【正文】 龔興國. 多糖的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)研究進(jìn)展. 中國生化藥物雜志, 2001, 22, 5254.[9] 周國華。 何小燕. 食用菌多糖研究開發(fā)進(jìn)展. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2004, 11, 203204.[7] 王常青。 劉冠卉. 食用真菌多糖提取條件的優(yōu)化及其還原力的比較. 食品科學(xué), 2010, 31, 140144.[6] 周國英。diger, H. Chemical biology of the sugar code. ChemBioChem, 2004, 5, 740764.[4] 張樹政. 糖生物學(xué): 生命科學(xué)中的新前沿. 生命的化學(xué), 1999, 19, 103106.[5] 陳欣。nez‐Barbero, J.。, S.。 Siebert, H. C.。 李信輝。參考文獻(xiàn)[1] 孟思。鈣、鎂、鉀也可以很好的促進(jìn)其生長，銅和鋅（在很低的濃度上）對(duì)于菌絲體的繁殖也是必須的。 Evans, 1984)。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上的生長非常差（負(fù)對(duì)照），意味著Psathyerella atroumbonata在生長過程中需要一些痕量元素(Griffin, 1994。盡管這兩種元素的含量不同，但是它們?cè)诮y(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異并不大（P=）。 for Volvariella volvacea)。類似的毒性報(bào)告見于Humfeld and Sugihara (1952。這說明Psathyerella atroumbonata的生長并不顯著需要鈷和錳。鈉離子所致的生長最差支持了Sykes an d Porter (1973)所提出的只有在海洋中生長的真菌才在生長與代謝中需要鈉離子的結(jié)論。Fasidi and Jonathan (1994)在對(duì)Volvariella esculenta的研究中也得到了類似的結(jié)論。這說明所有的大量元素在菌體生長中都是需要的，盡管依賴程度并不相同（表4）。 Kapoor,1976)。 for Pleurotus tuberregium)得到的并不相同，這表明了Psathyerella atroumbonata有獨(dú)特的營養(yǎng)需求。此結(jié)果與Chandra and Purkayastha (1977。本研究中所用的各種碳氮比都有效促進(jìn)了菌絲的生長（表3）（P=）。硫酸根離子是一個(gè)大基團(tuán)，在過膜過程中可能有一定的困難，所以難以支持其生長(Garraway amp。這一結(jié)果甚至低于對(duì)照組。Madunagu (1988)在Pleurotus squarrosulus的研究中曾得到類似的結(jié)果。 Blair, 1982)。這兩種組分對(duì)于Psathyerella atroumbonata生長的相似促進(jìn)作用可能源于他們的碳水化合物和蛋白質(zhì)組分 (Alberghina, 1973。緊隨其后的是麥芽提取物和L色氨酸。肌醇是實(shí)驗(yàn)中效果最差的碳源，對(duì)于菌種生長沒有已知的重要作用；而效果如此之差可能是由于這種菌體沒有可以代謝該種糖醇的酶。甘露糖，次佳碳源，是一種葡萄糖的異構(gòu)體，可以在代謝過程中轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?Morrison and Boyd, 1992)。 Jandaik amp。這種對(duì)葡萄糖的喜愛可能是因?yàn)檫@種糖更容易通過代謝產(chǎn)生細(xì)胞能量(Garraway amp。Purkayastha, 1977。 Hong, 1978。 Fasidi amp。大型食用真菌對(duì)于葡萄糖的利用已經(jīng)為前人所報(bào)道(Fasidi amp。碳源的單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示葡萄糖是最佳的碳源（表1）。本實(shí)驗(yàn)使用了兩種對(duì)照，一組含有所有痕量元素，一組不含有任何痕量元素。本實(shí)驗(yàn)使用了兩種對(duì)照，一組含有所有大量元素，一組不含有任何大量元素。. 大量元素單因子實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有葡萄糖10g，硝酸鈉2g。取用之前兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中最佳的碳源和氮源，即葡萄糖和酵母提取物，打造1:1的碳氮比(Fasidi amp。