【正文】 其他費(fèi)用包。同時指導(dǎo)了多名博士生、碩士生以及本科生完成學(xué)位論文研究工作，所指導(dǎo)的博士生畢業(yè)論文獲 2022 年度全國百篇優(yōu)秀博士論文。作為國家“ 863”項目— —“葡萄糖異構(gòu)酶的蛋白質(zhì)工程” 的主要完成者，他獲得 2022 年安徽省高?？茖W(xué)技術(shù)進(jìn)步一等獎、 2022 年中國高等教育科學(xué)技術(shù)二等獎。技術(shù)專長和主要工作業(yè)績所涉及的二級學(xué)科為生物化學(xué)與分子生物學(xué)、生物物理學(xué)等、研究領(lǐng)域分支為結(jié)構(gòu)生物學(xué)和蛋白質(zhì)晶體學(xué)、主要研究方向為生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系，主要涉及天然生物毒素生物學(xué)基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.功能的結(jié)構(gòu)生物學(xué)基礎(chǔ)研究、造血干細(xì)胞以及重要疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因組研究、以及其它具有重要生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)和酶作用機(jī)制的結(jié)構(gòu)生物學(xué)基礎(chǔ)研究，蛋白質(zhì)工程及基于結(jié)構(gòu)的分子設(shè)計研究等。第二節(jié) 項目負(fù)責(zé)人基本情況一、企業(yè)法定代表人主要工作經(jīng)歷1989 年 7 月—1996 年 9 月任阜陽市住房資金管理中心科員、副主任1996 年 10 月—2022 年 12 月任安徽萬和物業(yè)發(fā)展有限公司董事長1998 年 1 月—2022 年 3 月任阜陽市萬惟保健品有限公司總經(jīng)理2022 年 3 月 至今任安徽*****生物技術(shù)有限公司董事長技術(shù)專長、創(chuàng)新意識、開拓能力及主要工作業(yè)績基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.二、項目技術(shù)負(fù)責(zé)人主要工作經(jīng)歷1986 年 9 月至今在中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)從事生命科學(xué)學(xué)術(shù)研究與高等教育（1989 年任副教授、1995 年任教授、1996 年任博士研究生導(dǎo)師），并在美國普渡大學(xué)生物科學(xué)系作為訪問副教授（1993 年 3 月至 6 月）和副研究員(1995 年 5 月至 1996 年 5 月)。公司的經(jīng)營宗旨是：以技術(shù)為基礎(chǔ)，生產(chǎn)系列高精尖生物酶制劑，成 為我國酶制劑產(chǎn)品技術(shù)改造及生產(chǎn)基地，實現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益和社會效益“ 雙贏” 。公司還將以中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院為科技依托，發(fā) 展一系列高技術(shù)含量的酶種如普魯蘭酶、堿性蛋白酶、啤酒復(fù)合酶、真菌淀粉酶、乳酸酶、溶菌酶等，并爭取以此帶動國內(nèi)的酶制劑生產(chǎn)企業(yè)趕上國外同行業(yè)水平。建成投產(chǎn)后，年均含稅銷售收入可達(dá) 萬元，銷售稅金及附加 1109 萬元，總成本費(fèi)用 4601 萬元，利潤總額 2690 萬元?；蛑亟M葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.第五章 項目法人基本情況第一節(jié) 企業(yè)概況安徽*****生物技術(shù)有限公司是由中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實業(yè)總公司、民營投資方共同投資組建而成的股份制高新技術(shù)企業(yè)，由位于阜陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)的研發(fā)生產(chǎn)基地及位于合肥高新技術(shù)開發(fā)區(qū)的對外窗口構(gòu)成，主要從事酶制劑的生產(chǎn)、銷售和基因工程產(chǎn)品的技術(shù)開發(fā)。三、主要原輔材料來源本項目所需的生產(chǎn)原材料主要為天然農(nóng)副產(chǎn)品。6H2O、戊二醛、明膠等。7H2O、K2HPO4按年設(shè)計生產(chǎn)能力為 300 噸固定化葡基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.