snp檢測(cè)技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-08 18:24本頁(yè)面
【正文】 ? （ 8）質(zhì)譜技術(shù)是 “ 一管式操作 ” ，即反應(yīng)體系在生化學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中始終在一個(gè)試管內(nèi)反應(yīng)，沒有多次轉(zhuǎn)移，這樣就減少被污染的概率。根據(jù) SNP位點(diǎn)的不同，探針將結(jié)合不同的 ddNTP，從而具有不同的分子量，質(zhì)譜儀即可檢測(cè)出這種分子量差異，從而實(shí)現(xiàn) SNP分型的目的。將 制備的樣品分析物與芯片基質(zhì)共結(jié)晶后在質(zhì)譜儀的 真空管經(jīng)強(qiáng)激光激發(fā)，核酸分子解吸附為單電荷離 子，電場(chǎng)中離子飛行時(shí)間與離子質(zhì)量成反比，通過(guò) 檢測(cè)核酸分子在真空管中的飛行時(shí)間而獲得樣品分 析物的精確分子量，從而 檢測(cè)出 SNP位點(diǎn)信息。特別適合于對(duì) 全基因組研究 發(fā) 現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，或者是有限數(shù)量的研究位點(diǎn)已經(jīng)確定的 情況。 ? 基于 MassARRAY174。 但DHPLC檢測(cè)對(duì)所用試劑和環(huán)境要求較高 ,容易產(chǎn)生誤差 , 不能檢測(cè)出純合突變 。 SNPs的有無(wú)最終表現(xiàn)為色譜峰的峰 形或數(shù)目差異 ,依據(jù)此現(xiàn)象可很容易從色譜圖中判斷出突變的 堿基 。 變性高效液相色譜 ( DHPLC) 原理： 目標(biāo)核酸片段 PCR擴(kuò)增 ， 部分加熱變性后 ， 含有突變 堿基的 DNA序列由于錯(cuò)配堿基與正常堿基不能配對(duì)而形成異 源雙鏈 。 MALDITOF 原理： 是將變性的單鏈 PCR產(chǎn)物通過(guò)與硅芯片上 的化合物共價(jià)結(jié)合后 , 在硅芯片上進(jìn)行引物的退火 , 延伸反應(yīng) , 突變部位配對(duì)的堿基與正常配對(duì)的堿基 不相同。 特點(diǎn)： 基因芯片具有信息量大和自動(dòng)化程度高的 突出優(yōu)點(diǎn)。 特點(diǎn)： 可以得到 SNP 的類型及其準(zhǔn)確位置等 SNP分 型所需要的重要參數(shù)。 4 . 變性高效液相色譜 ( DH PLC )法等等 DNA測(cè)序法 ? 直接測(cè)序是最容易實(shí)施的 SNP檢測(cè)方法。 2 . DNA芯片檢測(cè) 。因?yàn)樘禺愐? 物在一種基因型中有擴(kuò)增產(chǎn)物 ,在另一種基因型中沒 有擴(kuò)增產(chǎn)物 ,用凝膠電泳就能夠很容易地分辨出擴(kuò)增 產(chǎn)物的有無(wú) ,從而確定基因型的 SNP。 由于不同的 DNA 片
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