對(duì)照組選用沒有加入任何氮源的培養(yǎng)基。. 氮源單因子實(shí)驗(yàn)，葡萄糖10g。 Chandra amp。對(duì)照組選用沒有加入任何碳源的培養(yǎng)基(Kadiri amp。. 碳源單因子實(shí)驗(yàn)。在30177。將基礎(chǔ)培養(yǎng)基分裝入250立方厘米的容器中，并用鋁箔封口，121攝氏度下滅菌15分鐘，并確保每種處理都有三個(gè)生物重復(fù)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基是錐形瓶中1L去離子水中加入各種營養(yǎng)物的產(chǎn)物。這種真菌的營養(yǎng)需求是通過菌絲體干重法(Fasidi amp。Psathyerella atroumbonata的子實(shí)體采集自伊巴丹大學(xué)植物園的科特迪瓦欖仁的朽木之上。盡管一些尼日利亞蘑菇的食用和潛在藥用價(jià)值得到了一定的關(guān)注(Oso, 1977b)，但是它們的培養(yǎng)和商業(yè)化生產(chǎn)則沒有得到足夠的重視。而在它廣泛生長的地方，那些知道它的價(jià)值的人則常常為了它起爭執(zhí)。 Illoh, 1998 )。 Oso, 1977a。 Nicholson, 1996)。這種真菌在自然界中廣泛分布。 Makinen, 1977。Psathyerella atroumbonata(Pegler)是一種可食用真菌，屬于擔(dān)子菌門傘菌目鬼傘科(Alexopolous, Mims amp。最佳的碳氮比是2:3，最差的碳氮比是5:1。山梨糖和肌醇對(duì)于生長的效力最小。附錄畢業(yè)論文相關(guān)外文文獻(xiàn)翻譯碳源、氮源和無機(jī)離子對(duì)于Psathyerella atroumbonata(Pegler)，一種尼日利亞食用真菌，生長的影響[17]摘要：我們研究了簡單有機(jī)物、無機(jī)物和復(fù)雜組分對(duì)于Psathyerella atroumbonata(Pegler)，一種尼日利亞食用真菌，生長的影響。在單因子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本文通過正交實(shí)驗(yàn)得到杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)率最高的培養(yǎng)基配方應(yīng)為半乳糖 30 g/L，蛋白胨 5 g/L，磷酸二氫鉀 3 g/，按照上述條件可得到的杏鮑菇胞外多糖得率為 177。依據(jù)三個(gè)平均值的變化，可以得到最佳的條件組合為A3B1C3D2，也即在半乳糖濃度為30g/L，蛋白胨濃度為5g/L，磷酸二氫鉀濃度為3g/，杏鮑菇胞外多糖的產(chǎn)量最大，得率最高。 最佳水平3553 上表中，K1，K2，K3分別為所在元素在三個(gè)水平上得到的多糖得率之和，k1，k2，k3則為所在列元素的多糖得率的平均值，R值為平均值的極差。 177。 R 177。 177。 k3 177。 177。 k2 177。 177。 k1 177。 177。 K3 177。 177。 K2 177。 177。 K1 177。 H3571 177。 F3091 177。 D3052 177。 B2572 177。其中，前三者分別采用之前的單因子實(shí)驗(yàn)所得到的最優(yōu)碳源、氮源和無機(jī)離子，依次為半乳糖、蛋白胨和磷酸二氫鉀，而pH值則依據(jù)單因子實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果。比如3水平4因素表就只有9行，即需要九次實(shí)驗(yàn)，遠(yuǎn)小于遍歷試驗(yàn)的81次；同理可推算出因素水平越多，試驗(yàn)的精簡程度會(huì)越高。正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)主要依據(jù)正交表。 圖38. 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)于杏鮑菇菌絲體質(zhì)量的影響圖39. 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)于杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)量的影響 正交試驗(yàn)正交試驗(yàn)(Orthogonal experiment)是研究多因素多水平的又一種設(shè)計(jì)方法，它是根據(jù)正交性從全面試驗(yàn)中挑選出部分有代表性的點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)，這些有代表性的點(diǎn)具備了“均勻分散，齊整可比”的特點(diǎn)。 