【正文】 凍干后稱重計算得率。 冰凍干燥是先將生物大分子的水溶液冰凍，然后在低溫和高真空下使冰升華，留下固體干粉。繼續(xù)透析直到檢查無色為止。檢查是否透析干凈 取白色比色磁盤，加入燒杯溶液1滴，再加入Nessler試劑1滴，搖勻。裝入透析袋，置于盛有50ml水的小燒杯中，使袋內(nèi)外的液面處于同一水面上，透析15分鐘，此時可使鹽類通過半透膜進入水中。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。使用時，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時，袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi)將袋漲破。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中，若長時間不用，可加少量NaN2，以防長菌?？上扔?0％乙醇煮沸1小時，再依次用50％乙醇、 mol/ mol/L EDTA溶液洗滌，最后用蒸餾水沖洗即可使用。操作（1）透析袋準備：商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為23 mm～50 mm不等。若發(fā)生混濁，可靜置1日，取上清液使用。應(yīng)用時取母液150ml，加10％氫氧化鈉溶液700ml。用力振蕩7－15分鐘，至碘的棕色開始轉(zhuǎn)變時，混合液溫度升高，將此瓶侵入冷水內(nèi)繼續(xù)振蕩，直到棕色的碘轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色的碘化鉀汞液為止。此外也可用葡萄糖凝膠G25或G50過柱的辦法除鹽，所用的時間就比較短。前者透析后樣品的終體積較小，所需時間較長，鹽不易除盡。三、IgG的脫鹽原理 凡鹽析產(chǎn)品所獲得的粗蛋白質(zhì)中均含有硫酸銨等鹽類，這些將影響以后的純化，所以純化前均應(yīng)除去，此過程稱為“脫鹽”。為了進一步純化，操作(3)可重12次。加完后4℃放置20min，以3000r/min離心15min，α，β球蛋白在上清液中，沉淀為IgG。（3） 。加完后在4℃放置15min，以3000r/min離心10min，清蛋白在上清液中，沉淀為球蛋白。棄去沉淀（沉淀為纖維蛋白質(zhì)），在上清液中為清蛋白、球蛋白。加完后應(yīng)在4℃放置15min，使之充分鹽析（蛋白質(zhì)樣品量大時，應(yīng)放置過夜）。用皮頭滴管吸取飽和硫酸銨溶液，邊滴加邊攪拌于血漿溶液中，使溶液的最終飽和度為20％（應(yīng)加入飽和硫酸銨溶液多少毫升？），用滴管邊加邊攪拌，是為防止飽和硫酸銨溶液1次性加入和攪拌不均勻造成局部過飽和的現(xiàn)象，使鹽析達不到預(yù)期的飽和度，得不到目的的蛋白質(zhì)。用蒸餾水稀釋至1000ml。取該混合液50ml，用蒸餾水稀釋至1000ml。試劑與器材（1） 飽和硫酸銨溶液：取化學(xué)純（NH4）2SO4800g,加蒸餾水1000ml，不斷攪拌下加熱至5060℃，并保持數(shù)分鐘，趁熱過濾，濾液在室溫中過夜，又結(jié)晶析出，即達到100％飽和度。嚴格講，混合兩種不同溶液時，混合后的總體積并不等于前兩種體積之和，而上式中按相等于計算的，所以會產(chǎn)生誤差。在已知鹽析出某種蛋白質(zhì)成分所要達到的飽和度時，可按下列公式計算出應(yīng)加入飽和硫酸銨溶液的量：V=V0（C2C1）/(100C2) 或V=V0（C2C1）/(1C2)式中 V0—蛋白質(zhì)溶液的原始體積； C2—所要達到的硫酸銨飽和度； C1—原來溶液的硫酸銨飽和度； V—應(yīng)加入飽和硫酸銨溶液的體積。飽和度可以根據(jù)情況用下述兩種方法計算。實際工作中將飽和硫酸銨溶液的飽和度定為100％或1。因此，現(xiàn)在所指的鹽析法實際上多為硫酸銨鹽析法。因為硫酸銨有許多其他鹽所不具備的優(yōu)點，如在水中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；溶解度大，25℃；溶解度的溫度系數(shù)變化小，在0～30℃范圍內(nèi)溶解度變化不大，如，25℃，即767g/L，0℃ mol/L，即676 g/L。鹽析法就是通過控制鹽的濃度，使蛋白質(zhì)混合溶液中的各個成分分步“鹽析”出來，達到分離目的蛋白質(zhì)。