【正文】 同料液比（1:1:11:1:8）對(duì)木糖渣糖化的影響， mol/L，酶解溫度50176。C。C、55176。溫度分別設(shè)置為45176。酶解48 h后取樣測(cè)定水解液中葡萄糖濃度。考察水解pH對(duì)酶解的影響。 粗酶液糖化木糖渣條件初步研究（1）木糖渣糖化的最適pH mol/L，料液比1:10，酶解溫度50176。（4） 酶的pH值穩(wěn)定性將粗酶液放入不同pH值的緩沖液中，混勻后封口于50176。以酶活最高的那個(gè)溫度下所得到的測(cè)定值為參照，其他溫度下測(cè)得的酶活力與最高值相比。C、60176。C、50176。C下測(cè)定酶液的FPA和CMC酶活。C、55176。 酶學(xué)性質(zhì)研究（1） 酶液最適溫度將合適稀釋倍數(shù)的酶液分別在45176。纖維素轉(zhuǎn)化率：定義為糖化木糖渣中所產(chǎn)生的葡萄糖的質(zhì)量占所加木質(zhì)纖維素的量的百分率。即每毫升酶液每小時(shí)產(chǎn)生葡萄糖的微摩爾數(shù)乘以浸提比。測(cè)定方法如下：準(zhǔn)確吸取稀釋適當(dāng)?shù)臉悠?5 μL注入到已經(jīng)定好標(biāo)的生物傳感分析儀中，數(shù)據(jù)結(jié)果換算成樣品中葡萄糖再乘以稀釋倍數(shù)，計(jì)算出水解液中葡萄糖。 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 緩沖液配制不同pH的檸檬酸緩沖液。但由于各種原因，本實(shí)驗(yàn)來不及做重復(fù)實(shí)驗(yàn)了，這些數(shù)據(jù)只有留待下屆學(xué)生繼續(xù)完成?？梢猿醪秸J(rèn)為木糖渣可以代替20%的稻草粉。由此可見，豆粉對(duì)纖維素酶活的影響較小。由以上可得OD值和酶活的直接計(jì)算公式 (公式3） 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果本次正交實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谴_定培養(yǎng)基中麩皮、木糖渣、豆粉和稻草粉這幾種物質(zhì)的最優(yōu)配比，以得出木糖渣代替稻草粉的最大量。： 木霉TP100726菌株生長情況培養(yǎng)時(shí)間生長情況24h局部有極少量白色菌絲，大部分培養(yǎng)基裸露48h白色菌絲量增加，形成塊狀，但菌絲量仍較少，無孢子72h白色菌絲布滿培養(yǎng)基表面，呈棉絮狀，其上長有一層綠色孢子96h培養(yǎng)及表面布滿綠色孢子，只可見少量白色菌絲96h以后培養(yǎng)基中滿是綠色孢子，無菌絲 菌絲及孢子形態(tài)以葡萄糖濃度（g/L）為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，： 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 （公式1）x為OD值，y為葡萄糖含量，單位為g/L。菌落周圍有白色菌絲的生長帶。即每毫升粗酶液每分鐘產(chǎn)生葡萄糖的微摩爾數(shù)乘以緩沖液浸提比。CMC 酶活測(cè)定： ml適當(dāng)稀釋粗酶液， ml由pH % CMC緩沖液，空白對(duì)照中加入1 ml DNS，50℃保溫30 min（先預(yù)熱5 min），然后加入1 ml DNS沸水浴7 min，流水冷卻至室溫，定容至10 ml，540 nm處測(cè)定OD值，根據(jù)吸光度從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的葡萄糖含量，根據(jù)葡萄糖生成量計(jì)算酶活。分別吸取上述不同濃度的葡萄糖溶液1 ml，DNS試劑1 ml，混合均勻，沸水浴加熱7 min，取出，用水冷卻，用去離子水定容至10 ml，置分光光度計(jì)上540 nm處測(cè)定光密度值，以空白管(0管)做對(duì)照。最后置顯微鏡下進(jìn)行觀察。 