萄糖異構(gòu)酶計算，全年需麩皮 4800 噸，需玉米 720 噸，需淀粉酶 48 噸。6H2O %，酵母膏 %，添加劑適量，121℃蒸汽滅菌 30 分鐘，冷卻至 37℃?zhèn)溆茫蛔ⅲ蝴熎に庖海蝴熎? 水=1:8，麩皮加水后 1Kg/cm2 蒸汽蒸煮 1 小時，冷卻至 85℃左右，調(diào) ，加 %α淀粉酶，8590℃保溫液化 610 小時，板框壓濾得麩皮 酶解液。7H2O %，K2HPO43H2O %，CoCl3H2O %，F(xiàn)eSO4 %，瓊脂 2%，蒸 餾水配， 121℃蒸汽滅菌 30 分鐘；種子罐培養(yǎng)基：麩皮酶解液（折光 ）98%，玉米面%，豆餅粉 %，MgSO4 （見附件 552）基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.第二節(jié) 原、輔材料供應(yīng)一、主要培養(yǎng)基配方菌種配養(yǎng)基：可溶性淀粉 2%，KNO3 %，NaCl %，MgSO4噪聲治理：設(shè)計中選用噪聲較低的設(shè)備，提高安裝精度以降低噪音；車間通風(fēng)等設(shè)備均選用低噪音風(fēng)機(jī)，風(fēng)機(jī)座采用防震措施。生活污水經(jīng)化糞池處理與生產(chǎn)污水一道排入開發(fā)區(qū)綜合排水管道，通過管道排入污水處理場。廢水處理：采用分流制，根據(jù)污水性質(zhì)的不同，按照清污分流，分別排放的原則。第十二節(jié) 空壓本項目實施后需壓縮空氣為 100m3/min，需新增 40m3/min空氣壓縮機(jī) 3 臺，20m 3/min、10m3/min 空氣 壓縮機(jī)各 1 臺。第十一節(jié) 給排水安徽*****生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)、生活用水通過阜陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)供水系統(tǒng)提供，供水水質(zhì)符合 GBB5745—85 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)，水壓為 。屋頂風(fēng)機(jī)和軸流風(fēng)機(jī)均采用玻璃鋼低噪聲、防爆、阻燃型風(fēng)機(jī)?；蛑亟M葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.備料間、發(fā)酵主車間、提取精制包裝等生產(chǎn)車間和附屬房屋均采用散熱器采暖。主要生產(chǎn)車間室內(nèi)冬、夏季溫度表 3—2序號 車間名稱 冬季室內(nèi)溫度（℃ ） 夏季室內(nèi)溫度（℃ ）1 備料間 16 ≤302 發(fā)酵主車間 16 ≤303 提取精制包裝 16 ≤304 成品庫 5 ≤305 其它 18 ≤30一、采暖采暖熱媒采用 70—95℃熱水，由熱力站房供給。在本項基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.目建設(shè)中擬自建變電所一座，安裝 800KVA 變壓器兩臺、100KVA 變壓器一臺；同時按生產(chǎn)工藝要求，增加相 應(yīng)的配電設(shè)備和線路。考慮保證生產(chǎn)不間斷和一些重要負(fù)荷（如消防及發(fā)酵崗位）的用電，已申請供電部門提供雙回路電源，一用一備?？紤]貨物品種、運(yùn)輸距離等因素，廠外可采用鐵路、公路混合運(yùn)輸方式，廠內(nèi)運(yùn)輸則以叉車、自動傳輸帶為主的運(yùn)輸方式。運(yùn)輸量及運(yùn)輸方式：本項目實施后全年運(yùn)輸量為 12022 噸。本項目生產(chǎn)主廠房擬采用框架結(jié)構(gòu)形式，具有施工周期短，基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.造價低等優(yōu)點(diǎn)。在滿足生產(chǎn)工藝同時嚴(yán)格執(zhí)行國家現(xiàn)行的有關(guān)規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)，并充分考慮與周圍建筑的協(xié)調(diào)，力求建成一個環(huán)境優(yōu)美，又具有時代特征的新穎的企業(yè)形象。開發(fā)區(qū)地勢平坦，地質(zhì)優(yōu)良，地基承載能力強(qiáng)，適宜于興辦各類工商業(yè)項目。1998基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.年通航以來，已開通北京、廣州、合肥、黃山等航線。境內(nèi)淮河、潁河、泉河、茨淮新河等６條通航水道可入長江、東海，是中原通往華東的水運(yùn)要塞。京九鐵路阜陽編組站是京九線上最大的鐵路樞紐，自動化程度居亞洲之首。二、交通條件阜陽交通便捷，四通八達(dá)?