122893177。 116398177。 105709177。 94039177。 84351177。表35. 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)于杏鮑菇菌絲體生物量及多糖得率的影響培養(yǎng)時(shí)間菌絲生物量 g/L多糖得率 mg/L73809177。而在第八點(diǎn)的拐點(diǎn)之后，我們看到10兩天的多糖產(chǎn)量相近且均高于之前與之后的時(shí)間。有條形圖可以明顯的看出，對(duì)于菌絲體生長而言，11天是最合適的長度，過長的時(shí)間可能導(dǎo)致菌絲體快速老化，果斷的時(shí)間菌絲體還有繼續(xù)生長的潛力和空間。 圖36. 不同pH值對(duì)于杏鮑菇菌絲體質(zhì)量的影響圖37. 不同pH值對(duì)于杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)量的影響 培養(yǎng)時(shí)間單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間單因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表35，表中分別顯示了其生物量和多糖提取率。 8920177。 8138177。 9079177。 7315177。表34. 不同pH值對(duì)于杏鮑菇菌絲體生物量及多糖得率的影響pH值菌絲生物量 g/L多糖得率 mg/L 7791177。可以看出杏鮑菇的菌絲體基本上對(duì)于pH值并不十分敏感，生物量和多糖得率在不同pH條件下相差并不顯著，菌絲體生長地更好，且多糖得率也是最高的。 圖35. 不同無機(jī)離子對(duì)于杏鮑菇菌絲體質(zhì)量的影響圖31. 不同無機(jī)離子對(duì)于杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)量的影響 pH值單因子實(shí)驗(yàn)pH值單因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表34，表中分別顯示了其生物量和多糖提取率。 Control3813177。 KCl3551177。 CaCl24678177。 KH2PO33264177。 K2HPO34077177。7H2O3794177。因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，KH2PO3將作為最佳無機(jī)離子加入培養(yǎng)基。但在多糖產(chǎn)率方面，鉀離子的效果明顯好于其他兩個(gè)被試離子。大量元素中，我們挑選了鎂離子、鉀離子和鈣離子所謂主要的被試離子，其中鉀離子考慮了其三種主要出現(xiàn)在培養(yǎng)基中的形式。不同無機(jī)離子對(duì)于菌絲體質(zhì)量和多糖產(chǎn)量的影響如條形圖35與36。 760177。 177。 771177。 177。 1710177。 2100177。 177。因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，蛋白胨將作為最佳氮源加入培養(yǎng)基。結(jié)果顯示無機(jī)氮源無法促進(jìn)菌絲體良好地生長，有機(jī)氮源在菌絲體生長方面普遍效果顯著，尤其是酵母提取物和牛肉膏。不同氮源對(duì)于菌絲體質(zhì)量和多糖產(chǎn)量的影響如條形圖33與34。 200177。1000177。 1200177。 177。 1450177。 177。 1600177。 177。 1900177。 1900177。 2100177。 2200177。 177。因此在后續(xù)試驗(yàn)中，半乳糖將作為最佳碳源加入培養(yǎng)基。從碳源單因子實(shí)驗(yàn)的結(jié)果看來，杏鮑菇胞外多糖得率最高的是半乳糖，其次是葡萄糖，再次是乳糖。糖醇類則在菌絲體生長和產(chǎn)多糖兩方面都不具有明顯的優(yōu)勢(shì)。二糖中，多糖產(chǎn)量最高的碳源是乳糖。其中包含有單糖（D木糖，D果糖，D葡萄糖，L阿拉伯糖，D甘露糖，半乳糖，鼠李糖），二糖（乳糖，麥芽糖，蔗糖），多糖（可溶性淀粉，糊精）以及糖醇（D甘露醇，D山梨醇）。不同碳源對(duì)于菌絲體質(zhì)量和多糖產(chǎn)量的影響如條形圖31與32。本文通過單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn)，以期得到胞外多糖產(chǎn)量最高的杏鮑菇液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基配方。