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guan細(xì)胞融合ppt課件(參考版)

2025-05-04 18:05本頁(yè)面
  

【正文】 思考題 ? 1 什么是細(xì)胞融合?有怎樣的意義? ? 2 細(xì)胞融合的主要方法有哪些?各有什么特點(diǎn)? ? 3 HAT的選擇原理是什麼? 本章結(jié)束 謝謝! 。通過(guò)這種基因互補(bǔ),可以用正?;騺?lái)治療由于基因突變或基因缺失的疾病。 ? 2) 體細(xì)胞雜種的致瘤性分析 通過(guò)正常二倍體細(xì)胞和致瘤性或病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的融合來(lái)進(jìn)行致瘤性的遺傳分析。由此,可根據(jù)表型和與表型特征相對(duì)應(yīng)的基因在特定染色體上。待細(xì)胞長(zhǎng)成集落后,用毛細(xì)管吸出移種于含飼養(yǎng)細(xì)胞的 96孔板內(nèi)。 5)根據(jù)檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果再次進(jìn)行克隆化。 通過(guò)適當(dāng)?shù)南♂屵_(dá)到分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的目的 1)取出陽(yáng)性孔內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù) 2)用培液將其稀釋到例如每毫升內(nèi) 10個(gè)細(xì)胞。 ? 在培養(yǎng)過(guò)程中,一般要加能釋放某些生長(zhǎng)因子促進(jìn)雜交瘤生長(zhǎng)的飼養(yǎng)細(xì)胞,如小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞或胸腺細(xì)胞等。 ? 含氨基喋呤 A培養(yǎng)基 抑制了細(xì)胞內(nèi)嘌呤和嘧啶的全合成途徑。 ? 雜交瘤技術(shù)中,常選用 次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷( HPRT) 骨髓瘤細(xì)胞或 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型( TK) 骨髓瘤細(xì)胞為親本之一。 4 具有所需性狀 雜種細(xì)胞的篩選 HAT選擇系統(tǒng)--基于酶缺陷型細(xì)胞和藥物抗性所建立的雜種篩選 ? HAT是含一定濃度 次黃嘌呤( Hypoxanthine,H) 、 氨基喋呤( Aminopterin, A ) 及 胸腺嘧啶核苷( Thymidine, T) 的一種 選擇性培養(yǎng)基 ,其中三種成分與細(xì)胞 DNA合成有關(guān)。 ? 親本二:高溫敏感突變型,但不能抗卡那霉素。由此篩選雜種細(xì)胞。 ? 親本 A:色氨酸缺陷型 ? 親本 B:蘇氨酸缺陷型 ? 雜種細(xì)胞可以在不含色氨酸和蘇氨酸的培養(yǎng)基上培養(yǎng),而親本細(xì)胞均會(huì)死亡。 ? 親本 A:對(duì)氨芐青霉素敏感,對(duì)卡那霉素不敏感 ? 親本 B:對(duì)卡那霉素敏感,對(duì)氨芐青霉素不敏感 ? 雜種細(xì)胞可以在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng) ? 2) 營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)篩選系統(tǒng): 細(xì)胞在缺乏一種或幾種營(yíng)養(yǎng)成分時(shí),不能生長(zhǎng)繁殖,即營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞。 ? 4)多核體:含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體 ? 5)異胞質(zhì)體:具有不同胞質(zhì)來(lái)源的雜合細(xì)胞。 ? 1)親本 ? 2)同核
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