；讟?gòu)造屬華北凹陷南緣，工程地質(zhì)土質(zhì)為粘土、亞粘土、亞沙土及部分淤泥加人工填土，容許承載力為 160 至 260kpa。其中砂姜黑土占68%，有機(jī)質(zhì)含量 克／公斤，含氮 克／公斤，速效磷 11毫克／公斤，速效鉀 150 毫克／公斤。該地區(qū)為松散巖系孔隙水分布區(qū)，含水層顆粒較細(xì)，厚度較大，坡度平緩，水量豐富，水質(zhì)優(yōu)良，埋藏淺，便于開發(fā)利用。大于 0℃的活動積溫多年平均 ℃；大于10℃的活動積 溫多年平均 ℃，常年平均氣溫 ℃，年日照時數(shù) 2200～2500 小時，無霜期 220～230 天，日照時數(shù)長，無霜期長，適合大豆，小麥、棉花、水稻等多種水旱作物種植。（1）地形地形平坦開闊，地面標(biāo)高一般為 28－31 米，最低 17 米，最高 38 米，地形總趨勢為西北高、東南低，地形坡降為 。周圍是潁上、阜南、臨泉、界首、太和等縣。47′54″，北緯 32176。水文、地質(zhì)、氣象資料阜陽市地處淮北平原的腹地、安徽省西北部。阜陽市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)具有良好的交通條件，京九鐵路南北過境， 105 國道橫貫東西，市客運(yùn)中心站、鐵路貨運(yùn)站坐落在開發(fā)區(qū)行政區(qū)域內(nèi)，與阜陽飛機(jī)場相毗鄰。4C 級阜陽民航機(jī)場可起降波音 73麥道 82 飛機(jī)。東連京滬高速公路，西接京珠（海）高速公路的界阜蚌高速公路一期工程竣工，二期工程正在建設(shè)。大京九鐵路穿越 2 縣 3 區(qū)，與漯阜、濉阜、淮阜、商阜四條鐵路在阜境內(nèi)構(gòu)成“米” 字型布局。開 發(fā)區(qū)管委會把改善投 資環(huán)境為開發(fā)區(qū)工作的重中之重，出臺了《關(guān)于優(yōu)化投資環(huán)境的規(guī)定》，深受進(jìn)區(qū)企業(yè)的歡迎。開發(fā)區(qū)擁有精干、高效的管理和服務(wù)機(jī)構(gòu)?；蛑亟M葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.第六節(jié) 廠址選擇及建設(shè)條件一、建廠條件廠址的地理位置本項目建設(shè)地點(diǎn)位于阜陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。根據(jù)項目實施進(jìn)度安排，將在 12 個月內(nèi)完成其余項目建設(shè)，包括研發(fā)及品控中心樓的建設(shè)，生產(chǎn)所需配套設(shè)備、儀器的購置及安裝調(diào)試，以及正式投產(chǎn)前的試生產(chǎn)等工作。目前主要在進(jìn)行配套設(shè)施建設(shè)及配套設(shè)備的制作、安裝工作。以上設(shè)備總計人民幣 萬元，其中進(jìn)口部件均由國內(nèi)經(jīng)銷商處采購，不需外匯結(jié)算。自動化控制系統(tǒng)合計 180 萬元。詳見下表。選用的設(shè)備具有較高的自動化水平，實現(xiàn)生產(chǎn)過程技術(shù)參數(shù)的程序化控制，減少人為因素干擾。0－4℃ 條件下貯藏。并用稀堿保持 ；（11）洗滌：用自來水浸泡洗滌 2 小時，每隔 20 分鐘換新水，并用稀堿保持 ；（12）干燥：離心機(jī)將濕酶甩至含水約 60％左右，置納倫篩上于 45℃下 熱風(fēng)干燥，并不斷翻動，至含水 15％左右，取出并測酶活。6H2O，然后盤管進(jìn)汽升溫至 70℃，保溫 10 分鐘后，速冷卻至水溫；（7）絮凝：用酸調(diào)發(fā)酵液的 pH 至 ，邊攪拌邊加入殼聚糖溶液，至完全絮凝。基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.二、生產(chǎn)工藝流程工藝流程生產(chǎn)過程將嚴(yán)格按照 ISO9000 質(zhì)量管理體系并參照 GMP生產(chǎn)管理體系進(jìn)行生產(chǎn)。固定化葡萄糖異構(gòu)酶的制備，采取自行研制的高分子交聯(lián)劑和戊二醛結(jié)合，可提高固相化酶的通透性和固相化程度，從而進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化能力?；蛑亟M葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.第二節(jié) 采用的工藝技術(shù)路線與技術(shù)特點(diǎn)一、工藝技術(shù)來源及先進(jìn)性基因重組葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)主要包括菌種的擴(kuò)培、發(fā)酵、絮凝、脫水、混合、成型、交聯(lián)、干燥、 貯藏等 過程，其工藝技術(shù)及設(shè)備的先進(jìn)性主要體現(xiàn)如下：因置換型鏈霉菌基因工程菌株 M1033WZ 的構(gòu)建，實現(xiàn)了基因重組葡萄糖異構(gòu)酶熱穩(wěn)定性的提高，從而在工藝上可提高反應(yīng)溫度 10℃左右，進(jìn)而提高果葡糖漿的產(chǎn)量 15%?