木霉tp100726菌株固體發(fā)酵及所產(chǎn)纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究(參考版)
2025-06-25 17:01本頁(yè)面
【正文】 26。感謝實(shí)驗(yàn)室所有師兄師姐對(duì)我實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的關(guān)心和幫助。感謝我的同學(xué)潘時(shí)達(dá)、張喜望，你們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中給我?guī)椭岢鼋ㄗh，讓我避免了很多不必要的錯(cuò)誤，感謝你們。在本文的選題、設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)、分析和論文撰寫(xiě)過(guò)程中，師老師都傾注了大量的心血。參考文獻(xiàn)[1] 劉燕, 張宏福, 孫哲. 纖維素酶的分子生物學(xué)與基因工程研究進(jìn)展[J]. 飼料工業(yè), 2007, 28 (18) : 11 14.[2] 高培基. 纖維素酶降解機(jī)制及纖維素酶分子結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J]. 自然科學(xué)進(jìn)展, 2003, 13(1): 21 29.[3] 顧方媛, 陳朝銀, 石家驥等. 纖維素酶的研究進(jìn)展與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 微生物學(xué)雜志, 2008, 28 (1): 83 86.[4] Sukumaran RK, Singhania RR, Pandey A. Microbial cullulases production, applications and challenges [J]. Sci Ind Res, 2005, 64(11): 832844.[5] Wheeler Marsha M, Zhou XG, Scharf Michael E, et al. MoLecular and biochemical markers formonitoring dynamic shifts of celluolytic protozoa in Reticulitermes flavipes [J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology, 2007, 37 (12): 1366 1374.[6] 陳小堅(jiān). 纖維素酶的分子生物學(xué)研究及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào), 2006, 23 (4) : 48 51.[7] 龐宗文, 董志剛, 梁靜等. 高溫放線菌6PL1纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2006, 22(2): 20~23.[8] Zhang, , Lynd, . A functionally based model for hydrolysis of cullulose by fungal cullulase[J]. Biotechnol. Bioeng, 2006, 94(5): 888–898.[9] 吳翔, 陳強(qiáng), 徐麗華. 一株降解纖維素的高溫放線菌的篩選及其產(chǎn)酶條件研究[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 26(增刊): 101 104.[10] 李師翁, 孔凱, 馮佳麗. 產(chǎn)低溫纖維素酶放線菌的篩選、鑒定及酶學(xué)性質(zhì)初步研究[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2010, 7: 216 220.[11] [D].吉林：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.[12] Krisztina Kov225。影響酶活性質(zhì)的因素除了溫度和pH外，還有很多其他因素對(duì)纖維素酶的酶活有較大影響。培養(yǎng)基固體配比實(shí)驗(yàn)中只是優(yōu)化了一步，還需做進(jìn)一步的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。木霉TP100726菌株所產(chǎn)纖維素酶的最適反應(yīng)溫度為50℃，在50℃，以木糖渣為底物，檸檬酸緩沖液，料液比為1:10，溫度為50℃，糖化木糖渣酶活最高。 不同緩沖液體系對(duì)糖化木糖渣的影響4 結(jié)論與討論木霉TP100726菌株原始配方中沒(méi)有木糖渣，本實(shí)驗(yàn)將木糖渣添加進(jìn)去，考察了木糖渣對(duì)稻草粉替代的可能，并對(duì)改良后發(fā)酵的纖維素酶粗酶液水解木糖渣進(jìn)行探所，結(jié)果如下：木霉TP100726菌株固體培養(yǎng)基中固體物質(zhì)配比為麩皮 60%，木糖渣20%，豆粉1%，稻草粉20%。不同的緩沖體系使所產(chǎn)酶產(chǎn)生不同的酶解效果。由此可見(jiàn)，糖化木糖渣水解的最佳底物為木糖渣。在酶解48h后，%。酶解液中糖濃度過(guò)低不利于發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，故選1:10作為最佳料液比，%。 糖化木糖渣最適溫度選擇（3）料液比對(duì)木糖渣糖化的影響，隨著料液比的提高，葡萄糖量逐漸增加，纖維素轉(zhuǎn)化率逐漸降低。C左右均能夠很好的糖化木糖渣，但以50176。C之間。 糖化木糖渣最適酶解pH（2）糖化木糖渣的最適溫度最適的酶解溫度有利于提高酶解效果，提高水解液中葡萄糖的含量，溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響酶解反應(yīng)的效果。%（%為1ml粗酶液中葡萄糖所占的百分量）%。C時(shí)， 。 纖維素酶粗酶液熱穩(wěn)定性（4）纖維素酶的酸堿穩(wěn)定性在一定溫度下，pH值對(duì)酶穩(wěn)定性會(huì)產(chǎn)生很大的影響，通過(guò)研究不同pH值條件下酶的酸堿穩(wěn)定性以期找出最大限度發(fā)揮酶的催化活性的pH值。C時(shí)，纖維素酶酶活力則迅速下降，此時(shí)可以看到大量的酶蛋白沉淀。在45~50176。其濾紙酶活為25IU，CMC酶活為106IU。 粗酶液最適反應(yīng)溫度（2）纖維素酶最適pH纖維素酶活力與pH值密切相關(guān)，影響酶活的原理可能有以下幾個(gè)方面：過(guò)酸、過(guò)堿會(huì)影響酶蛋白的構(gòu)象，甚至使酶變性而失活；同時(shí)pH還會(huì)影響底物分子與酶分子的中間產(chǎn)物解離狀態(tài)，這些中間產(chǎn)物的離子化狀態(tài)與酶的專一性及酶分子的活力中心的構(gòu)象有關(guān)。C時(shí)，其CMC酶活與FPA則下降。木霉TP100726號(hào)菌株所產(chǎn)粗酶液在45~50176。一般說(shuō)來(lái)，酶在一定的溫度范圍內(nèi)，催化反應(yīng)的速率和溫度成正比，溫度越高，反應(yīng)速率越快。 粗酶液稀釋倍數(shù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) ，濾紙酶活在酶液稀釋50倍~100倍區(qū)間稀釋倍數(shù)最佳，CMC酶活在酶液稀釋100倍~200倍區(qū)間稀釋倍數(shù)最佳。 結(jié)果與分析 酶液稀釋倍數(shù)的確定粗酶液進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，如果酶液濃度過(guò)高，就會(huì)使大部分酶分子不能接觸到底物，從而影響酶活的準(zhǔn)確度；如果酶液濃度過(guò)低，則會(huì)使酶分子不能與底物良好接觸，同樣會(huì)影響酶活的準(zhǔn)確度。（5） 糖化木糖渣最適緩沖液選擇 mol/L檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液，磷酸緩沖液，乙酸乙酸鈉緩沖液，按照木糖渣與混合液比例為1:10與50176。 （4） 粗酶液糖化不同木質(zhì)纖維素 mol/L，料液比1:10，酶解溫度50176。（3） 料液比對(duì)酶解的影響為考察不
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