致 謝四年的大學(xué)生活就快走入尾聲，我們的校園生活就要?jiǎng)澤暇涮?hào)，心中是無盡的難舍與眷戀。另外，我還要感謝大學(xué)四年和我一起走過的同學(xué)朋友對(duì)我的關(guān)心與支持，與他們一起學(xué)習(xí)、生活，讓我在大學(xué)期間生活的很充實(shí)，給我留下了很多難忘的回憶。再次對(duì)周巍老師表示衷心的感謝。郭謙功老師淵博的知識(shí)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖黠L(fēng)和誨人不倦的態(tài)度給我留下了深刻的印象。沒有他們的幫助，我將無法順利完成這次設(shè)計(jì)。經(jīng)過這次畢業(yè)設(shè)計(jì)，我的能力有了很大的提高，比如操作能力、分析問題的能力、合作精神、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)等方方面面都有很大的進(jìn)步。本次畢業(yè)設(shè)計(jì)大概持續(xù)了半年，現(xiàn)在終于到結(jié)尾了。作者簽名： 日期： 年 月 日導(dǎo)師簽名： 日期： 年 月 日致 謝時(shí)間飛逝，大學(xué)的學(xué)習(xí)生活很快就要過去，在這四年的學(xué)習(xí)生活中，收獲了很多，而這些成績的取得是和一直關(guān)心幫助我的人分不開的。本人授權(quán)　　 　 　大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。作 者 簽 名：　　 　 　　日　 期：　　 　 　　 指導(dǎo)教師簽名：　　 　 　　 日　　期：　　 　 　　 使用授權(quán)說明本人完全了解 大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的規(guī)定，即：按照學(xué)校要求提交畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝?、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的前提下，學(xué)校可以公布論文的部分或全部內(nèi)容。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或組織已經(jīng)發(fā)表或公布過的研究成果，也不包含我為獲得 及其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷而使用過的材料。3. 腦膜炎奈瑟菌調(diào)控機(jī)制研究以小RNA為切入點(diǎn)，選擇部分腦膜炎奈瑟菌毒力相關(guān)基因開展調(diào)控機(jī)制的探索性研究。分析我國腦膜炎奈瑟菌代表菌株流行變異規(guī)律和細(xì)菌在健康人群中定植傳播能力的關(guān)聯(lián)性。通過該研究闡明腦膜炎奈瑟菌在人群中的定植、傳播和變異的規(guī)律，掌握流腦菌粘附侵襲相關(guān)的調(diào)控機(jī)制和研制疫苗等提供依據(jù)。 2. EV71免疫保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)行病毒感染機(jī)體后免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)學(xué)研究，了解重要免疫細(xì)胞及其免疫因子與病情發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的功能關(guān)聯(lián)性，揭示細(xì)胞免疫等獲得性免疫與疾病的關(guān)系；利用滅活疫苗等闡明機(jī)體保護(hù)性免疫的機(jī)制等，為早期識(shí)別重癥病例、減少神經(jīng)系統(tǒng)損傷和開展科學(xué)治療，以及評(píng)估EV71疫苗的安全性和有效性提供依據(jù)。目前EV71的致病和免疫機(jī)制尚不清楚，且缺乏靈敏、簡易的動(dòng)物模型，從而使其臨床治療方案的制訂、疫苗和藥物研發(fā)等缺乏科學(xué)依據(jù)。2. EV71變異與病毒毒力關(guān)系的研究　　構(gòu)建無神經(jīng)毒或低神經(jīng)毒的重組EV71，尋找潛在的毒力位點(diǎn)；篩選與重要致病蛋白質(zhì)相互作用的細(xì)胞因子或靶分子，鑒別阻斷病毒有效復(fù)制或產(chǎn)生致病性的關(guān)鍵靶點(diǎn)；解析EV71變異體病毒顆粒和重要功能蛋白的三維結(jié)構(gòu)，為揭示病毒變異導(dǎo)致功能和毒力變異機(jī)制提供基礎(chǔ)、為有效疫苗及治療型藥物的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。