而當(dāng)鹽濃度繼續(xù)增加到某一濃度時，蛋白質(zhì)又變得不溶而自動析出，這種現(xiàn)象稱為“鹽析”。鹽析法是粗分離蛋白質(zhì)的重要方法之一。IgG是動物和人體血漿的重要成分之一。血清析出后，用吸管吸取上層血清置于另一試管，若不清亮或帶有血細胞，應(yīng)離心，將上清移于另一試管中，加蓋冷藏備用。操作 將剛采集的血液直接注入試管，將試管傾斜放置，使血液形成一斜面。（二）血清的制備：血清是全血不加抗凝劑自然凝固后析出淡黃清亮液體。推動注射器時速度切不可太快，以免起氣泡造成溶血。為避免溶血，在采血時所用的注射器、針頭及盛容器要干燥清潔；采出的血液要沿管壁慢慢注入盛容器內(nèi)。由于血液中許多化學(xué)成分在血漿（清）和血細胞內(nèi)的分布不同，有的差別很大，因而在血液分析中常需分別測定血漿（清）和血細胞中的成分含量。也可從胸骨劍突尾端和腹部平面成30176。穿刺部位也可以選在左側(cè)面水平方向進針，左手在胸骨兩側(cè)向下按壓，使心臟位置受限，右手持注射器在兔胸腔前后壁中點的第三肋間刺入。采血所用針頭不要太細，一般用6號針頭，針刺部位從中央動脈末端開始，不要在近耳根部采血。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動脈的末端，沿著與動脈平行的向心方向刺入動脈，即可見血液進入針管。手術(shù)法分離頸靜脈，可用注射器直接采血，或安置導(dǎo)管，反復(fù)采血。耳緣靜脈采血方法是：將兔固定，拔（或剪）去耳緣靜脈局部的被毛，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈擴張，用針頭刺入耳緣靜脈末端，血液即流出。表3 動物血容量和允許采血量單位：mL/kg 動物小鼠大鼠家兔雞貓狗猴豬山羊綿羊乳牛馬Vv注：V—全血量平均值，v—一次最大安全采血量常見動物的全身總血量和一次允許采血量見表3。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。（一）血液的采取 動物采血法 采集血液是進行常規(guī)檢查或某些生物化學(xué)分析的需要，采血方法的選擇，主要決定于實驗的目的、所需血量及動物種類。血液中各成分的生化分析結(jié)果是了解機體代謝變化的重要指標(biāo)。EB廢液要經(jīng)過處理才能丟棄，較容易的方法是：／mL以下，室溫放置數(shù)小時。故可在凝膠中不加EB。注意：EB為強致癌劑，使用時一定要戴手套。（6）在254nm紫外光燈下觀察電泳結(jié)果，并可將凝膠置于紫外透射儀的玻板上，打開紫外燈，用配有近攝接圈和紅色濾光片的照相機，采用全色膠卷，50～60cm距離，根據(jù)條帶深淺，曝光 10~20 s。（5）接通電泳槽和電泳儀，注意DNA向正極移動，加樣端要接負極。（4）樣品液和標(biāo)準相對分子質(zhì)量DMA各40μg，加入10μL溴酚藍指示劑，混勻后，用微量加樣器（移液槍或注射器）將樣品加入樣品孔中，槍頭不可碰孔壁。（3）室溫下置30~40min使瓊脂糖完全凝固，小心取出梳子，撤除膠槽兩端膠帶，將膠槽置于電泳槽中，TBE，使液面高于膠面1mm。置三角瓶中，按1％TBE。 水平電泳槽，多功能電泳儀，微量加樣器，層析冷柜，凝膠成像系統(tǒng)含工作站操作（l）洗凈有機玻璃制膠內(nèi)槽，兩端用膠帶封嚴，置水平位置備用。（3）EB: EB 10mg加水2mL成5mg/mL水溶液，EB為強致癌物，配制時要戴一次性手套。H2O溶于水，定容至 100 mL，用時稀釋10倍。通常用EB染色，電泳結(jié)果可在紫外燈照射下觀察和拍照。DNA的瓊脂糖凝膠電泳多采用平板型水平電泳裝置。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì)，不帶電荷。天然瓊脂（agar）是一種多聚糖。270～275　nm的強吸收，提示有污染的酚存在。Cl中，其A　260/A　～。Cl中，其A　260/A　～。在緩沖溶液中，可獲得比在水中更為正確、可靠的測定值，這是因為A　260/A　280比值受pH的影響很大，pH較低時引起A　260/A　280值的降低，并且降低了對蛋白污染的靈敏度?！ol/L　NaOH1　mmol/L　EDTA液清洗比色杯，然后以無RNase的蒸餾水淋洗。以緩沖液為溶劑的吸收系數(shù)可能與以水為溶劑時