生物量的計(jì)算依照如下公式：菌絲生物量（mg/L）=菌絲體干重（mg） / 發(fā)酵液體積（ml） * 1000 杏鮑菇胞外多糖的提取及定量本實(shí)驗(yàn)采用醇沉法提取杏鮑菇胞外多糖，具體的技術(shù)路線為：發(fā)酵液→過濾菌絲體→利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原體積的20%→緩慢加入無水乙醇至原體積，即終體積分?jǐn)?shù)為80%→四攝氏度下冰箱冷藏過夜→離心棄去上清液→將沉淀置于烘箱內(nèi)干燥至恒重→得到醇沉粗多糖。實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見表21。 液體發(fā)酵培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)利用單因子實(shí)驗(yàn)得到的最優(yōu)碳源、氮源、無機(jī)離子和起始ph值四個(gè)因素，各取三個(gè)水平，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。 培養(yǎng)時(shí)間單因子實(shí)驗(yàn)采用采用液體發(fā)酵培養(yǎng)基，將培養(yǎng)時(shí)間依次設(shè)置為112天，制成培養(yǎng)時(shí)間單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，每一配方有三次生物重復(fù)。 pH值單因子實(shí)驗(yàn)采用液體發(fā)酵培養(yǎng)基， 、 、 、 、 ，制成pH值單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，每一配方有三次生物重復(fù)。 無機(jī)離子單因子實(shí)驗(yàn)分別用七水合硫酸，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，氯化鉀，氯化鈣替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的等量無機(jī)離子，其余成分保持不變，制成無機(jī)離子單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，每一配方有三次生物重復(fù)。 氮源單因子實(shí)驗(yàn)分別用蛋白胨，酵母提取物，牛肉膏，硫酸銨，尿素，胰胨，醋酸銨替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的等量氮源，其余成分保持不變，制成氮源單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，每一配方有三次生物重復(fù)。 碳源單因子實(shí)驗(yàn)分別用D木糖，D果糖，D葡萄糖，L阿拉伯糖，D甘露糖，半乳糖，鼠李糖，乳糖，麥芽糖，蔗糖，D甘露醇，可溶性淀粉，D山梨醇，糊精替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的等量碳源，其余成分保持不變，制成碳源單因子實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，每一配方有三次生物重復(fù)。 試驗(yàn)方法 菌種活化將保藏于斜面PDA培養(yǎng)基上的菌種轉(zhuǎn)接于種子培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)9天或至長滿培養(yǎng)基。 液體發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖 30 g/L，酵母提取物 5 g/L，蛋白胨 2 g/L，磷酸二氫鉀 1 g/L，七水合硫酸鎂 1 g/L，pH 自然。 種子培養(yǎng)基：商品PDA培養(yǎng)基（配方：馬鈴薯粉 6 g/L，葡萄糖 20 g/L，瓊脂20 g/L，pH 177。 其他鹽酸，氫氧化鈉，無水乙醇。 供試氮源蛋白胨，酵母提取物，牛肉膏，硫酸銨，尿素，胰胨，醋酸銨。2 材料與方法 主要材料與試劑 生物材料杏鮑菇菌種：購自江蘇省農(nóng)科院。本實(shí)驗(yàn)立足于杏鮑菇卓越的保健功效和正在不斷發(fā)現(xiàn)中的各種生物學(xué)活性，著眼于杏鮑菇液體發(fā)酵產(chǎn)生的胞外多糖產(chǎn)量，通過單因子實(shí)驗(yàn)與正交試驗(yàn)的組合，以期篩選出杏鮑菇液體發(fā)酵胞外多糖產(chǎn)量最高的碳氮源、無機(jī)離子和酸堿度的組合[17]。通過液體深層培養(yǎng)即發(fā)酵的方式生產(chǎn)食用菌菌球，作為食用菌栽培的種子或作為有效成分提取分離及深加工的原料。張俊會(huì)[13]等研究報(bào)道了杏鮑菇發(fā)酵多糖對(duì)亞油酸、菜油氧化以及離體肝臟組織的脂質(zhì)過氧化均有一定抑制作用。在杏鮑菇多糖的生物活性方面，