本研究將為我國EV71的監(jiān)測與疫苗株的篩選提供依據(jù)，并為闡明其致病機(jī)制提供線索。（二）EV71等病毒變異與毒力關(guān)系的研究擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題是EV71等病毒遺傳變異規(guī)律及其與毒力關(guān)系。3. 優(yōu)勢血清型福氏志賀氏菌耐藥特點(diǎn)研究 從志賀菌全基因組和轉(zhuǎn)錄組水平高通量、全方位篩選耐藥相關(guān)基因，系統(tǒng)評(píng)價(jià)志賀菌單耐藥和多重耐藥產(chǎn)生過程中獲得耐藥性的主要變異方式及分子機(jī)理，從而為臨床耐藥監(jiān)測和開發(fā)針對(duì)耐藥菌的新型抗菌藥物提供潛在的分子靶位。利用它在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建自然界分離到的血清型菌株，研究血清型轉(zhuǎn)化機(jī)制、噬菌體單獨(dú)或共轉(zhuǎn)導(dǎo)的特點(diǎn)、噬菌體和流行強(qiáng)度的關(guān)系、噬菌體對(duì)宿主菌致病力的影響等。變異是志賀氏菌流行病學(xué)的一個(gè)最顯著的特點(diǎn)，它既是志賀氏菌逃避免疫屏障，保持流行強(qiáng)度的重要機(jī)制之一，也對(duì)進(jìn)一步發(fā)展和使用志賀氏菌疫苗具有決定性意義。鑒此，本項(xiàng)目擬以病原體變異規(guī)律與致病機(jī)制這兩個(gè)傳染病基礎(chǔ)研究中的核心科學(xué)問題為突破口，針對(duì)我國現(xiàn)階段居于傳染病發(fā)病率前列的痢疾、手足口病以及流行型別和模式發(fā)生轉(zhuǎn)變、對(duì)社會(huì)造成嚴(yán)重沖擊的流腦等重要傳染病病原體的流行變異規(guī)律和致病機(jī)制開展相關(guān)研究，從而為其有效防控打下基礎(chǔ)。病原體通過變異不斷適應(yīng)宿主，但是其變異往往也導(dǎo)致致病力、耐藥性、流行特性和臨床表現(xiàn)等發(fā)生改變，從而給臨床診斷、治療、疫苗研發(fā)和預(yù)防控制帶來困難，因此如何應(yīng)對(duì)病原體變異是傳染病防控面臨的長期巨大挑戰(zhàn)；病原體通過非常復(fù)雜的機(jī)制導(dǎo)致疾病，但是迄今對(duì)病原體致病機(jī)制的認(rèn)識(shí)總體上尚十分膚淺，揭示其致病機(jī)制仍是戰(zhàn)勝傳染病的一項(xiàng)長期任務(wù)。初步了解噬菌體對(duì)福氏志賀菌環(huán)境適應(yīng)性的影響，了解福氏志賀氏菌優(yōu)勢血清型菌株的耐藥和環(huán)境適應(yīng)能力特點(diǎn)，初步揭示血清轉(zhuǎn)換噬菌體與福氏志賀菌血清變遷的關(guān)系；初步闡明志賀菌重要功能蛋白參與調(diào)控宿主相關(guān)免疫信號(hào)途徑的作用方式；初步認(rèn)識(shí)志賀氏菌進(jìn)化和變異的規(guī)律和趨勢；提出毒力大質(zhì)粒對(duì)染色體的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)染色體編碼的新的抗毒力因子；完成相關(guān)基因缺失突變體和過表達(dá)突變體毒力評(píng)價(jià)；鑒別出轉(zhuǎn)錄或翻譯調(diào)控蛋白；揭示我國手足口病病原譜特征，初步闡明EV71病毒的基因和重要蛋白表位的變異特征以及病毒進(jìn)化和EV71毒力（致病力）的關(guān)系，篩選出低毒或無毒的重組EV71，初步獲得病毒顆粒晶體結(jié)構(gòu)或病毒顆粒冷凍電鏡結(jié)構(gòu)，初步闡明EV71病毒復(fù)制及翻譯機(jī)理；進(jìn)一步闡明EV71對(duì)宿主免疫的調(diào)控機(jī)制，闡明EV71滅活疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制和有效性評(píng)價(jià)指標(biāo)；闡明我國代表菌株流行變異規(guī)律和細(xì)菌在健康人群中定植傳播能力的關(guān)聯(lián)性；發(fā)表SCI論文2030篇。