克東腐乳發(fā)酵生產(chǎn)中優(yōu)勢菌株細(xì)胞融合方法初探畢業(yè)論文(參考版)
2025-06-25 19:19本頁面
【正文】 總體修改意見：你看看工作手冊，不是說用 A4 的紙嗎？行距不是 倍嗎？圖表不是在 excel 中能打開嗎？參考文獻(xiàn)就 4 個？？你看看工作手冊結(jié)果討論不能分開寫，先描述然后再分析，例如，如果是酶濃度的選擇，應(yīng)該把黃菌和綠菌寫在一起，不能像你這樣寫。我還要感謝實(shí)驗(yàn)室中的劉芬、常悅、馬營，平時在實(shí)驗(yàn)上給我的幫助，以及在我有病身體不適的時候，是她們主動幫我承擔(dān)起了試驗(yàn)任務(wù)，讓我得以休息，在此我特別的感謝她們。參 考 文 獻(xiàn) [1] ,2022,25(4): 45[2] 程麗娟,，2022，12(5):1112[3] 何宏,2022，25(7):3839[4] 李里，,2022,27(5):1617致 謝光陰荏苒，四個月緊張而又愉快的畢業(yè)實(shí)驗(yàn)接近尾聲了，想要感謝的人不勝枚舉，首先，感謝劉曉蘭老師、鄭威學(xué)長的大力支持和精心指導(dǎo)，使我不僅順利的完成了實(shí)驗(yàn)任務(wù)和畢業(yè)論文，學(xué)到了許多關(guān)于發(fā)酵和細(xì)胞融合等方面的理論知識、實(shí)驗(yàn)方法，更重要的是，劉老師兢兢業(yè)業(yè)、孜孜以求的工作作風(fēng)、大膽創(chuàng)新的進(jìn)取精神以及鄭威學(xué)長嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度、敏銳周密的邏輯思維能力深刻的影響和深深的啟迪了我，并將使我終生受益。溶菌酶質(zhì)量濃度為 3mg/mL，酶解時間 60 分鐘，酶解溫度 37℃，水解 pH 值為 時，QSG 菌原生質(zhì)體再生率最高。如果高于最適酶解溫度時，很可能在酶解過程中，高溫影響了原生質(zhì)體本身的DNA 與酶系統(tǒng)的活性，因而，影響了原生質(zhì)體的活性，降低了其再生率；而如果酶解時，低于最適的酶解溫度，則菌體較難原生質(zhì)體化，未脫壁的菌體有可能產(chǎn)生抑制因子，影響原生質(zhì)體的再生，故再生率也隨之降低。一般說來，菌體選擇的酶解溫度，往往是該菌體和該種酶類的最適酶解溫度。在菌體對數(shù)期末，穩(wěn)定生長初期，菌體的生理狀態(tài)相對一致，對溶菌酶的敏感性更強(qiáng)，易于破壁，為了使破壁效果更好，我們在此期內(nèi)加入溶菌酶，但若溶菌酶濃度過高，作用時間過長，雖然可使原生質(zhì)體形成率很高，但再生率卻較低，綜合考慮這兩方面的影響，我們選擇原生質(zhì)體的形成率和再生率乘積最大時的條件為溶菌酶的最佳條件。因此，提高再生率則是原生質(zhì)體融合的另一關(guān)鍵步驟。因此，原生質(zhì)體的制備是原生質(zhì)體融合的第一個關(guān)鍵步驟。在水解 pH 值為 時，原生質(zhì)體再生率最高。 溶菌酶水解 pH 值的優(yōu)化取第 2 代 QSY 菌，菌齡為 16h 的菌液制備原生質(zhì)體，使用 3mg/mL 的溶菌酶，酶解時間 60min，酶解溫度 37℃，酶解 pH 值不同，原生質(zhì)體的形成率與再生率見表 311。 溶菌酶水解溫度的優(yōu)化取第 2 代 QSY 菌，菌齡為 16h 的菌液制備原生質(zhì)體，使用 3mg/mL 的溶菌酶，酶解時間為 60min，作用不同溫度，原生質(zhì)體的形成率與再生率見表 310。 酶解時間的優(yōu)化取第 2 代 QSY 菌，菌齡為 16h 的菌液制備原生質(zhì)體，使用 3mg/mL 的溶菌酶作用不同時間，原生質(zhì)體的形成率與再生率見表 39。 黃菌 溶菌酶濃度的優(yōu)化在相同條件下，使用不同濃度的溶菌酶作用于 QSY，酶解時間為 60min，原生質(zhì)體形成率與再生率，結(jié)果見表 38。表 37 酶解 pH 值對原生質(zhì)體形成率從與再生率的影響水解 pH A(個) B(個) C(個) 形成率（％）再生率（％） 2320 86 250 3550 560 1320 3612 6 3724 2 分析：由表 37 可見，水解 pH 值在 和 的條件下，再生培養(yǎng)基上沒有長出菌落。表 36 酶解溫度對原生質(zhì)體形成率從與再生率的影響水解溫度（℃） A(個) B(個) C(個) 形成率（％）再生率（％）34 2860 312 50037 3550 560 132040 2860 116 180分析：由表 36 可見，隨酶解溫度的升高，原生質(zhì)體的形成率呈增長趨勢，但溫度超過 37℃，原生質(zhì)體再生率明顯下降。表 35 酶解時間對原生質(zhì)體形成率與再生率的影響作用時間（min） A(個) B(個) C(個) 形成率（％）再生率（％）30 3120 652 92060 3550 560 132090 2660 66 480120 2660 99 260分析：由表 35 可見，隨酶解時間的延長，原生質(zhì)體的形成率呈增長趨勢，再生率呈下降趨勢，酶解時間超過 90min，原生質(zhì)體的形成率開始下降，再生率也明顯降低。 原生質(zhì)體制備條件的優(yōu)化結(jié)果 綠菌： 溶菌酶濃度的優(yōu)化在相同條件下，使用不同濃度的溶菌酶作用于 QSG，酶解時間為 60min，原生質(zhì)體形成率與再生率，結(jié)果見表 34.表 34 酶濃度對原生質(zhì)體形成率與再生率的影響酶濃度（mg/mL） A(個) B(個) C(個) 形成率（％）再生率（％）1 3240 680 1200 2 3320 540 1230 3 3550 560 13204 3680 420 830分析：由表 34 可見，隨溶菌酶濃度的升高，原生質(zhì)體的形成率隨之明顯提高；當(dāng)溶菌酶質(zhì)量濃度達(dá)到 4mg/mL 時，原生質(zhì)體的再生率明顯降低。因?yàn)槲⑸锏目顾幮允瞧渚N的特性，是由遺傳物質(zhì)決定的，所以，可將抗性鑒定特征作為親本菌株進(jìn)行融合實(shí)驗(yàn)的標(biāo)記。QSG 對鏈霉素（20260μg/mL）有抗性，而 QSY 對則對鏈霉素（140260μg/mL ）敏感。由圖可見 QSY 菌和 QSG 菌在培養(yǎng)至 16h 后就基本全達(dá)到了生長對數(shù)期末，快要進(jìn)入穩(wěn)定期。菌株生長曲線的測定圖 31 綠菌生長曲線0120 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24時間/hOD600生長曲線圖 32 黃菌生長曲線0
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