；蛑亟M葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.第三章 建設(shè)方案第一節(jié) 項目的產(chǎn)能規(guī)模及建設(shè)的主要內(nèi)容安徽*****生物技術(shù)有限公司年產(chǎn) 300 噸基因重組葡萄糖異構(gòu)酶項目選址為阜陽市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)，建設(shè)嚴(yán)格遵照工程優(yōu)質(zhì)、布局合理、技術(shù)超前、生產(chǎn)環(huán)保的方針進(jìn)行。 該項成果正在申報國家發(fā)明專利。 “表達(dá)M1033GI 的突變酶 GIG138P 的基因工程菌株 M1033WZ 及其構(gòu)建方法”已 經(jīng)申請國家 發(fā)明專利，并已獲 得 PCT 國際專利受理。此新方法在鏈霉菌染色體研究領(lǐng)域中尚未見報導(dǎo)。雙抗性負(fù)篩選（tsr + neo）方法的運(yùn)用首先構(gòu)建帶有neo 抗性的置 換型同源重組質(zhì) 粒，通過neo 抗性的負(fù)篩選來解決鏈霉菌基因置換時篩選工作量大的問題。利用基因敲除和置換精確修飾鏈霉菌染色體技術(shù)本項目利用同源重組技術(shù)，把帶有篩選基因的質(zhì)粒片斷的堿變性形式作為同源重組單元引入野生型 M1033 染色體 DNA 的特定片段上，敲除了原有的 GI 基因。根據(jù)查新報告（見附件 41），本項目的主要創(chuàng)新點(diǎn)和技術(shù)難點(diǎn)如下：雙突變體酶 GI（G138PG247D）的構(gòu)建技術(shù)雙突變體酶的構(gòu)建，使困擾葡萄糖異構(gòu)酶研究和生產(chǎn)領(lǐng)域多基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.年的野生型菌株所產(chǎn)的葡萄糖異構(gòu)酶熱穩(wěn)定性和酶活力難以充分滿足需要的難題得以解決，為利用基因工程技術(shù)改造葡萄糖異構(gòu)酶創(chuàng)造了條件。IT 進(jìn)行比 較如下：序號 指標(biāo)名稱 單位 Sweetzyme174。產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)序號 項 目 理化指標(biāo)1 酶活力（60 目） 6000 單位2 形狀 不規(guī)則桿狀，直徑 3 色澤 棕色4 含水 1218%5 比重 6 膨脹率 倍7 轉(zhuǎn)化能力 噸成品糖漿/公斤成品 酶8 保存性 05℃下保藏 3 個月，酶活損失 10%左右9 最適 pH 10 熱穩(wěn)定性 最適反 應(yīng)溫度 68℃11 金屬離子影響Cu2+、Fe2+、Ca2+對酶活力 發(fā)揮不力；Mg2+、Co2+可促 進(jìn)轉(zhuǎn)化基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.與國內(nèi)、外同類產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)比較本項目產(chǎn)品系國內(nèi)首創(chuàng)，填補(bǔ)國內(nèi)空白，國內(nèi)目前無同類產(chǎn)品。產(chǎn)品的各項 性能指標(biāo)在國內(nèi)屬先進(jìn)水平，可以用于果葡糖漿的大規(guī)模生產(chǎn)。（見附件 443）2022 年 10 月 28 日至 12 月 28 日，中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院委托蚌埠明星果糖有限責(zé)任公司（原蚌埠果糖廠）進(jìn)行固定化葡萄糖異構(gòu)酶大柱轉(zhuǎn)化實驗。建議盡快實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。二、成果的專利情況目前項目共獲得 3 項國家發(fā)明專利：“SM33GI 的突變酶GIG138P 及一種提高 GI 熱穩(wěn)定性的突變 方案” （專利號）、“一種葡萄糖異構(gòu)酶的 247 位單突變體酶和138，247 位雙突變體酶及其構(gòu)建方法”（專 利號 ）、“表達(dá) M1033GI 的突變酶 GIG138P 的基因工程菌株 M1033WZ基因重組葡萄糖異構(gòu)酶工程產(chǎn)業(yè)化項目資金申請報告.及其構(gòu)建方法”(專利號：) ，其中 “表達(dá) M1033GI 的突變酶 GIG138P 的基因工程菌株 M1033WZ 及其構(gòu)建方法”已獲得 PCT 國際專利受理。