初步掌握不同噬菌體對(duì)志賀菌致病力和毒力的影響，了解福氏志賀菌優(yōu)勢血清型菌株的致病力特點(diǎn)；初步掌握志賀菌重點(diǎn)耐藥相關(guān)基因的調(diào)控功能；獲得志賀菌重要功能蛋白在宿主細(xì)胞中的靶蛋白并初步了解相應(yīng)蛋白復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和功能；初步了解志賀菌進(jìn)化的動(dòng)力、其形成過程中關(guān)鍵基因的變異、與EIEC菌株之間的進(jìn)化關(guān)系以及進(jìn)化起源機(jī)制；確定毒力大質(zhì)粒驅(qū)除前后志賀菌株差異蛋白相關(guān)基因的受調(diào)控水平以及差異表達(dá)復(fù)合物各組成亞基間的相互作用；揭示我國大陸流行的EV71病毒的型別特點(diǎn)、進(jìn)化特征及其與國外不同年代毒株的差別；初步確定EV71神經(jīng)毒性相關(guān)蛋白；獲得EV 71 2A、2B、2C、3A及突變蛋白結(jié)構(gòu)生物學(xué)信息，解析12個(gè)晶體結(jié)構(gòu)；鑒定出若干神經(jīng)細(xì)胞中參與EV71翻譯的病毒、宿主蛋白；深入揭示EV71拮抗干擾素激活機(jī)制及其與EV71致病性的關(guān)系、交叉反應(yīng)的CD4 T細(xì)胞對(duì)EV71免疫應(yīng)答和感染小鼠疾病進(jìn)程的影響以及EV71感染導(dǎo)致特異的Th細(xì)胞亞型分化情況及其與疾病進(jìn)展的關(guān)系；完成1020株代表性流腦菌株高通量測序分析、粘附能力差異性代表性菌株侵襲力的差異性及調(diào)控機(jī)制分析并構(gòu)建突變體進(jìn)行功能研究；發(fā)表SCI論文2030篇。第四年分析噬菌體對(duì)志賀菌毒力基因表達(dá)的影響；分析和驗(yàn)證志賀菌耐藥機(jī)制和調(diào)控機(jī)理；篩選志賀菌參與調(diào)控宿主免疫反應(yīng)的重要功能蛋白或毒力蛋白及其相互作用的蛋白和區(qū)域；選擇4株與不同志賀氏菌進(jìn)化簇關(guān)系較近的EIEC菌株進(jìn)行全基因組測序，分析不同志賀氏菌分化的主要?jiǎng)恿彤a(chǎn)生的結(jié)果，尋找在志賀氏菌形成過程中的關(guān)鍵基因上的SNP改變，分析志賀氏菌與EIEC菌株之間的進(jìn)化關(guān)系和差異，系統(tǒng)解析志賀氏菌的進(jìn)化起源機(jī)制；綜合分析并驗(yàn)證上述比較蛋白質(zhì)組和比較轉(zhuǎn)錄組的結(jié)果，并分析相關(guān)基因的受調(diào)控水平；驗(yàn)證差異表達(dá)復(fù)合物各組成亞基間的相互作用。分析W135群、Y群、不可分群等其它血清群流腦菌株的粘附定植能力差異、莢膜基因簇差異和粘附定植相關(guān)基因，對(duì)代表性菌株進(jìn)行粘附因子相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平檢測，選擇2個(gè)小RNA進(jìn)行功能分析。完善用于EV71感染研究的體外血腦屏障模型、新型小鼠感染模型和恒河猴模型等，初步揭示不同病人細(xì)胞因子等表達(dá)特征和干擾素拮抗機(jī)制；闡明不同群流腦菌株對(duì)宿主細(xì)胞粘附力檢測，完成莢膜基因簇差異性分析和相關(guān)粘附基因的分析，對(duì)候選小RNA進(jìn)行鑒定；發(fā)表SCI論文1015篇。初步確定噬菌體基因組上優(yōu)勢決定基因或區(qū)域，初步了解志賀菌小RNA的生物學(xué)功能以及相應(yīng)的調(diào)控機(jī)制；完成福氏志賀氏菌3a和4b的全基因組序列，證明O抗原側(cè)鏈修飾基因功能；建立福氏志賀氏菌血清亞型的分子分型方法，初步解析不同福氏志賀氏菌血清型的分化機(jī)制和不同血清型之間轉(zhuǎn)化的變異機(jī)制；揭示志賀氏菌毒力大質(zhì)粒驅(qū)除前后以及大腸桿菌獲得毒力大質(zhì)粒前后在不同培養(yǎng)條件下的蛋白表達(dá)譜差異。第二年對(duì)獲得的血清型相關(guān)噬菌體進(jìn)行基因組序列測定和鑒定，比較其與非優(yōu)勢血清型相關(guān)噬菌體的特征差異，尋找噬菌體基因組上優(yōu)勢決定基因或區(qū)域；對(duì)篩選出小RNA進(jìn)一步進(jìn)行鑒定分析，對(duì)多個(gè)毒力大質(zhì)粒編碼的小RNA進(jìn)行功能探討；篩選對(duì)志賀菌生長有明顯抑制作用的藥物；設(shè)計(jì)構(gòu)建志賀菌全基因組芯片；測定福氏志賀氏菌3a、4b的全基因組序列，尋找并驗(yàn)證負(fù)責(zé)O抗原側(cè)鏈修飾的噬菌體和關(guān)鍵基因。誘導(dǎo)、分離到至少3種血清型轉(zhuǎn)換噬菌體，建立福氏志賀菌血清型轉(zhuǎn)換噬菌體庫；初步獲得志賀菌的小RNA庫，完成福氏志賀氏菌1b和2b的全基因組序列，證明O抗原側(cè)鏈修飾基因功能；初步完成志賀氏菌毒力大質(zhì)粒驅(qū)除前后的蛋白表達(dá)譜差異分析；完成對(duì)不同地區(qū)EV71分離株的序列分析測定，闡明其在細(xì)胞和動(dòng)物上的感染特性，確立代表性突變序列,