免疫熒光雙染和細胞化學(xué)dab染色步驟(參考版)
2025-06-10 21:17本頁面
【正文】 。(可以12分鐘)1室溫下晾干，用中性樹膠封片。雙蒸水漂洗1min，然后將細胞爬片經(jīng)70%、80%、95%、100%、100%乙醇 各1～2min 梯度脫水。(12分鐘就夠了染得太淺要再染!) 雙蒸水漂洗后，%HCl70%Ethanol（乙醇），作用1min 以分色。新鮮配制DAB 顯色液，滴加后作用3～5min，置于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。滴加山羊抗鼠的IgG 抗體fitc多聚體，37℃孵育30min。陰性對照片此步用PBS 替代一抗。PBS 洗5min。（若是要檢測的抗原表達于胞膜，此步可考慮省略） % Triton X100，加3%H2O2 孵育10min。注釋：﹡一般來說，兩種二度抗體來自同一物種進行雙/多標記﹡﹡當用生物素標記的二度抗體時，在進行復(fù)染色（步驟7）前，應(yīng)首先用熒光標記
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