【正文】 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 淋巴細(xì)胞的制備 protocol: 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 淋巴細(xì)胞的制備 protocol: 5 70%冰乙醇固定，置 4℃ 冰箱保存 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 淋巴細(xì)胞的制備 protocol: 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 Categorization: 1 淋巴細(xì)胞的制備 2 粒細(xì)胞的制備 3 單核細(xì)胞制備 4 骨髓 細(xì)胞中白血病細(xì)胞的制備 5 網(wǎng)織紅細(xì)胞的制備 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 粒細(xì)胞的制備 protocol: 1 用淋巴細(xì)胞分離液對(duì)細(xì)胞進(jìn) 行分層 2 粒細(xì)胞的比重較淋巴細(xì)胞稍 大，因此經(jīng)分離液分離后的 粒細(xì)胞，分層于紅細(xì)胞之上， 分離液的底部 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 粒細(xì)胞的制備 protocol: 3 以吸管慢慢將粒細(xì)胞層吸出， 置另一只離心管內(nèi)，以 5ml的 Hank′s液洗滌三次，每次離 心沉淀 1500rpm， 10min 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 粒細(xì)胞的制備 protocol: 4 在吸取粒細(xì)胞的同時(shí)常附帶一 些紅細(xì)胞，因此需將紅細(xì)胞去 除，加入 ， 30 40s 5 再以 Hank′s液洗滌 2次，即 可獲得純度大于 95%以上的粒 細(xì)胞 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 Categorization: 1 淋巴細(xì)胞的制備 2 粒細(xì)胞的制備 3 單核細(xì)胞制備 4 骨髓 細(xì)胞中白血病細(xì)胞的制備 5 網(wǎng)織紅細(xì)胞的制備 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 1 取肝素 1000u/ml抗凝全血 ,加入 NS 將血稀 釋 ,均在無(wú)菌條件下操作 2 RPMI1640培養(yǎng)液 ,放入 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi) ,將稀釋血加入培養(yǎng) 液中 ,混勻 ,與培養(yǎng)瓶接觸面要大 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 3 放入 37℃ 恒溫箱內(nèi)孵育 3040min, 取出培養(yǎng)瓶 ,將血傾倒掉 ,用 NS培 養(yǎng)瓶輕輕沖洗一次 ,以去掉殘留的 血液 ,這時(shí)培養(yǎng)瓶壁上貼附了大量 的單核細(xì)胞 ,因?yàn)閱魏思?xì)胞具有短 時(shí)培養(yǎng)期內(nèi)貼附快的特 點(diǎn) 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 而其他細(xì)胞沒有這個(gè)特性 ,所以利 用這一特性進(jìn)行短時(shí)培養(yǎng)可獲得 較純的單核細(xì)胞 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 4 將粘附于培養(yǎng)瓶壁上的單核細(xì)胞 消化下來(lái) ,用 %胰 酶消化 10－ 15min,室溫下 ,并不斷搖震 ,以促 使細(xì)胞脫落下 ,單核細(xì)胞的粘附 力很強(qiáng) ,用酶消化往往獲得細(xì)胞 數(shù)少 ,目前亦采用機(jī)械的方法 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 用一橡皮刷 ,伸入培養(yǎng)瓶在瓶壁上 輕擦 ,將細(xì)胞刮取下 ,但切勿用力過(guò) 大 ,造成細(xì)胞損傷過(guò)多 5 脫落下來(lái)的細(xì)胞移入離心管 ,離心沉 淀 1500rpm,5min,再以 NS漂洗 2－ 3 次 ,每次離心 800rpm,2min,以去除碎 片雜質(zhì) 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 6 將細(xì)胞涂片 ,以盯 啶 橙染色 ,置熒 光顯微鏡下觀察形態(tài)和純度 7 將細(xì)胞以 70%乙醇固定 ,置 04℃ 冰箱保存?zhèn)錂z 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 Categorization: 1 淋巴細(xì)胞的制備 2 粒細(xì)胞的制備 3 單核細(xì)胞制備 4 骨髓 細(xì)胞中白血病細(xì)胞的制備 5 網(wǎng)織紅細(xì)胞的制備 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 1 抽取骨髓 2 將 (1000u/ml)抗凝 PBS液中 3 再加入 PBS液稀釋至 4ml 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 4 將稀釋的 4ml骨髓液緩慢加入到盛有 液面之上 ,保持不要混合 5 離心沉淀 2022rpm,20min 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 6 在以上條件下 ,將淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、髓性細(xì)胞 ,白血病細(xì)胞與較大的紅細(xì)胞 ,紅母細(xì)胞在 PBS－ 人類淋巴細(xì)胞分離液中形成一個(gè)界面 7 吸去紅細(xì)胞和紅母細(xì)胞 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 單核細(xì)胞的制備 protocol: 8 以 PBS液洗留下的界面上的細(xì)胞 ,離心 1000rpm,3min 9 棄上清液 ,即可進(jìn)行標(biāo)記染色和流式分析 血液?jiǎn)渭?xì)胞樣品的制備 Categorization: 1 淋巴細(xì)胞的制備