霉菌形態(tài)觀察用乳酸石碳酸棉蘭染色液對(duì)木霉TP100726菌株進(jìn)行染色并觀察，首先于潔凈載玻片上滴一滴乳酸碳酸棉蘭染色液，再用解剖針從霉菌菌落的邊緣取少量帶有孢子的菌絲置于染色液中。（5） 酶活。無機(jī)離子組成：3%(NH4)2SO4 ，1%KH2PO4固液配比 :1:， 裝料比: 正交試驗(yàn)（1）設(shè)計(jì)正交表 正交實(shí)驗(yàn)各因素與水平因素麩皮木糖渣豆粉11（20%）1（10%）1（0%）22（40%）2（20%）2（1%）33（60%）3（30%）3（2%）（2）在超凈工作臺(tái)里，將培養(yǎng)基放入，紫外滅菌15min，然后無菌操作接入一環(huán)孢子，放于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 粗酶液的制備 當(dāng)菌株培養(yǎng)一定天數(shù)后，用檸檬酸緩沖液按1:10的固液比浸提3小時(shí)，然后4000r/min離心10min，取上清即為粗酶液?；A(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：60%麩皮，40%稻草粉，3%(NH4)2SO4 ，1%KH2PO4固液配比 :1: ，裝料比: 。UV美國Millipore公司冰箱BCD207AK合肥美菱股份有限公司烘箱DV600YAMATO SCIENTIFIC CO，LTD.電熱恒溫水浴鍋HSQ3上海智誠分析儀器制造有限公司pH儀RHS3C上海鵬順科學(xué)儀器有限公司恒溫振蕩搖床智誠ZHWY103D上海智誠分析儀器制造有限公司離心機(jī)TGL－16B上海安亭科技儀器廠80176。 1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)80℃~100℃烘至恒重的分析純葡萄糖100 mg，置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100 mL，充分混勻后，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩液和B液慢慢混合，制成pH=5的緩沖液。：A液：，溶于720ml去離子水中。麩皮：市場(chǎng)購置，粉碎至40~60目，備用。 發(fā)酵原料來源木糖渣：由河南濮陽研光鵬程生物制品有限公司提供。具體包括研究固體基質(zhì)替代后固體發(fā)酵所產(chǎn)纖維素酶的最適溫度、最適pH、溫度穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性及糖化木糖渣的情況，為探索合理利用木糖渣，使工業(yè)廢料變廢為寶提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)即要對(duì)工業(yè)菌株所產(chǎn)纖維素酶的最適溫度、最適pH、溫度穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性及糖化木糖渣的情況進(jìn)行研究。 纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)pH值和溫度是影響纖維素酶活力的重要因素，是酶制劑應(yīng)用中的主要參數(shù)[11]。由于已經(jīng)過稀酸水解，此種纖維素資源結(jié)晶度低，更容易被菌體利用和被纖維素酶水解，所以它也是一種優(yōu)質(zhì)的纖維素資源。本論文采用的是一株木霉TP100726菌株，它屬于一種未知的綠色木霉。目前工業(yè)上用來生產(chǎn)纖維素酶的微生物多為絲狀真菌，其中工業(yè)產(chǎn)纖維素酶 80% 來源于木霉屬和曲霉屬。植物、動(dòng)物、微生物體內(nèi)都能夠產(chǎn)生纖維素酶，且其主要來源是微生物。纖維素酶中的外切β葡聚糖酶（簡(jiǎn)稱C1），降解纖維素分子末端的β1,4糖苷鍵，產(chǎn)生纖維二糖；內(nèi)切β葡聚糖酶（簡(jiǎn)稱CX），隨機(jī)地降解纖維素分子內(nèi)部的β1,4糖苷鍵，產(chǎn)生大量具有