【正文】 端粒酶 (telomerase) 77 ? 端粒酶 RNA (human telomerase RNA, hTR) ? 端粒酶協(xié)同蛋白 (human telomerase associated protein 1, hTP1) ? 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 (human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 人類端粒酶的組成 78 DNA聚合酶復(fù)制子鏈 進(jìn)一步加工 端粒合成完成 。 ? 末端 DNA序列是多次重復(fù)的富含 G、 T堿基的短序列。 74 ? 端粒（ telomere）是指真核生物染色體線性 DNA分子末端的結(jié)構(gòu)部分，通常膨大成粒狀。 (與原核生物不同 ) 73 真核生物染色體DNA是線形結(jié)構(gòu)。 ? 岡崎片段長度約為 n 135bp(一個(gè)核小體所含DNA的量 ) ? 隨從鏈合成過程中 DNApolα 與 DNApol ? 之間的轉(zhuǎn)換頻率大。PCNA水平也是檢驗(yàn)細(xì)胞增殖的重要指標(biāo)。 DNApol ? DNApol ? DNApol ? DNApol ? 68 ? 增殖細(xì)胞核抗原 (PCNA)—— 在復(fù)制起始和延長中起關(guān)鍵作用。 在復(fù)制過程中起校讀、修復(fù)和填補(bǔ)缺口的作用。 延長子鏈的主要酶，有解螺旋酶活性。 66 多 起點(diǎn)、 雙 方向 真核生物： 從起點(diǎn)開始，以雙向等速進(jìn)行，一個(gè) DNA分子上有許多個(gè)特定的復(fù)制起點(diǎn)。 復(fù)制有時(shí)序性 ，即復(fù)制子以分組方式激活而不是同步啟動(dòng)。 圖 1 1 4 1 線病毒 D N A 復(fù)制的單鏈取代模型 ( 仿 B . L ew i n : 《 G E N E S 》Ⅵ , 1 9 9 7 ， Fi g 1 4 . 1 3 ) 第五節(jié) 真核細(xì)胞 DNA的復(fù)制 ? 真核細(xì)胞中染色體 DNA的復(fù)制是通過許多獨(dú)立的復(fù)制子（復(fù)制元）來完成的，每個(gè)復(fù)制子都有固定的復(fù)制起點(diǎn)，采用雙向復(fù)制； ? 染色體 DNA為線性分子，各復(fù)制子不一定同時(shí)活化，但在細(xì)胞的一個(gè)分裂周期內(nèi)只能復(fù)制一次； ? 復(fù)制的調(diào)控機(jī)制尚不清楚； ? 對(duì)真核細(xì)胞 DNA的復(fù)制研究常以感染宿主細(xì)胞的病毒（ SV40）復(fù)制為基礎(chǔ)，因?yàn)閮烧叩膹?fù)制有相似之處。 的合成 3 39。 以單鏈為模板 5 39。 末端反向重復(fù) 順序配對(duì)，形 5 39。 3 39。 時(shí)一條單鏈被 + 置換出 5 39。 復(fù)制達(dá)到末端 5 39。 3 39。 復(fù)制叉的 5 39。 3 39。 在左側(cè) 5 39。 3 39。 ? 線性雙鏈 DNA復(fù)制的末端補(bǔ)齊： ? 腺病毒利用末端蛋白代替 RNA引物； ? 真核生物染色體的末端依賴端粒酶的特殊功能； 線狀 D N A 5 39。 如腺病毒 （ Adenovirus） 、φ29 DNAs、 脊髓灰質(zhì)病毒 （ poliovirus)。 進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制的 DNA分子類型： ? 真核 rDNA的擴(kuò)增 ； ? 細(xì)菌 F因子 DNA的轉(zhuǎn)移 ； ? λ噬菌體 裂解途經(jīng)的復(fù)制 ； ? φX17 M1 G4等病毒的復(fù)制； 如： φX174為單鏈環(huán)狀 DNA噬菌體 ，為單正 +鏈，其復(fù)制第一步是合成一條互補(bǔ)的負(fù) 鏈產(chǎn)生雙鏈環(huán)；第二階段復(fù)制進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制。 （ 3）不需 RNA引物，在正鏈 3’－ OH上延伸； （ 4）可形成多聯(lián)體（ concatemer ） 。 在滾環(huán)復(fù)制中，先導(dǎo)鏈借助模板環(huán)的滾動(dòng)復(fù)制產(chǎn)生環(huán)狀分子拷貝。 ： RNA酶 水解引物； 空缺由 DNApolⅠ 催化合成 DNA填補(bǔ)； DNA連接酶 連成完整的子鏈 等 。 ⑶ 拓?fù)涿?、 SSB的參與。 1. 去除引物，填補(bǔ)缺口： 57 ? 在 DNA連接酶 的催化下，生成最后一個(gè)磷酸酯鍵，將岡崎片段連接起來，形成完整的 DNA長鏈。 每一終止順序?qū)δ骋环较蛞苿?dòng)的復(fù)制叉來說是特異的； ? ter順序有一個(gè) 23bp的區(qū)域 ， 在體外可導(dǎo)致復(fù)制的終止 ，但其功能顯示了一定的方向性； ? 終止需要 tus(terminus utilization substance)基因的產(chǎn)物 Tus(36kD)， Tus能識(shí)別 ter保守順序 ， 并阻止復(fù)制叉繼續(xù)前進(jìn)； ? terTus復(fù)合物可能通過抑制螺旋酶 來封閉復(fù)制叉的通路 實(shí)行終止 。 ?在 DNA聚合酶 Ⅲ 的作用下，領(lǐng)頭鏈 合成 10002022個(gè)核苷酸后， 隨從鏈 開始合成，崗崎片段的長度 為 10002022個(gè)（大腸桿菌） 54 ? 原核生物基因是環(huán)狀 DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn) (ter)處匯合。 ? 回環(huán)模型：復(fù)制體中，后隨鏈模板形成一個(gè)回環(huán)，使環(huán)中 RNA引物和岡崎片段的合成方向與前導(dǎo)鏈一致，以適應(yīng)雙鏈在同一復(fù)制體上進(jìn)行復(fù)制。片段的形成是因?yàn)?DNA中 U的混入，被尿嘧啶 N糖苷酶切斷所致。 后隨鏈的合成過程 ? 不連續(xù)復(fù)制模型： 1968年日本的岡崎等提出，做了 2個(gè)實(shí)驗(yàn)（脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和脈沖追蹤實(shí)驗(yàn)）驗(yàn)證，復(fù)制出的 DNA片段長約10002022nt。 （二）復(fù)制的延長過程：領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制，隨從鏈不連續(xù)復(fù)制 *半不連續(xù)復(fù)制：在 DNA的雙向復(fù)制中，其中 先導(dǎo)鏈 是沿著復(fù)制叉進(jìn)行延伸，為連續(xù)復(fù)制， 后滯鏈 是逆復(fù)制叉方向進(jìn)行不連續(xù)復(fù)制，每次合成的 DNA為一個(gè)崗崎片段（約 10002022nt）， DNA的這種復(fù)制方式稱為半不連續(xù)復(fù)制。 其化學(xué)本質(zhì)是 dNTP以 dNMP的方式逐個(gè)加入引物或延長中的子鏈上 ， 磷酸二酯鍵不斷生成 。 3 5 3 5 引物 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 Dna B Dna C SSB 解鏈?zhǔn)且粋€(gè)高速的反向旋轉(zhuǎn)，其下游勢(shì)必發(fā)生打結(jié)現(xiàn)象，因而需要 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶參與。端自由羥基（ 339。 表 1 1 4 在 O r i C 上前引發(fā)所需的六種蛋白蛋白 功能 對(duì)蛋白質(zhì)的要求D n a A ( S ) 協(xié)同結(jié)合于 9 bp 和 13 bp 重復(fù)順序2 0 4 0 單體D n a B ( F , S ) 結(jié)合于 D n a A ，提供解旋酶活性12 六聚體D n a C ( F , S ) 和 D n a B 形成復(fù)合體 六個(gè)單體HU 組蛋白樣蛋白，激發(fā)復(fù)合體形成～ 5 個(gè)雙體G y r a s e 旋轉(zhuǎn)酶，解除正超螺旋，引入負(fù)超螺旋催化s s B ( F ) 穩(wěn)定單鏈 化學(xué)劑量，四聚體( S ) : 慢停突變； （ F ）：快停突變47 ① 含有 解螺旋酶 (DnaB蛋白 ) 、 DnaC蛋白 、 引物酶 (DnaG蛋白 )和 DNA復(fù)制起始區(qū) 域的復(fù)合結(jié)構(gòu)被稱為 引發(fā)體 (primosome) 。 ③ 解螺旋酶（ helicase, DnaB）六聚體在 DnaC蛋白協(xié)同下，結(jié)合到開鏈的中間復(fù)合物上，解開雙鏈，形成兩條單鏈 DNA，并逐步置換出 DnaA蛋白。 20~40個(gè) DnaA蛋白各帶一個(gè) ATP相互靠近與DNA形成類似核小體的結(jié)構(gòu) 。 一、 大腸