木霉tp100726菌株固體發(fā)酵及所產(chǎn)纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究-在線瀏覽
2024-08-02 17:01本頁面
【正文】 用儀器名稱型號生產(chǎn)廠家生物傳感分析儀SBA40c山東省科學(xué)院生物研究所電熱恒溫培養(yǎng)箱DH4000 B型天津市泰斯特儀器有限公司UVVIS分光光度計UV1700SHIMADZU CORPORATION滅菌鍋YXQLS30SII上海博訊實(shí)業(yè)有限公司電子天平(普通)YP601N上海精密科學(xué)儀器有限公司冷藏陳列柜LSC269CW星星集團(tuán)有限公司純水儀Synergy174。C低溫冰箱MDFU4086S日本SANYO 培養(yǎng)基活化培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基：取200 g去皮洗凈的土豆切成小塊，加水煮爛后濾出上清后定容至1000 ml，加入2% 葡萄糖，2% 瓊脂，107℃滅菌20 min。121℃高壓蒸汽滅菌25 min，備用。 試驗(yàn)方法 木霉TP100726菌株固體發(fā)酵 配制培養(yǎng)基原始固體配比: 60%麩皮，40%稻草粉， 無機(jī)鹽溶液: 3%(NH4)2SO4 ，1%KH2PO4發(fā)酵培養(yǎng)基：固體基質(zhì)按正交表（）中組合進(jìn)行配制。（3）在培養(yǎng)過程中，從第五天開始，每隔24h取發(fā)酵基質(zhì)一瓶，加入60ml緩沖液（固體裝料質(zhì)量：緩沖液體積=1:10），浸提35h（4）取浸提液于離心管中，4000 r/min離心10 min，上清液即為粗酶液。 觀察 表面觀察 用PDA培養(yǎng)基活化保存的菌株，并在培養(yǎng)過程中觀察木霉TP100726菌株菌落形態(tài)隨時間變化的情況。細(xì)心地將菌絲挑散開，小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。 制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 取5支試管， μg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液及去離子水，得到從100 μg/mL~800 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)管。管號1000 μg/ml葡萄糖（ml）H2O（ml）葡萄糖濃度C（g/L）00100119228346464582 酶活測定方法[19~21]FPA測定： ml適當(dāng)稀釋的粗酶液，加入pH mol/ ml，混勻后加入16 cm新華濾紙條，空白對照中加入1ml DNS，于50℃保溫1 h（先預(yù)熱5 min），然后加入1 ml DNS沸水浴7 min，流水冷卻至室溫，用蒸餾水定容至10 ml，在540 nm處測定OD值，根據(jù)吸光度從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的葡萄糖含量，根據(jù)葡萄糖生成量計算酶活。實(shí)驗(yàn)中酶活力定義（IU）：每克培養(yǎng)基中木霉TP100726號菌株每分鐘產(chǎn)生的葡萄糖的微摩爾數(shù)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 觀察結(jié)果 菌株長勢觀察菌落（）初為白色，致密，圓形，向四周擴(kuò)展，后從菌落中央產(chǎn)生綠色孢子，中央變成綠色。分生孢子（）呈綠色，為橢圓球狀，菌絲呈不規(guī)則分枝形狀。 酶活計算公式 （公式2）y為葡萄糖含量的數(shù)值（由標(biāo)準(zhǔn)曲線和所測OD值計算可得），N為粗酶液稀釋倍數(shù)，n為微摩爾數(shù)與摩爾數(shù)之間換算關(guān)系，為106，10為緩沖液所用體積與固體質(zhì)量之間比值， 60為反應(yīng)時間60min，1000為y的單位從g/L換算成g/ml。 濾紙酶活編號麩皮木糖渣豆粉結(jié)果11（20%）1（10%）1（0%）212（20%）2（1%）313（30%）3（2%）42（40%）125223623173（60%）1383219332K1K2K3R10（原始配方）60%00 CMC酶活編號麩皮木糖渣豆粉結(jié)果11（20%）1（10%）1（0%）212（20%）2（1%）313（30%）3（2%）42（40%）125223623173（60%）1383219332K1K2K3R10（原始配方）60%00從以上兩表中可以看出，麩皮、木糖渣、豆粉三因素對纖維素酶活的影響因素大小順序?yàn)椋簽V紙酶活中，麩皮木糖渣豆粉，CMC酶活中，木糖渣麩皮豆粉。從均值來看，兩種酶活中均表現(xiàn)出培養(yǎng)基固體物質(zhì)最優(yōu)配比為麩皮60%，木糖渣20%，豆粉1%。但原配方中沒有這種組合，為了能更準(zhǔn)確的確定最佳配比，仍需再次做一組培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行對比。3 纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)原料 木霉TP100726菌株所產(chǎn)纖維素酶粗酶液，由所有發(fā)酵料混合浸取所得。pH 檸檬酸(ml)(ml)60604080269413107 實(shí)驗(yàn)方法 測定方法.葡萄糖測定方法：水解液中葡萄糖的測定采用由山東科學(xué)院生物研究所研發(fā)的SBA40E生物傳感分析儀進(jìn)行測定。木糖渣酶活： 木糖渣為底物的酶活定義：每克培養(yǎng)基中木霉TP100726菌株每小時產(chǎn)生的葡萄糖的微摩爾數(shù)。計算方法： （公式4）T為SBA40E生物傳感分析儀制定的數(shù)值 N為稀釋倍數(shù)。計算方法：纖維素轉(zhuǎn)化率=葡萄糖質(zhì)量*100/木質(zhì)素質(zhì)量 （公式5） 粗酶液稀釋倍數(shù)的確定將粗酶液稀釋至50倍、100倍、200倍、400倍。C、50176。C、60176。（2） 酶的熱穩(wěn)定性取40 ml稀釋后的酶液，分裝于5個試管中，分別置于45176。C、55176。C恒溫水浴鍋中進(jìn)行保溫3 h， ml酶液，測定在各個溫度下保溫過的酶的FPA和CMC酶活。（3） 酶最適pH值在室溫條件下，配置不同pH值的緩沖液，、在最適的反應(yīng)溫度下，測定不同pH值對酶活力的影響。C下恒溫
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